Нові агоністи npr-b

 

ПЕРЕДУМОВА ВИНАХОДУ

По цій заявці проситься на пріоритет на підставі попередньої заявки на видачу патенту США з реєстраційним номером 61/245960, поданої 25 вересня 2009 р.

1. ОБЛАСТЬ ТЕХНІКИ, ДО ЯКОЇ НАЛЕЖИТЬ ВИНАХІД

Даний винахід, головним чином, відноситься до нових сполук, які застосовуються для лікування і профілактики порушень, опосередкованих натрийуретическими пептидами або білками. Більш конкретно, даний винахід відноситься до нових пептидів, фармацевтичним композицій, які містять один або кілька нових пептидів, описаних в цій публікації, і до їх застосування в способах лікування або профілактики очних хвороб, таких як глаукома, гіпертензія очі і оптичні нейропатії, серцево-судинне захворювання, хвороба нирок, захворювання легень та інші порушення, опосередковані натрийуретическими пептидами або білками.

2. ОПИС ВІДОМОГО РІВНЯ ТЕХНІКИ

Натрийуретические пептиди (NP) утворюють сімейство циклічних пептидних гормонів, які вперше були описані у зв'язку з їх участю в регуляції натрійурезу, діурезу і регуляції кров'яного тиску. До теперішнього часу відкрито чотири натрийуретича або натрийуретический пептид головного мозку (BNP; SEQ ID NO: 2), натрийуретический пептид C-типу (CNP; SEQ ID NO: 3) і уродилатин (SEQ ID NO: 4) (див. фіг. 1; і Cho et al., 1999, Heart Dis. 1: 305-328). Всі NP синтезуються у вигляді препрогормонов, які активуються протеолітичних перед розщепленням їх вивільненням у кровоток. NP зв'язуються з рецепторами натрийуретических пептидів (NPR), групою з 3 різних пов'язаних з мембранами рецепторів з гуанилилциклазной активністю (Pandey 2005, Peptides 26: 901-932).

ANP вперше відкрито в якості фактора, що знижує кров'яний тиск, в гомогенатах передсердь щурів у 1981 році (de Bold 1981, Life Sci. 28: 89-94). Пре-pro-ANP людини (SEQ ID NO: 5) містить 151 амінокислоту і зберігається після відщеплення N-кінця у вигляді складається з 126 амінокислот про-ANP (SEQ ID NO: 6), переважно в передсердних гранулах. Розтягнення серця внаслідок загальної об'ємної перевантаження індукує швидке вивільнення ANP з місць зберігання. Після секреції в кров'яне русло C-кінцева частина про-ANP відщеплюється атриальной пептидазой з утворенням біологічно активної складається з 28 амінокислот формі ANP (SEQ ID NO: 1) (Yan 2000, Proc. Natl. Acad. Sci. 97: 8525-8529). Решта N-кінцева частина може бути розщеплена на 3 різних гормону, тобто тривало діючий натрийуретический пептид (LANP, амінокислоти 1-30; SEQ ID NO: 7 9) (Vesely 2004, Eur. J. Clin. Invest. 34: 674-682).

Після відкриття BNP в головному мозку свиней в якості чинника, який виявляє активність, розслаблюючу гладку мускулатуру (Sudoh T., 1988, Nature 332: 78), набагато більш високу тканинну експресію виявили в препаратах шлуночків серця (Mukoyama 1991, J. Clin. Invest. 87: 1402-1412), що призвело до висновку про те, що BNP, подібно ANP, є пептидним гормоном серця. Хоча BNP можна виявити в запасних гранулах в передсердях, експресія в шлуночках піддається транскрипционной регуляції (Tamura 2000, Proc. Natl. Acad. Sci. 93: 4239-4244). Синтез пре-pro-BNP індукується розтягуванням стінки серця і призводить до утворення пептиду довжиною 134 амінокислоти (SEQ ID NO: 10), який потім розщеплюється невідомої протеази, утворюючи про-BNP довжиною 108 амінокислот (SEQ ID NO: 11). Додаткове розщеплення вивільняє активний 32-амінокислотний C-кінцевий фрагмент BNP (SEQ ID NO:2) і неактивний 76-амінокислотний N-кінцевий фрагмент, також званий NT-pro-BNP (SEQ ID NO: 12). До теперішнього часу не виявлено відомих варіантів сплайсингу BNP людини.

CNP був виділений з головного мозку свині майже через 10 років після відкриття ANP (Sudoh 1990, Biochem Biophys Res Comm. 168: 863-870). Він експресується, головним чином, в центральній нервовій системі і ендотеліальних какринной функції щодо тонусу судин та росту м'язових клітин. Складається з 126-амінокислот молекула попередника pro-CNP (SEQ ID NO: 13) процессируется внутрішньоклітинної эндопептидазой до зрілого складається з 53 амінокислот пептиду CNP-53 (SEQ ID NO: 14), який є найбільш поширеною формою в головному мозку (Totsune 1994, Peptides 15: 37-40), ендотеліальних клітинах (Stingo, 1992, Am. J. Phys. 263: H1318-H1321) і серце (Minamino 1991, Biochem. Biophys. Res. Comm. 179: 535-542). І в спинномозковій рідині (Togashi 1992, Clin. Chem. 38: 2136-2139) і в плазмі крові людини (Stingo 1992, Am. J. Phys. 263: H1318-H1321) найбільш поширеною формою є CNP-22 (SEQ ID NO: 3), який утворюється з CNP-53 під дією невідомої позаклітинної протеази. На відміну від інших NP в CNP-22 відсутня C-кінцеве видовження 17-амінокислотного циклу (див. фіг. 1).

ANP (SEQ ID NO: 1), BNP (SEQ ID NO: 2) і CNP (SEQ ID NO: 3) мають високо консервативні амінокислотні послідовності у різних видів хребетних (див. фіг. 1; і Cho 1999, Heart Dis. 1: 305-328). NP інактивуються двома різними механізмами, тобто ферментативним розщепленням за допомогою нейтральних ендопептідаз та зв'язуванням з рецептором, відповідальними за кліренс NP (NPR-C; SEQ ID NO: 15), з подальшою интернализацией і внутрішньоклітинним розпадом NP (Stoupakis 2003, Heart Dis. 5: 215-223).

Після відкриття натрийуретических пептидів ANP, BNP і CNP були описані і клониро� Chang 1989 Nature 341: 68-72; Chinkers 1989, Nature 338: 78-83). NPR-A (SEQ ID NO: 16) переважно пов'язує ANP і BNP, в той час як NPR-B (SEQ ID NO: 17) найбільш специфічний для CNP, і NPR-C (SEQ ID NO: 15) пов'язує всі натрийуретические пептиди (Koller 1991, Science 252: 120-123).

Первинні структури NPR-A і NPR-B містять позаклітинний зв'язує ліганд домен, трансмембранний домен, внутрішньоклітинний домен, гомологичний киназе, що містить сайти фосфорилювання, і C-кінцевий гуанілатціклазний домен (огляд в публікації Misono 2005, Peptides 26: 957-68). Останній домен дозволяє класифікувати NPR-A і NPR-B в якості гуанилатциклаз фракції частинок, також відомих як GC-A і GC-B (E. C. 4.6.1.2). Навпаки, в NPR-C відсутні внутрішньоклітинні домени гомології, але з'являється все більше доказів ролі NPR-C не тільки як скавенджер-рецептора для натрийуретических пептидів, але для функціонального інгібують зв'язування з G-білками і фосфоинозитидного обміну (Maack 1987, Science 238: 675-678; Murthy and Makhlouf 1999, J. Товарbiol. Chem. 274: 17587-17592; Anand-Srivastava 2005, Peptides 26: 1044-1059). Відображаючи ступінь гомології послідовностей натрийуретических пептидів, рецептори натрийуретических пептидів проявляють високу ступінь гомології за своїм позаклітинним зв'язує ліганди доменів, при цьому згідно з розрахунками схожість між NPR-A і NPR-B складу� наявності димеру гликозилированних субодиниць рецептора (Fenrick et al. 1994, Mol. Cell. Biochem. 137: 173-182; Kuhn 2003, Circ. Res. 93: 700-709), і після зв'язування відбувається конформаційної зміна, що приводить до активації гуанилатциклазних доменів. Потім активність гуанилатциклаз фракції частинок регулюється фосфорилюванням (дивись огляд у публікації Kuhn 2003, Circ. Res. 93: 700-709). Фосфорилювання NPR є максимальним в основному стані, тоді як після зв'язування ліганду слід дефосфорилирование і подальша десенсибілізація рецептора.

Натрийуретические рецептори експресуються в багатьох тканинах організму. NPR-A, NPR-B і NPR-C присутні в серцево-судинній системі і нирках, при цьому NPR-C є найбільш поширеним підтипом рецепторів, на частку якого припадає 80% експресії NPR в деяких тканинах. NPR-B присутній на особливо високому рівні эпифизе, сім'яниках та яєчниках щурів. Ліганди NPR-A і NPR-B індукують незалежне від ендотелію розширення судин, при цьому ANP і BNP, головним чином, діють на артеріальні судини. Навпаки, мішень CNP, головним чином, є венозна система, за винятком коронарних артерій, розслаблення яких настає у відповідь на введення CNP (Marton et al. 2005, Vascul. Pharmacol. 43: 207-212). Важливо, що індукція гіпотензії за допомогою активації NPR-B вимагає R-A (Wei et al. 1993, Am. J. Physiol. 264: H71-H73; Woods and Jones 1999, Am. J. Physiol. 276: R1443-R1452). Розслаблення гладкої мускулатури допомогою активації NPR-B була виявлена у різних тканинах, включаючи кровоносні судини, сім'яні канальці і матку. Також скорочення тканини трабекулярної мережі очі зменшується при активації рецепторів натрийуретических пептидів, що підтверджує функціональне схожість трабекулярної мережі і гладком'язових клітин (Stumpff and Wiederholt 2000, Ophthalmologica 214: 33-53).

Іншим основним органом-мішенню для натрийуретических пептидів є нирка. Ліганди NPR-A індукують натрійурез і діурез за допомогою подвійного механізму (огляд в Beltowski and Wojcicka 2002, Med. Sci. Monit. 8: RA39-RA52): (1) підвищеної екскреції натрію завдяки зниженому зворотного захоплення іонів натрію в дистальних канальцях, згодом також призводить до утримування більшої кількості води в кінцевій сечі; і (2) розширення підвідних і супутнього звуження відвідних клубочкових капілярів, збільшує швидкість клубочкової фільтрації за рахунок зниження перфузії нирок (Endlich and Steinhausen 1997, Kidney Int. 52: 202-207). На відміну від NPR-A-специфічних лігандів NPR-B-специфічні ліганди не індукують значущого натрійурезу і діурезу і, крім того, проявляють специфічність щодо ре�яким чином збільшуючи потік крові в нирках, але не гломерулярну фільтрацію (Endlich and Steinhausen 1997, Kidney Int. 52: 202-207).

Крім впливу активації NP-рецепторів (NPR) на кров'яний тиск і функцію нирок, сильний вплив натрийуретических пептидів на процеси проліферації в різних типах клітин документально підтверджено в літературі. Антипроліферативні властивості активації NPR документально доведені для гладком'язових клітин судин, фібробластів різного походження, мезангиальних клітин, злоякісних клітин і хондроцитів (огляд в публікації Schulz 2005, Peptides 26: 1024-1034). Щонайменше, у разі VSMC доказ участі фактора транскрипції GAX у регуляції проліферації показало, які внутрішньоклітинні механізми можуть бути залучені в регуляцію росту допомогою NPR (Yamashita et al. 1997, Hypertension 29: 381-387). Незважаючи на те, що зростання тканини, головним чином, регулюється проліферативною активністю, для деяких органів характерно варіювання розміру клітин, що впливає на масу тканини. Це може бути фізіологічним процесом, як під час эндохондриального закостеніння, коли хондроцити дозрівають, піддаючись гіпертрофії, чи патологічним явищем, як у разі гіпертрофії серця, яке часто передує хронічної серцевої недостаточносттвие аномального эндохондриального окостеніння, характеризується зменшенням розміру зони гіпертрофії епіфізарної пластинки росту (Bartels et al. 2004, Am. J. Hum. Genet. 75: 27-34; Tamura et al. 2004, Proc. Natl. Acad. Sci. 101: 17300-17305).

Навпаки, частковий нокаут NPR-B у щурів стимулював гіпертрофію серця, тобто гіпертрофію кардіоміоцитів (Langenickel et al. 2006, Proc. Natl. Acad. Sci. 103: 4735-4740).

Натрийуретические пептиди, що володіють активністю по відношенню до натрійуретичний рецепторів, що пізніше також були виявлені в різних тканинах. Наприклад, ANP відкрито на початку 1980-х років в якості ендогенного діуретичного і судинорозширювального пептиду, основна циркулююча форма якого складається з 28 амінокислот (SEQ ID NO: l). Потім були відкриті інші натрийуретические пептиди, такі як BNP (SEQ ID NO: 2) і CNP (SEQ ID NO: 3). Показано присутність натрийуретических пептидів і їх рецепторів у тканинах ока, особливо в тканинах, залучені в регуляцію внутрішньоочного тиску (ВГД). Наприклад, в очах щурів і кроликів виявлені мРНК ANP, BNP і CNP, а також NPR-A, NPR-B і NPR-C циліарного відростках, сітківці і судинній оболонці (Обід et al. 1987, Curr. Eye Res. 6: 1189-1196; Nathanson 1987, Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 28: 1357-1364; Fernandez-Durango et al. 1995, Exp. Eye Res. 61: 723-729). Подібні результати одержано у разі циліарного відростків бика і культивованих циліарного епітеліальних кЂоров в циліарному епітелії свідчить про те, що вони можуть грати роль в утворенні водянистої вологи.

Крім циліарного відростків рецептори натрийуретических пептидів також були виявлені в тканинах, асоційованих з витіканням водянистої вологи. Сайти зв'язування ANP були локалізовані в поздовжніх волокнах циліарного м'яза морської свинки. (Mantyh et al. 1986, Hypertension. 8: 712-721). В культивованих TM і циліарного м'язових клітинах людини CNP є найбільш сильним та ефективним щодо стимуляції продукції циклічного ГМФ, що свідчить про присутність функціонального NPR-B. Активація такого рецептора знижує індукований карбахолом приплив кальцію. (Pang et al. 1996, Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 37: 1724-1731). Такий результат передбачає, що активація NPR-B повинна викликати розслаблення таких тканин. Дійсно, CNP значимо знижує индуцируемое карбахолом скорочення циліарних м'язів мавп і людини (Ding and Abdel-Latif, 1997, Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 38: 2629-2638). Зміна скоротливої здатності TM і циліарного м'яза може впливати на можливість витікання водянистої вологи.

Показано, що циклічний ГМФ і сполуки, які підвищують рівень циклічного ГМФ в тканинах ока, такі як донорів окису азоту, знижують ВГД (Nathanson 1988, Eur. J. Pharmacol. 147: 155-156; Becker 1990, Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 31: начительно збільшують продукцію циклічного ГМФ, було висунуто припущення, що вони також знижують ВГД. За останні 20 років було показано, що натрийуретические пептиди є високо ефективними в якості засобів, що знижують ВГД. Наприклад, різні дослідники незалежно показали, що інтравітреальна ін'єкція ANP у кроликів послідовно і значимо знижує ВГД. Такий ефект триває протягом багатьох годин. (Sugrue and Viader, 1986, Eur J Pharmacol. 130: 349-350; Обід et al. 1987, Сигг Eye Res. 6: 1189-1196; Nathanson 1987 Invest Ophthalmol Vis Sei. 28: 1357-1364; Korenfeld and Becker 1989, Invest Ophthalmol Vis Sei. 30: 2385-2392; Takashima et al. 1996, Invest Ophthalmol Vis Sei. 37: 2671-2677). Вплив ANP на ВГД корелює зі збільшенням продукції циклічного ГМФ у райдужній оболонці-циліарному тілі (Korenfeld and Becker 1989, Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 30: 2385-2392). Інтравітреальна ін'єкція BNP (Takashima et al. 1996, Invest Ophthalmol Vis Sci. 37: 2671-2677) або CNP (Takashima et al. 1998, Exp. Eye Res. 66: 89-96) також високо ефективна зниження ВГД. Показано, що крім интравитреальной ін'єкції субкон'юнктивальна (Yang et al. 1997, Chin. J. Ophthalmol. 33: 149-151) або внутрикамерная (Sugrue and Viader 1986, Eur. J. Pharmacol. 130: 349-350; Fernandez-Durango et al. 1999, Eur. J. Pharmacol. 364: 107-113) ін'єкція натрийуретических пептидів також знижує очний тиск. Системне введення ANP кролику (Tsukahara et al. 1988, Ophthalmologica 197: 104-109) або людині (Diestelhorst and Krieglstein 1989, Int. Ophthalmol. 13: 99-101) також знижує ВГД. До сожу�зом, такі сильні і ефективні сполуки, що знижують ВГД, не були розроблені для такого застосування.

Існує потреба в нових агоністах NPR-B, володіють покращеною біодоступність порівняно з виділеними або синтезованими натрийуретическими пептидами, які можна застосовувати для лікування опосередкованих натрийуретическими пептидами порушень, таких як очні порушення, пов'язані з діабетом порушення, судинні порушення, серцеві і серцево-судинні патології, запалення і інші порушення, описані в цій публікації. Нові агоністи NPR-B, композиції і способи згідно з цим винаходу задовольняють таку потребу.

СУТНІСТЬ ВИНАХОДУ

Даний винахід відноситься до нових агоністів NPR-B, також названим у цьому описі миметиками або сполуками, подібними натрійуретичний пептидів, які терапевтично застосовні для зниження внутрішньоочного тиску (ВГД) та лікування інших порушень, при яких активація рецептора натрійуретичного пептиду типу B може бути корисною. Зокрема, винахід відноситься до нових агоністів NPR-B, які активують рецептор натрійуретичного пептиду типу B (NPR-B). Винахід, крім того, отдставлять собою офтальмологічні композиції для застосування в способах лікування або профілактики конкретних очних хвороб, таких як глаукома, переважно завдяки зниженню внутрішньоочного тиску, з використанням таких нових агоністів NPR-B. Альтернативно композиції, пропоновані у винаході, можна застосовувати в способах лікування або профілактики серцево-судинних порушень, захворювання нирок, захворювання легенів, порушень скелета, безпліддя та інших порушень, опосередкованих натрийуретическими пептидами або білками.

Винахід частково засноване на даних, отриманих авторами винаходу, про те, що нові агоністи NPR-B, описані в цій публікації, можуть забезпечувати кращу біодоступність, підвищену хімічну стабільність і підвищену метаболічну стабільність в рідинах або тканинах організму завдяки їх значно зменшеному молекулярного розміру у порівнянні з відомими натрийуретическими пептидами. Деякі варіанти цієї заявки, головним чином, відносяться до нових пептидів, що містять модифіковані амінокислоти, які зв'язуються і активують NPR-B з високою специфічністю, які більш детально описані в цій публікації.

Зокрема, передбачається, що будь-яке обмеження, що обговорюється, у зв'язку з одним варіантом здійснення винаходу, �зобретению можна застосовувати в будь-якому способі згідно винаходу, і будь-який спосіб згідно винаходу можна застосовувати для отримання або застосування будь-якої композиції згідно винаходу.

У використовуваному в цьому описі сенсі термін «агоніст NPR-B» відноситься до нових молекул, описаним у цій публікації, які активують NPR-B з високою ефективністю.

Термін «або» у формулі винаходу використовують для позначення «і/або», якщо чітко не вказано, що він відноситься тільки до альтернативних варіантів або альтернативний варіант взаємно виключений, хоча опис підтримує визначення, яке відноситься до окремих альтернатив і «та/або».

Протягом цього опису термін «приблизно» використовують для вказівки того, що значення включає стандартне відхилення помилки для пристрою та/або способу, що використовується для визначення значення.

У використовуваному в цьому описі сенсі форма однини може означати один чи кілька, якщо явно не вказано інше. У використовуваному у формулі винаходу сенсі у разі поєднання зі словом «містить» слова в однині можуть означати один або більше ніж один. У використовуваному в цьому описі сенсі «інший» може означати, щонайменше, другою або більше.<�одробного опису. Проте слід розуміти, що докладний опис і конкретні приклади, хоча й представляють кращі варіанти здійснення винаходу, наведені тільки в якості ілюстрації, так як різні зміни і модифікації, не відходять від суті і не виходять за рамки обсягу винаходу, будуть очевидні для фахівців в даній області на підставі докладного опису.

КОРОТКИЙ ОПИС ФІГУР

Такі фігури утворюють частина цього опису та включені для того, щоб додатково продемонструвати деякі аспекти цього винаходу. Винахід можна краще зрозуміти при зверненні в одному або кільком таким кресленнями в поєднанні з докладним описом конкретних варіантів, наведеному в цій публікації.

Фіг. 1. Ілюструє аминокислотную послідовність ANP (SEQ ID NO: 1), BNP (SEQ ID NO: 2) і CNP (SEQ ID NO: 3).

Фіг. 2. Ілюструє вплив CNP, ANP, BNP і міні-ANP (SEQ ID NO: 18) на продукцію циклічного ГМФ в клітинах GTM-3. Показано, що клітини GTM-3 експресують NPR-B (Pang et al. 1996, Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 37: 1724-1731). Клітини обробляли CNP (трикутники), ANP (квадрати), BNP (ромби) та міні-ANP (гуртки). Символи представляють середні значення та стандартні відхилення. Найвища концентрація использульзуя логістичне рівняння з 4 параметрами. EC50CNP=38,8 нМ, EC50ANP=1,63 мкМ, EC50BNP=1,18 мкМ, EC50міні-ANP>45 мкМ. Emax (максимальну активацію) кожного з'єднання визначали відносно максимальної активації CNP, тобто Emax CNP=100%, Emax ANP=15%, Emax BNP=20% і Emax міні-ANP=0%.

Фіг. 3. Ілюструє вплив CNP, ANP, BNP і міні-ANP на продукцію циклічного ГМФ в трансфицированних NPR-A-клітинах 293-T. Трансфицированние NPR-A клітини 293-T обробляли CNP (трикутники), ANP (квадрати), BNP (ромби) та міні-ANP (гуртки). Символи представляють середні значення та стандартні відхилення. EC50визначали, використовуючи логістичне рівняння з 4 параметрами. EC50ANP=73,0 нМ, EC50CNP=1,60 мкМ, EC50BNP=1,85 мкМ, EC50міні-ANP=1,54 мкМ.

ОПИС ІЛЮСТРАТИВНИХ ВАРІАНТІВ

Даний винахід частково засноване на виявленні того, що нові агоністи NPR-B, мають поліпшену біодоступність порівняно з відомими натрийуретическими пептидами, застосовні для зниження підвищеного внутрішньоочного тиску та лікування глаукоми. Таким чином, даний винахід, головним чином, відноситься до нових агоністів NPR-B і їх застосування в способах лікування або профілактики порушень, опосередкованих натрийуретическими пептидами або білками. В одному особливо предпочтительЋх хвороб, таких як глаукома, переважно з допомогою зниження підвищеного внутрішньоочного тиску, часто асоційованого з глаукомою, з використанням фармацевтичної композиції, яка містить один або кілька нових агоністів NPR-B, які описані в цій публікації. В інших бажаних варіантах нові агоністи NPR-B, описані в цій публікації, готують у вигляді препарату для лікування інших опосередковуваних натрийуретическими пептидами або білками порушень, таких як серцево-судинні порушення, порушення нирок, порушення легенів, порушення скелета, порушення репродуктивної функції та фіброз.

Відмітною ознакою всіх відомих NP є що складається з 17 амінокислот цикл, який утворюється завдяки внутримолекулярному цистеиновому містку (див. фіг. 1). Вважають, що цілісність циклічної структури NP необхідна для функціональної активності, тобто перетвореною рецептором NP продукції цГМФ. Автори цього винаходу виявили, що деякі лінійні пептиди, такі як нові пептиди, описані в цій публікації, що володіють підвищеної хімічної і метаболічної стабільністю і поліпшеною біодоступність порівняно з відомими NP, приЋ

Даний винахід відноситься до нових агоністів NPR-B, володіє біологічною активністю, яка покращено в деяких аспектах порівняно з біологічною активністю відомих натрийуретических пептидів. Нові пептиди згідно винаходу включають звичайні та незвичайні амінокислоти. Звичайні амінокислоти позначають відповідно їх стандартним трехбуквенним кодами, які вказані в таблиці 1 нижче.

Незвичайні амінокислоти позначають відповідно трехбуквенному кодом або використовуючи іншу скорочення, коли вони присутні в нових агоністах NPR-B згідно винаходу. В таблиці 2, нижче наведено повна назва, трилітерний код або скорочення і структура кожної незвичайної амінокислоти, що зустрічається в послідовностях нових пептидів, описаних в цій публікації.

Таблиця 2
Список скорочень незвичайних амінокислот і інших хімічних структур
НазваСкороченняСтруктура
(S)-2-((S)-3-аміно-2,5-диоксопирролидин-1-іл)-5-гуанид" height="21" width="53" />
рац-2-аміно-4-
морфолинобутановая
кислота
AR-385-017
(S)-2-аміно-3-(2H-
тетразол-5-іл)пропановий
кислота
AR-314-145
рац(1S,2S)-2-
(октилкарбамоил)
циклогексанкарбоновая
кислота
AR-314-171
рац(1S,2S)-2-
(гексилкарбамоил)
циклогексанкарбоновая
кислота
AR-314-170
рац(1R,2S)-2-
октилкарбамоил)
циклогексанкарбоновая
AR-314-169

кислота
(S)-2-(6-октанамидо-1-оксоизоиндолин-2-іл)-3-фенилпропановая кислотаAR-314-172
(S)-2-(5-октанамидо-1,3-диоксоизоиндолин-2-іл)-3-фенилпропановая кислотаAR-385-042
(S,S)-2-(3-метил-3-октаноиламино-2-оксопирролидин-1-іл)-3-фенилпропионовая кислотаAR-314-102
2-(7-октаноил-1-оксо-2,7-діазаспіро
[4.5]дец-2-іл)-3-фенилпропионовая кислота
AR-314-087
1-(3-метилбутил)
піперазин
AR-201-124
циклогептилпирролидин-2-илметиламинES-283-049

(S)-аминотиофен-2-илуксусная кислотаBB727
(R)-ам�h="31" />
2-октилсульфанил-пропіонова кислотаAR-201-073
5-пентилсульфанил-метилоксазол-2-карбонова кислотаAR-201-072
4-(4-бутилтиазол-2-іламіно)бензойна кислотаAR-201-069
4-(5-бутилтиазол-2-іламіно)бензойна кислотаAR-201-068
2-гексиламинооксазол-4-карбонова кислотаAR-201-062
2-гексаноил-аминооксазол-4-карбонова кислотаAR-201-059
3-гексилоксиизоксазол-5-карбонова кислотаAR-201-058
2-гексаноиламино-изоникотин�td align="left">1-карбоксиэтиловий ефірAR-201-049

октановой кислоти
1-карбокси-2-фенілетиловий ефір додекановой кислотиAR-201-048
(R)-2-аміно-4-(пиперидин-1-іл)бутанова кислотаabu(pip)
8-аміно-3,6-диоксаоктановая кислотаAdx
(2,3,4,5,6-пентагидрокси-гексилиденаминоокси)
оцтова кислота
Gluc-Aoa
5-((4S)-2-оксогексагидро-1H-тиено[3,4-d]імідазол-4-іл)пентановая кислота74
адамантан-2-иламин504558
циклопентиламин559
2-((1S,2R,4R)-біцикло[2.2.1]гептан-2-іл)оцтова кислота779

2-фенетилбензойная кислота785
додекановая кислота832
анілін873
октансульфонилхлорид933
гексилхлорформиат1270
3-фенилпропионовая кислота1281
5-фенилпентановая кислота1320
4-циклогексилмасляная кислота1339
3-циклогексил-пропіонова кислота1340
(S)-3,3-диметилбутан-2-амін1381
2-(гексиламино)
оцтова кислота
1625-Ac
1-бензиловий ефір пиперидин-1,2-1695

дикарбоновой кислоти
4-метилциклогексиламин1859
[2-(2-метоксиэтокси)
етокси]оцтова кислота
1888
(1R,2R,4R)-біцикло
[2.2.1]гептан-2-амін
1906
(2-метоксиэтокси)
ацетилхлорид
1913
(1R,2R)-2-(бензилокси)
циклогексанамин
1934
(S)-1,2,3,4-тетрагидронафталин-1-амін2118
(S)-3-метилпиперидин2137
4-(4-метоксифенил)
масляна кислота
2553
(1R,2R,4R)-1,7,7-триметилбицикло[2.2.1]
гептан-2-амін
27972857-Ac

пентагидрокси-гексиламино)
оцтова кислота
циклобутиламин2906
(S)-2-циклопентил-гексанової кислота3218
3-аміно-4-гідроксибензойну кислота3421
1-этилпропиламин3791
(R)-2-метилбутан-1-амін3806
2-этилбутиламин3816
3-(4-бромфенил)
пропіонова кислота
47034734
(1S,2R)-2-аминоцикло-гексанкарбоксамид5116
(1R,2S)-етил 2-аминоцикло-гексанкарбоксилат5118

(1R,2R)-етил 2-аминоцикло-гексанкарбоксилат5119
1-пропилбутиламин5121
(S)-3-аміно-1-этилазепан-2-він5164
декановая кислота5587
(2-бутоксіетоксі)
оцтова кислота
6013
(E)-додец-2-еновая кислота6015
(2S)-2-октилциклопропан-карбонова кислота6056
3-октилсульфанил-пропіонова кислота6057
7-бутилсульфанил-гептановая кислота6058
3-(октан-1-сульфинил)пропіонова кислота6059
3-(октан-1-сульфоніл)пропіонова6059(0)

кислота
рац-6-гидроксидекановая кислота(6071-OH)
рац-7-гидроксидодекано�align="left">5-бутил-2H-піразол-3-карбонова кислота6182
2-пентилбензооксазол-5-карбонова кислота6988
(R)-2-аминобутановая кислотаabu
3-аміно-1-карбоксиметилпиридин-2-вінAcp
(S)-2-((S)-3-аміно-2-оксопирролидин-1-іл)-3-фенилпропановая кислотаAFL
(S)-2-((R)-3-аміно-2-оксопирролидин-1-іл)-3-фенилпропановая кислотаaFL
(R)-2-((R)-3-аміно-2-оксопирролидин-1-іл)-3-фенилпропановая кислотаafL

2-аминоизомасляная>2-аминоиндан-2-карбонова кислотаAic
рац-α-метиллейцинAml
(R)-α-метилпролинAmp
1-амінометил-циклопропанкарбоновая кислотаAmcp
4-аминопиперидин-4-карбонова кислотаApc
4-аміно-1-(2-аминоэтил)пиперидин-4-карбонова кислотаApc(Ae)
4-аміно-1-этилпиперидин-4-карбонова кислотаApc(Et)
4-аміно-1-метилпиперидин-4-карбонова кислотаApc(Me)

азетидин-3-карбонова кислотаAz3
(S)-азетидин-2-карбонова кислотаAze
(R)-азетидин-2-карбонова кислотаaze
β-аланінBal
(S)-β-гомолизинBhk
(2S,4R)-4-(бензилокси)піролідин-2-карбонова кислотаBhp
(R)-β-гомолейцинBle
рац-2-аміно-3-фенилмасляная кислотаBmfcDR
(S)-β-циклогексилаланинCha

циклогептиламинChe
(S)-циклогексилглицинChg
(2S,4S)-4-гидроксипирролидин-2-карбонова кислотаChy
(S)-2-аміно-2-циклопропилуксусная кислотаCpa
(S)-2-аміно-2-циклопентилуксусная кислотаCpg
рац-(3R,4S)-цис-метанпролинCpp
(S)-2-аміно-3-сульфопропановая кислотаCya
(R)-2,4-диаминобутановая кислотаdab

(R)-2-аміно-3-(неопентиламино)
пропановий кислота
dap(1464)
(R)-2-аміно-3-(біс(2-аминоэтил)аміно)
пропановий кислота
dap(6263)2
(R)-2-аміно-3-(біс((1H-імідазол-2-іл)метил)аміно)
пропановий кислота
dap(3846)2
(R)-2-аміно-3-(пиперидин-4-илметиламино)
пропановий кислота
dap(6238)
((R)-2-аміно-4-(диметиламіно)бутанова кислотаdab(Me2)
(S)-2-аміно-3-(диметиламіно)
пропановий кислота
Dap(Me2)
(R)-2-аміно-3-(диметиламіно)
пропановий кислота
dap(Me2)

2-аміно-2-этилмасляная кислотаDeg
2-аминоакриловая кислотаDha
(S)-2,5-дигідро-1H-пірол-2-карбонова кислотаDhp
(R)-2,2-диметилтиазолидин-4-карбонова кислотаDtp
(S)-3,4-дихлорфенилаланинЕааEah
рац-имидазолидин-2-карбонова кислотаEal
(S)-4-метил-2-((S)-6-оксо-1,7-діазаспіро[4.4]нонан-7-іл)пентановая кислотаEam
рац-1-аміно-2,3-дигідро-1H-инден-1-карбонова кислотаEao

2,3-дигідро-1H-індол-2-карбонова кислотаEat
(2S,4S)-4-фенилпирролидин-2-карбонова кислотаEay
(R)-тиазолидин-4-карбонова кислотаEaz
1-аминоцикло-пропанкарбоновая кислотапропановий кислотаEbe
1-аминоцикло-пентанкарбоновая кислотаEca
2-аміно-3-пиперидин-4-илпропионовая кислотаEgg
1-аминоцикло-гексанкарбоновая кислотаEgz
(1S,3R)-3-аминоцикло-гексанкарбоновая кислотаFio

транс-4-(амінометил)цикло-гексанкарбоновая кислотаFir
аминопиперидин-3-илуксусная кислотаFhy
(S)-2-аміно-2-(пиперидин-4-іл)оцтова кислотаFhzFpr
4-аміномасляна кислотаGab
(R)-2-аміно-3-гуанидинопропановая кислотаgdp
(2S,4R)-4-гуанидинопирролидин-2-карбонова кислотаGup
(2S,3S)-3-гидроксипирролидин-2-карбонова кислотаH3p
гексанової кислотаHex

(S)-гомофенилаланинHfe
(S)-2-аминооктановая кислотаHglhgl
(S)-2-аміно-5-метилгексановая кислотаHle
(S)-гомосеринHsc
(R)- гомосеринhse
(2S,4R)-4-гидроксипирролидин-2-карбонова кислотаHyp
пиперидин-4-карбонова кислотаInp
додеканLau
(R)-2-аміно-6-(диметилspan="0">
3-аминометилбензойная кислотаMam

(R)-2-аміно-4-(метилсульфонил)
бутанова кислота
metO2
(S)-мета-хлорфенилаланинMcf
(S)-4-гідрокси-3-йодфенилаланинMiy
(S)-мета-метилфенилаланинMmf
(S)-3-(3-пиридил)аланінMpa
(3-аминофенил)оцтова кислотаMpe
(S)-мета-трифторметил-фенілаланінnar
рац-(2,3-дигидроксипропиламино)
оцтова кислота
Nbhp
4-бутилтиазолNbt
(3-гидроксипропиламино)Nhpr

оцтова кислота
фенетиламиноуксусная кислотаNHfe
(S)-пара-нитрофенилаланинNif
рац-нипекотиновая кислотаNip
(R)-норлейцинnle
(S)-N-метилаланинNma
(S)-N-метиласпарагиновая кислотаNmd
(S)-N-метилфенилаланинNmf
(S)-N-метилизолейцинNmi
(S)-N-метиллизинNmk

(S)-N-метиллейцинNml
(S)-2-аміно-4,4-диметилпентановая кислотаNpg
4,4-диметил-2-метиламинопентановая кислотаSH-112-158
бензиламиноуксусная кислотаNPhe
(S)-4-метил-2-(пропиламино)
пентановая кислота
Npl
(S)-норвалинNva
(R)-норвалинnva
октановая кислотаOcc
октанOct
(2S,3aS,7aS)-октагидро-1H-індол-2-карбонова ке width="90%" border="1" cellpadding="0" cellspacing="0" frame="all">
(S)-3-(2-пиридил)аланінOpa
(S)-орнитинOrn
(R)-орнитинorn
(R)-2-аміно-5-(диметиламіно)
пентановая кислота
orn(Me2)
(S)-ортотрифторфенилаланинOtf
піперазин-1-илуксусная кислотаPaa
(S)-пара-аминофенилаланинPaf
(4-амінометил)
бензойна кислота
Pam
(S)-пара-бромфенилаланинPca
(S)-пара-хлорфенилаланинPcf

(S)-парафторфенилаланинPff
(S)-фенилглицинPhg
(S)-пипеколиновая кислотаPip
(R)-пипеколиновая кислотаpip
(S)-пара-метилфенилаланинPmf
(S)-пара-метоксифенилаланинPmy
(S)-3-(4-пиридил)аланінPpaPpe
(S)-2-аміно-3-(фосфоноокси)
пропановий кислота
Pse
(2S,3R)-2-аміно-3-(фосфоноокси)бутанова кислотаPth

саркозинSar
5-бутилтиазолSbt
(S)-нипекотиновая кислотаSni
(2S,4R)-4-аминопирролидин-2-карбонова кислотаTap
(2S,4R)-4-(диметиламіно)
піролідин-2-карбонова кислота
Tap(2Me)
(2S,4R)-4-ацетамідо width="37" />
(2S,4R)-4-(2-аминоэтиламино)
піролідин-2-карбонова кислота
Tap(Ae)
(2S,4R)-4-(S)-3-аміно-3-карбоксипропанамидо)
піролідин-2-карбонова кислота
Tap(Asp(-))

4-(3-аминопропиламино)
піролідин-2-карбонова кислота
Tap(Ap)
(2S,4R)-4-(3-аминопропанамидо)
піролідин-2-карбонова кислота
Tap(Bal)
(2S,4R)-4-(диэтиламино)
піролідин-2-карбонова кислота
Tap(Et2)
(2S,4R)-4-(этиламино)піролідин-2-карбонова кислотаTap(Et)
(2S,4R)-4-(2-аминоацетамидо)
піролідин-2-карбонова кислота(S)-α-трет-бутилглицин
Tbg
(R)-α-трет-бутилглицинtbg
(2S,4R)-4-фторпирролидин-2-карбонова кислотаTfp

(S)-2-тиенилаланинThi
(S)-3-тиенилаланинThk
(S)-тиазолидин-4-карбонова кислотаThz
(S)-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-3-карбонова кислотаTic
4-амінотіазол-2-карбонова кислотаTnc

Нові агоністи NPR-B згідно винаходу містять загальну аминокислотную послідовність формули I:

B-Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Xaa7-Xaa8-Xaa9-Xaa10-Z(I)

де

B обраний із групи, що складається з H, Rb1-, Rb2-C(O)-, Rb2-S(O2)-, Rb3-Baa-;

Baa означає звичайну α-амінокислоту, незвичайну α-амінокислоту або β-амінокислоту;

Rb1обраний C1-C12-алкила, необов'язково заміщеного NRb4Rb5, OH, ORb6, C3-C8-циклічним алкилом, арилом, гетероарилом або гетероциклилом; C1-C12-алкенила, необов'язково заміщеного NRb4Rb5, OH, ORb6, C3-C8-циклічним алкилом, арилом, гетероарилом або гетероциклилом; C1-C12-алкиларила, необов'язково заміщеного NRb4Rb5, OH або ORb6; C1-C12-алкинила, необов'язково заміщеного NRb4Rb5, OH, ORb6, C3-C8-циклічним алкилом, арилом, гетероарилом або гетероциклилом; арил-C1-C12-алкила, необяз�ом або гетероциклилом; C1-C12-алкіл-C3-C8-циклічного алкила, необов'язково заміщеного NRb4Rb5, OH, ORb6, арилом, гетероарилом або гетероциклилом; C3-C6-циклічного алкіл-C1-C12-алкила, необов'язково заміщеного NRb4Rb5, OH, ORb6, арилом, гетероарилом або гетероциклилом; C1-C9-алкилтио-C2-C10-алкила, необов'язково заміщеного NRb4Rb5, OH, ORb6, C3-C8-циклічним алкилом, арилом, гетероарилом або гетероциклилом; C1-C9-алкилсульфонил-C1-C4-алкила, необов'язково заміщеного NRb4Rb5, OH, ORb6, C3-C8-циклічним алкилом, арилом, гетероарилом або гетероциклилом; C1-C9-алкилсульфоксил-C1-C10-алкила, необов'язково заміщеного NRb4Rb5, OH, ORb6, C3-C8-циклічним алкилом, арилом, гетероарилом або гетероциклилом; CH3-(CH2)qb-O-[-CH2-(CH2)nbO]mb-CH2-(CH2)pb-, 2-тіазоло-групи, необов'язково замісної C1-8-алкилом;

qb=0-3,

nb=1-3,

mb=1-3,

pb=1-3;

Rb2обраний C1-C12-алкила, необов'язково заміщеного NRb4Rb5-алкенила, необов'язково заміщеного NRb4Rb5, OH, ORb6, C3-C8-циклічним алкилом, арилом, гетероарилом або гетероциклилом; арил-C1-C12-алкила, необов'язково заміщеного NRb4Rb5, OH, ORb6, C3-C8-циклічним алкилом, арилом, гетероарилом або гетероциклилом; C1-C12-алкинила, необов'язково заміщеного NRb4Rb5, OH, ORb6, C3-C8-циклічним алкилом, арилом, гетероарилом або гетероциклилом; C1-C12-алкиларила, необов'язково заміщеного NRb4Rb5, OH або ORb6; C1-C12-алкіл-C3-C8-циклічного алкила, необов'язково заміщеного NRb4Rb5, OH, ORb6, C3-C8-циклічним алкилом, арилом, гетероарилом або гетероциклилом; C3-C6-циклічного алкіл-C1-C12-алкила, необов'язково заміщеного NRb4Rb5, OH, ORb6, C3-C8-циклічним алкилом, арилом, гетероарилом або гетероциклилом; C1-C9-алкилтио-C1-C10-алкила, необов'язково заміщеного NRb4Rb5, OH, ORb6, C3-C8-циклічним алкилом, арилом, гетероарилом або гетероциклилом; C1-C9-алкилсулциклическим алкилом, арилом, гетероарилом або гетероциклилом; C1-C9-алкилсульфоксил-C1-C4-алкила, необов'язково заміщеного NRb4Rb5, OH, ORb6, C3-C8-циклічним алкилом, арилом, гетероарилом або гетероциклилом, CH3-(CH2)qb-O-[-CH2-(CH2)nbO]mb-CH2-(CH2)pb-;

qb=0-3,

nb=1-3,

mb=1-3,

pb=0-3;

Rb3обраний H, Rb1-, Rb2-C(O)- або Rb2-S(O2)-;

Rb4, Rb5і Rb6незалежно обрані з групи, що складається з H або C1-C4-алкила, і

Xaa1обраний із групи, що складається з прямого зв'язку, звичайною α-амінокислоти; незвичайної α-амінокислоти; β-амінокислоти; γ-амінокислоти; або залишку формули IIa-y:

,

R1aобраний H, C1-C6-алкила;

R1bобраний H, C1-C6-алкила, необов'язково заміщеного OH, гідрокси-C1-C6-алкила, необов'язково заміщеного OH;

R1cобраний H, C1-C6-алкила;

R1dобраний H, C1-C6-алкила;

R1aі R1bразом можуть утворювати гетероциклічна кільце;

n1одно 0-3;

Xaa2означає амінокислотний залишок форэтила, пропилу, изопропила, C1-C2-алкіл-C3-C7-циклоалкила і арил-C1-C2-алкила;

R2bі R2cнезалежно обрані з групи, що складається з H, метилу, етилу, пропила і изопропила, за умови, що, принаймні, один з R2bі R2cозначає H;

R2dозначає від 0 до 3 заступників, при цьому кожен такий заступник незалежно обраний із групи, що складається з H, Cl, F, Br, NO2, NH2, CN, CF3, OH, OR2eі C1-C4-алкила;

R2aі R2bабо R2aі R2cразом можуть утворювати гетероциклічна кільце;

R2eобраний із групи, що складається з метилу, етилу, пропила і изопропила; або

Xaa1і Xaa2разом можуть бути обрані з амінокислотного залишку формули IVa-b:

;

Xaa3обраний із групи, що складається з Gly, Ala, звичайною D-α-амінокислоти, незвичайної D-α-амінокислоти та амінокислотного залишку формули Va:

,

де R3aобраний із групи, що складається з H або C1-C4-алкила;

R3bобраний із групи, що складається з H -(CH2)n3a-X3a;

n3a одно 1-5;

X3aобраний із групи, що складається з H, NR3cR2і -(CH2)n3bX3b;

n3b одно 1-4;

X3bобраний із групи, що складається з NR3eR3f, C5-C6-гетероарила, C4-C7-гетероциклила, -NHC(=N)NH2;

R3eі R3fнезалежно обрані з групи, що складається з H, C1-C8-алкила,

де R3eі R3fможуть утворювати циклічну структуру;

R3aі R3bможуть бути пов'язані з утворенням циклічної структури;

або R3aі R3bможуть бути пов'язані з гетероатомом, вибраним з групи, що складається з N, O, S, з утворенням гетероциклической структури;

або

Xaa2і Xaa3разом можуть бути обрані з амінокислотного залишку формули Vb:

,

де R3gозначає від 0 до 3 заступників, при цьому кожен такий заступник незалежно обраний із групи, що складається з H, Cl, F, Br, NO2, NH2, CN, CF3, OH, OR3hі C1-C4-алкила;

R3hобраний із групи, що складається з C1-C4-алкила.

Xaa4означає амінокислотний залишок формули VIa-h:

,

де R4aобраний із групи, що складається з H, C1-C8-алкила, який може бути заміщений осту>0-алкила, C5-C8-циклоалкіл-C1-C10-алкила і C5-C8-циклоалкила, -(CH2)n4a-X4a;

n4aдорівнює 1 або 2;

R4bобраний із групи, що складається з H і метилу;

R4cобраний із групи, що складається з H і C1-C3-алкила;

X4aозначає OH, CO2R4d, NR4eR4f, SR4g, 4-имидазоил, 4-гідроксифенил;

R4d, R4eі R4fнезалежно обрані з групи, що складається з H і C1-C3-алкила;

R4gобраний із групи, що складається з C1-C3-алкила;

m4a і m4b незалежно обрані з 0 або 1;

R4hозначає C2-C6-алкіл;

або

Xaa3і Xaa4разом можуть бути обрані з амінокислотних залишків формули VIb-h;

Xaa5означає амінокислотний залишок формули VII:

,

де R5aозначає (CH2)n5a-X5a;

n5a одно 1-6;

X5aобраний із групи, що складається з H, NH2і аміновмісного C4-7-аліфатичного гетероциклічного кільця;

R5bобраний із групи, що складається з H і метилу;

R5cобраний із групи, що складається з H і метилу;

і де R5cі R5aможуть об'єднуватися з ним з групи, складається з N, O, S, з утворенням моноциклической або бициклической гетероциклической структури; при цьому зазначене гетероциклічна кільце може мати від 0 до 3 заступників, при цьому кожен заступник незалежно обраний із групи, що складається з OH, OR5d, F, C1-C4-алкила, -NHC(=NH)NH2, аріла і NR5eR5f;

R5dобраний C1-C4-алкила, C1-C4-алкиларила;

R5eобраний із групи, що складається з H, C1-C4-алкила, -C(=O)(CH2)n5b-X5b, -CH2(CH2)n5c-X5b;

R5fобраний із групи, що складається з H, C1-C4-алкила, -CH2(CH2)n5d-X5c;

n5b обраний із групи, що складається з 1, 2, 3 і 4;

n5c і n5d незалежно обрані з групи, що складається з 2, 3 і 4;

X5bі X5cнезалежно обрані з групи, що складається з H, NR5gR5h;

R5gі R5hнезалежно обрані з групи, що складається з H, C1-C4-алкила;

Xaa6означає амінокислотний залишок формули VIIIa-d:

,

де R6aобраний із групи, що складається з C1-C8-алкила, арил-C1-C4-алкила, C4-C7-циклоалкіл-C1-C4-алкила 8-алкіл і C4-C7-циклоалкіл можуть бути заміщені залишком, вибраним з групи, що складається з OH, O(C1-C4-алкила), S(C1-C4-алкила) і NR6dR6e;

R6bозначає H;

R6cобраний із групи, що складається з H і C1-C4-алкила;

R6dі R6eнезалежно обрані з групи, що складається з H і C1-C4-алкила;

де R6aі R6cможуть утворювати циклічну структуру, яка може бути заміщена залишком, вибраним з групи, що складається з OH, C1-C4-алкила, NH2і F;

або R6aі R6cможуть бути пов'язані з гетероатомом, вибраним з групи, що складається з N, O, S, з утворенням гетероциклической структури;

або

Xaa5і Xaa6разом можуть означати амінокислотний залишок формули VIIIe:

Xaa7означає амінокислотний залишок формули IXa-b:

,

де R7aобраний із групи, що складається з C1-C4-алкила, C3-C7-циклоалкила, 2-тиенила, (CH2)n7a-X7aі C1-C4-алкила, заміщеного OH;

R7bозначає H і 2-тиенил;

R7cобраний із групи, що складається з H і метилу;

R7e, C(=O)NH2, S(=O)2OH, OS(=O)2OH, B(OH)2, P(=O)(OH)2і OP(=O)(OH)2;

де R7eобраний із групи, що складається з H і C1-C4-алкила;

Xaa8означає амінокислотний залишок формули Xa-g:

,

де R8aобраний із групи, що складається з (CH2)m8a-X8aі C4-C7-азотсодержащего аліфатичного гетероциклічного кільця;

m8a=1-5;

X8aобраний із групи, що складається з H, NH2і-NHC(=NH)NH2;

R8bобраний із групи, що складається з H і метилу;

R8cобраний із групи, що складається з H, NH2і OH;

Y8aобраний із групи, що складається з CH(R8d) і S;

R8dобраний із групи, що складається з H, аріла і OH;

Y8bобраний із групи, що складається з CH(R8e) і NH;

R8eобраний із групи, що складається з H, NH2і OH;

Y8cобраний із групи, що складається з CH2і NR8f;

R8fобраний із групи, що складається з H-C(=NH)NH2і-C(=O)CH2NH2;

Xaa7і Xaa8разом можуть означати амінокислотний залишок формули Xh:

Xaa9обраний із групи, що складається з прямого зв'язку і , �остоящей з C1-C5-алкила і C4-C7-циклоалкила;

R9bобраний із групи, що складається з H, C1-C5-алкила;

і де R9aі R9bможуть утворювати 5-7-членное циклоалкильное кільце;

R9cобраний із групи, що складається з H, метилу;

або

Xaa8і Xaa9разом можуть означати залишок формули XId:

і

Z обраний із групи, що складається з H, OR11a, NHR11b, звичайною α-амінокислоти, незвичайної α-амінокислоти, β-амінокислоти; і пептиду, що складається з 2-30 амінокислот, вибраних з групи, що складається зі звичайних α-амінокислот, незвичайних α-амінокислот і β-амінокислот;

де R11aі R11bнезалежно обрані з групи, що складається з H, C1-C8-алкила, C4-C8-циклоалкила, C7-C12-бициклоалкила, C7-C12-циклоалкиларила, C1-C4-алкіл-C4-C8-циклоалкила або залишку формули XIIa-c:

Фахівцям у даній галузі буде зрозуміло, що у використовуваному в цьому описі сенсі фраза «необов'язково заміщений» означає, що залишок, до якого належить така фраза, може бути незамещенним, або він може бути заміщений нмещенний NRb4Rb5, OH, ORb6, C3-C8-циклічним алкилом, арилом, гетероарилом або гетероциклилом» відноситься до з'єднання C1-C12-алкила, який або не заміщений, або заміщений залишком, вибраним з групи, що складається з NRb4Rb5, OH, ORb6, C3-C8-циклічного алкила, аріла, гетероарила і гетероциклила. З'єднання гексан можна вважати C6-алкильним з'єднанням, яке не заміщено, тоді як з'єднання 3-гексанол є C6-алкильним з'єднанням, яке заміщено з третього атома вуглецю залишком OH.

В деяких бажаних агоністах NPR-B згідно винаходу:

B обраний із групи, що складається з Rb1-, Rb2-C(O)-;

Rb1обраний C1-C12-алкила, необов'язково заміщеного NRb4Rb5;

Rb2обраний C1-C12-алкила, необов'язково заміщеного NRb4Rb5;

Rb4і Rb5незалежно обрані з групи, що складається з H і C1-C4-алкила, і

Xaa1обраний із групи, що складається з прямого зв'язку, звичайною α-амінокислоти; незвичайної α-амінокислоти; β-амінокислоти; або залишку, вибраного з групи, що складається із залишків формули IIa, IIs, IIt, IIu і IIv:

-алкила, необов'язково заміщеного OH, гідрокси-C1-C6-алкила, необов'язково заміщеного OH;

R1cобраний H, C1-C6-алкила;

R1aі R1bразом можуть утворювати гетероциклічна кільце;

n1одно 0-3;

Xaa2означає амінокислотний залишок формули IIIa або формули IIIb:

,

де

R2aобраний із групи, що складається з H, метилу, етилу, пропилу, изопропила, C1-C2-алкіл-C3-C7-циклоалкила і арил-C1-C2-алкила;

R2bі R2cнезалежно обрані з групи, що складається з H, метилу, етилу, пропила і изопропила, за умови, що, принаймні, один з R2bі R2cявляє собою H;

R2dозначає від 0 до 3 заступників, при цьому кожен такий заступник незалежно обраний із групи, що складається з H, Cl, F, Br, NO2, NH2, CN, CF3, OH, OR2eі C1-C4-алкила;

R2aі R2bабо R2aі R2cразом можуть утворювати гетероциклічна кільце;

R2eобраний із групи, що складається з метилу, етилу, пропила і изопропила;

Xaa3означає амінокислотний залишок формули Va:

ної групи, складається з H -(CH2)n3a-X3a;

n3a одно 1-5;

X3aобраний із групи, що складається з H, NR3cR3d;

R3cі R3dнезалежно обрані з групи, що складається з H, C1-C8-алкила, -(C=N)-NH2і -(CH2)n3bX3b;

n3b одно 1-4;

X3bобраний із групи, що складається з NR3eR3f, C5-C6-гетероарила, C4-C7-гетероциклила, -NHC(=N)NH2;

R3eі R3fнезалежно обрані з групи, що складається з H, C1-C8-алкила,

де R3eі R3fможуть утворювати циклічну структуру;

R3aі R3bможуть бути пов'язані з утворенням циклічної структури;

або R3aі R3bможуть бути пов'язані з гетероатомом, вибраним з групи, що складається з N, O, S, з утворенням гетероциклической структури;

і

Xaa4означає амінокислотний залишок формули VIa:

,

де R4aобраний із групи, що складається з H, C1-C8-алкила, який може бути заміщений залишком, вибраним з групи, що складається з OH, CO2R4c, C(=O)-NH2, 5-6-членного гетероарила, C1-C10-алкила, C5-C8-циклоалкіл-C1-C10-алкилаила;

R4cобраний із групи, що складається з H і C1-C3-алкила;

Xaa5означає амінокислотний залишок формули VII:

,

де R5aозначає (CH2)n5a-X5a;

n5a одно 1-6;

X5aобраний із групи, що складається з H, NH2і аміновмісного C4-7-аліфатичного гетероциклічного кільця;

R5bобраний із групи, що складається з H і метилу;

R5cобраний із групи, що складається з H і метилу;

і де R5cі R5aможуть об'єднуватися з утворенням чотирьох-шестичленного гетероциклічного кільця, при цьому зазначене гетероциклічна кільце може мати від 0 до 2 заступників, при цьому кожен заступник незалежно обраний із групи, що складається з OH, OR5d, F, C1-C4-алкила, -NHC(=NH)NH2, аріла і NR5eR5f;

R5dобраний C1-C4-алкила, C1-C4-алкиларила;

R5eобраний із групи, що складається з H, C1-C4-алкила, -C(=O)(CH2)n5b-X5b, -CH2(CH2)n5c-X5b;

R5fобраний із групи, що складається з H, C1-C4-алкила, -CH2(CH2)n5d-X5c;

n5b обраний із групи, що складається з 1, 2, 3 і 4;

псостоящей з H, NR5gR5h;

R5gі R5hнезалежно обрані з групи, що складається з H, C1-C4-алкила;

Xaa6означає амінокислотний залишок формули VIIIa:

,

де R6aобраний із групи, що складається з C1-C8-алкила, арил-C1-C4-алкила, C4-C7-циклоалкіл-C1-C4-алкила, C1-C4-алкіл-S(C1-C4-алкила) і C4-C7-циклоалкила, де зазначений C1-C8-алкіл і C4-C7-циклоалкіл можуть бути заміщені залишком, вибраним з групи, що складається з OH, O(C1-C4-алкила), S(C1-C4-алкила);

R6bозначає H;

R6cобраний із групи, що складається з H і C1-C4-алкила;

Xaa7означає амінокислотний залишок формули IXa:

,

де R7aобраний із групи, що складається з C1-C4-алкила, C3-C7-циклоалкила, 2-тиенила і C1-C4-алкила, заміщеного OH;

R7bозначає H і 2-тиенил;

R7cобраний із групи, що складається з H і метилу;

і

Xaa8означає амінокислотний залишок формули X(a)-(g):

,

де R8aпро� -NHC(=NH)NH2;

R8bобраний із групи, що складається з H і метилу;

Xaa9обраний із групи, що складається з прямого зв'язку і амінокислотного залишку формули XIa-c,

,

де R9aобраний із групи, що складається з C1-C5-алкила і C4-C7-циклоалкила;

R9bобраний із групи, що складається з H і C1-C5-алкила;

або R9aі R9bможуть утворювати 5-7-членное циклоалкильное кільце;

R9cобраний із групи, що складається з H і метилу;

і

Z означає NHR11b,

де R11bобраний із групи, що складається з H, C1-C8-алкила, C4-C8-циклоалкила, C7-C12-бициклоалкила, C7-C12-циклоалкиларила, C1-C4-алкіл-C4-C8-циклоалкила або залишку формули XIIa-c:

У більш бажані варіанти здійснення цього винаходу B обраний із групи, що складається з Rb1і Rb2-C(O)-;

Rb1обраний із групи, що складається з C6-C10-алкила і C6-C10-алкила, заміщеного NRb4Rb5;

Rb2обраний C6-C10-алкила і C6-C10-алкила, заміщеного NRb4Rb5;

<рибран з групи, складається з прямого зв'язку, звичайною α-амінокислоти; незвичайної α-амінокислоти; β-амінокислоти; залишку формули IIa, залишку формули IIs, залишку формули IIt, залишку формули IIu і залишку формули IIv:

,

де R1aобраний H і C1-C4-алкила;

R1bобраний H, C1-C4-алкила, необов'язково заміщеного OH, і гідрокси-C1-C4-алкила, необов'язково заміщеного OH;

R1cобраний H, C1-C6-алкила;

R1aі R1bразом можуть утворювати гетероциклічна кільце;

n1одно 0, 1;

Xaa2означає амінокислотний залишок формули III:

,

де

R2aобраний із групи, що складається з H, метилу, етилу, пропилу, изопропила, C1-C2-алкіл-C3-C7-циклоалкила і арил-C1-C2-алкила;

R2bі R2cнезалежно обрані з групи, що складається з H, метилу, етилу, пропила і изопропила, за умови, що, принаймні, один з R2bі R2cявляє собою H;

R2dозначає від 0 до 3 заступників, при цьому кожен такий заступник незалежно обраний із групи, що складається з H, Cl, F, Br, CN, CF3, OH, OR2eі C1/sub> означає амінокислотний залишок формули Va:

,

де R3aобраний із групи, що складається з H або C1-C4-алкила;

R3bобраний із групи, що складається з H -(CH2)n3a-X3a;

n3a одно 1-5;

X3aобраний із групи, що складається з H і NR3cR3d;

R3cі R3dнезалежно обрані з групи, що складається з H, C1-C8-алкила і -(C=N)-NH2;

R3aі R3bможуть бути пов'язані з утворенням циклічної структури;

або R3aі R3bможуть бути пов'язані з гетероатомом, вибраним з групи, що складається з N, O, S, з утворенням гетероциклической структури;

і

Xaa4означає амінокислотний залишок формули VIa:

,

де R4aобраний із групи, що складається з H, C1-C8-алкила, який може бути заміщений залишком, вибраним з групи, що складається з АХ і CO2R4c;

R4bобраний із групи, що складається з H і метилу;

R4cобраний із групи, що складається з H і C1-C3-алкила;

Xaa5означає амінокислотний залишок формули VII:

,

де R5aозначає (CH2)n5a-X�фатического гетероциклічного кільця;

R5bобраний із групи, що складається з H і метилу;

R5cобраний із групи, що складається з H і метилу;

і де R5cі R5aможуть об'єднуватися з утворенням чотирьох-шестичленного гетероциклічного кільця, при цьому зазначене гетероциклічна кільце може мати від 0 до 2 заступників, при цьому кожен заступник незалежно обраний із групи, що складається з OH, F, C1-C4-алкила, -NHC(=NH)NH2, аріла і NR5eR5f;

R5eобраний із групи, що складається з H, C1-C4-алкила, -C(=O)(CH2)n5b-X5bі-CH2(CH2)n5c-X5b;

R5fобраний із групи, що складається з H, C1-C4-алкила, -CH2(CH2)n5d-X5c;

n5b обраний із групи, що складається з 1, 2, 3 і 4;

n5c і n5d незалежно обрані з групи, що складається з 2, 3 і 4;

X5bі X5cнезалежно обрані з групи, що складається з H і NR5gR5h;

R5gі R5hнезалежно обрані з групи, що складається з H і C1-C4-алкила;

Xaa6означає амінокислотний залишок формули VIIIa:

,

де R6aобраний із групи, що складається з C1-C8-алкила, арил-C1-C4-алкила, C4-C74-C7-циклоалкіл можуть бути заміщені залишком, вибраним з групи, що складається з АХ і O(C1-C4-алкила);

R6bозначає H;

R6cобраний із групи, що складається з H і C1-C4-алкила;

Xaa7означає амінокислотний залишок формули IX:

,

де R7aобраний із групи, що складається з C1-C4-алкила, C3-C7-циклоалкила, 2-тиенила і C1-C4-алкила, заміщеного OH;

R7bозначає H і 2-тиенил;

R7cобраний із групи, що складається з H і метилу;

і

Xaa8означає амінокислотний залишок формули Xa:

,

де R8aозначає (CH2)m8a-X8a;

m8a=1-5;

X8aобраний із групи, що складається з H, NH2і-NHC(=NH)NH2;

R8bобраний із групи, що складається з H і метилу;

Xaa9обраний із групи, що складається з прямого зв'язку і амінокислотного залишку формули Xia:

,

де R9aобраний із групи, що складається з C1-C5-алкила і C4-C7-циклоалкила;

R9bобраний із групи, що складається з H і C1-C5-алкила;

і де R9aі R9bмоги

Z означає NHR11b,

де R11bобраний із групи, що складається з H, C1-C8-алкила, C4-C8-циклоалкила, C7-C12-бициклоалкила, C7-C12-циклоалкиларила і C1-C4-алкіл-C4-C8-циклоалкила.

Послідовності бажаних нових агоністів NPR-B згідно винаходу наведено у винаході у звичайній формі пептидної послідовності, яка зрозуміла фахівця в даній області. Наприклад, трилітерний код звичайної амінокислоти або скорочення незвичайної амінокислоти вказує на присутність конкретної амінокислоти в конкретному положенні в послідовності молекули, при цьому зв'язок кожної амінокислоти з наступною та/або попередньої амінокислотою вказана дефісом. Дефіс, який означає хімічну зв'язок, зазвичай амідну зв'язок, означає видалення OH з 1-карбоксильної групи амінокислоти, коли він поміщений праворуч від скорочення, і означає видалення H з 2-аміногрупи (або єдиною аміногрупи у разі амінокислот, в яких відсутня 2-аміногрупа, наприклад, Bal) амінокислоти, коли він поміщений ліворуч від скорочення. Зрозуміло, що обидві модифікації можуть бути застосовні до однієї амінокислоти.

У разі дополнительниспользуются тільки 2-аміногрупа та/або 1-карбоксильна група.

C-кінці нових агоністів NPR-B, описаних в цій публікації, показані в розгорнутій формі при додаванні або OH, або NH2або скорочення для конкретного кінцевого аміна, відокремлених дефісом праворуч від скорочення C-кінцевої амінокислоти.

Такі конкретні кінцеві аміни представлені в таблиці 2 у вигляді повних формул і до них застосовують подібні правила щодо дефісів та їх структури в контексті пептиду, наприклад,

3791=NH2-CH(CH2-CH3)-CH2-CH3

-3791=-NH-CH(CH2-CH3)-CH2-CH3.

N-кінці нових пептидів, описаних в цій публікації, показані в розгорнутій формі при додаванні або H (у разі вільного N-кінця), або скорочення для конкретної кінцевий карбонової кислоти, сульфоновой кислоти або інший кінцевий групи перед символом N-кінцевої амінокислоти.

Зазначені конкретні карбонові кислоти, сульфоновие кислоти або інші кінцеві групи, подібні алкилу, наведені в таблиці 2 у вигляді повних формул, і до них застосовують подібні правила щодо дефісів та їх структури в контексті пептиду, наприклад,

Hex=гексанової кислота

Hex-=гексаноил-.

У випадку звичайних амінокислот і деяких незвичайних амінокислот використ�а вказує, що в пептидної послідовності присутній L-форма амінокислоти, тоді як мала перша літера вказує, що в пептидної послідовності присутній D-форма відповідної амінокислоти.

У кращих варіантах здійснення цього винаходу новий агоніст NPR-B являє собою складається з 8-13 амінокислот пептид, має послідовність, зазначену в таблиці 3. Агонистическая активність бажаних з'єднань наведена в таблиці 3 і систематизовано на основі таких вихідних положень:

Спочатку перевіряли дані про агонистической активності кожного з'єднання, щоб визначити, чи задовольняє воно критеріям для активності групи A. Якщо з'єднання не задовольняло критеріям для активності групи A, його перевіряли щодо критеріїв групи B. Якщо воно не задовольняло критеріям для активності групи A або активності групи B, його врешті-решт перевіряли щодо критеріїв групи C. Якщо воно не задовольняло критеріями активності групи C, його не включали в таблиці 3.

Всі приклади в таблиці 3 представляють лінійні пептиди, записані застосовним трехбуквенним кодом. У разі незвичайних аминок, �указані в таблиці 3, отримані в результаті експериментів, здійснених згідно із способів, описаних у прикладі 4.

В деяких варіантах агоністів NPR-B згідно винаходу в поєднанні формули 1:

B буде обраний зі зв'язку, Occ Жовт, Sbt, 1319, 1320 і 5587;

Xaa1буде обраний з Gly, AR-201-49, AR-201-68, ala, abu, his, aze, pro, pip, thz, thi, asn, ser, His, Ala, Ser, Bal, Sni, Az3 і Gab;

Xaa2буде обраний з Phe, Pcf, Nmf, Pbf, Pff, Pmf, Еаа, Mcf, Thk і Mtf;

Xaa3буде обраний з Gly, Aib, Ebc, звичайною D-α-амінокислоти і незвичайної D-α-амінокислоти і переважно буде обраний з Gly, Fhy, Ape, Egz, Aib, Ebc, ala, lys, lys(Me2), arg, leu, nle, ctb, abu, AR-385-12, Egg, ser, orn, orn(Me2) і dap(Me2);

Xaa4буде обраний з Leu, Nva, Nle, Hle, Npg, Cha і Ala;

Xaa5буде обраний з Lys, Orn, Hly, Hpa, Dab, Arg, N(алкіл)похідних будь-який з попередніх амінокислот, Nmk, Hpr, Pro, Tfp, Apr, Eaz, Hyp, Tap, Tap(G), Tap(Bal), Tap(Et), Tap(Ae), Tap(Ap), Amp, Pip і Chy;

Xaa6буде обраний зі зв'язку, Leu, Ile, Nml, Tap, Npg, SH-158, Dap(Me2), Cpg, Val, Tbg, Chg, Hle, Nle і N(алкіл)похідних будь-який з попередніх амінокислот;

Xaa7буде обраний з Asp, Val, BB725, BB727, Ser, Thr і Cya;

Xaa8буде обраний з Arg, Nmr, Pro, Eaz, Pca, Orn, Fhz, Har, Nar, Cyr, Mmr, Dmr, Bmr, Opy і N(алкіл)похідних будь-який з попередніх амінокислот;

Xaa9буде обраний з Ile, Tbg, Deg, Egz, Aml, 1860, Che, Nmi, Leu, Val, Ecb і Eca;

Xaa10"/>

Кращі агоністи NPR-B згідно з цим винаходу являють собою пептиди з активністю групи B, які наведені в таблиці 3 вище. Найбільш переважні агоністи NPR-B згідно з цим винаходу являють собою пептиди з активністю групи A, які наведені в таблиці 4.

B. Захворювання, що піддаються лікування та/або профілактики

Даний винахід відноситься до способів лікування або профілактики захворювань у суб'єкта, які включають введення суб'єкту терапевтично ефективного кількості композиції, яка містить один або кілька агоністів NPR-B, які описані в цій публікації, при цьому захворюванням є одне із зазначених далі захворювань. Суб'єктом може бути ссавець, таке як людина, примат, корова, кінь, собака, кішка, миша чи пацюк. У конкретних варіантах суб'єктом є людина.

1. Визначення

«Лікування» і «здійснення лікування» відноситься до застосування або введення лікарського засобу суб'єкту або здійснення процедури або способу по відношенню до суб'єкта з метою отримання терапевтичної користі в разі захворювання або пов'язаного зі здоров'ям стану. Термін «терапевтична користь», використовуваний протягом цієї заявки, відноситься до всього, що стимулює та покращує самопочуття суб'єкта при медичному лікуванні його стану. Термін включає без обмеження зменшення частоти появи або тяжкості ознак або симптомів захворювання. Терапевтическаяой. Наприклад, терапевтичну користь для пацієнта з глаукомою отримують, коли немає подальшого прогресування порушення поля зору в ураженому оці або має місце уповільнення швидкості прогресування порушення поля зору в ураженому оці або поліпшення зору.

«Захворюванням» або «пов'язаних зі здоров'ям станом» може бути будь-який патологічний стан частини тіла, органа чи системи, що виникає в результаті будь-якої причини, такої як інфекція, травма, генетичний дефект, пов'язане з віком погіршення функцій тіла та/або стрес під впливом умов навколишнього середовища. Причина може бути відома або не відома. Приклади захворювань включають глаукому, ретинопатії, травми ока та оптичні нейропатії. Таким чином, фахівця в даній галузі зрозуміло, що лікування може поліпшувати стан при захворюванні, але при цьому може не призводити до повного виліковування захворювання.

Терміни «профілактика» та «запобігання» використовують у цьому описі відповідно до їх звичайним і прямим значенням, щоб позначити «здійснення дії до» або саме таке діяння. В контексті конкретного захворювання або пов'язаного зі здоров'ям стану такі терміни відносяться до групи або способу по відношенню до суб'єкта з метою блокування або мінімізації настання захворювання або пов'язаного зі здоров'ям стану. Наприклад, людини, для якого існує ризик розвитку глаукоми очі (такого як людина з гіпертензією очі), можна лікувати агоністом NPR-B, який описаний в цій публікації, метою блокування або мінімізації появи ознак або симптомів глаукоми (тобто, в цілях профілактики глаукоми). У конкретному варіанті профілактика відноситься до зниження підвищеного внутрішньоочного тиску, блокування виявленої пошкодження зорового нерва внаслідок глаукоми у суб'єкта, зниження швидкості втрати зору у суб'єкта або зупинці втрати зору у суб'єкта. Суб'єктом може бути суб'єкт, у якого, як відомо або як передбачається, немає конкретного захворювання або пов'язаного зі здоров'ям стану на момент введення відповідного профілактичного засобу. Суб'єктом може бути, наприклад, суб'єкт, що не має відомого захворювання або пов'язаного зі здоров'ям стану (тобто, здоровий суб'єкт). В деяких варіантах суб'єкт раніше мав захворювання, яке не лікували в минулому, і в даний час відомо або підозрюється, що у нього немає захворювання.

Фахівці в даній області легко зрозуміють, що деякі терміни або родові терміни мають на увазі суму різних забьно і його можна лікувати або здійснювати профілактику сполуками згідно з цим винаходу.

2. Глаукома і гіпертензія ока

Глаукома є другою основною причиною сліпоти у всьому світі (Thylefors and Negrel 1994, Bull World Health Organ. 72: 323-326). Відкритокутова глаукома (ОУГ) і закритокутова глаукома разом утворюють другу основну причину сліпоти у всьому світі (Quigley and Broman, 2006 Br. J. Ophthalmol. 90: 262-267). Закритокутова глаукома більше поширена в Азіатській популяції (Foster et al. 2000, Arch. Ophthalmol. 118: 1105-11), тоді як відкритокутова глаукома більше зустрічається серед чорношкірих пацієнтів (Leske et al. 2007, Ophthalmic Epidemiol. 14: 166-172). Глаукома є прогресуючим захворюванням, при якому ризик втрати зору зростає зі збільшенням тривалості захворювання. З урахуванням старіння популяції в усьому світі можна припускати, що вплив такого приводить до сліпоти порушення в майбутньому зросте.

Патологічний стан, зване глаукомою, являє собою сімейство захворювань, що характеризуються безперервною втратою зорової функції внаслідок незворотного пошкодження зорового нерва. Більш конкретно, глаукома призводить до оптичної нейропатії, що приводить до втрати функції гангліозних клітин сітківки (RGC) з подальшою апоптозной загибеллю клітин і прогресуючим збільшенням втрати зрен�азним тиском (ВОТ), яке вважають важливим фактором ризику патологічного перебігу захворювання. Порушення нормального відтоку водянистої вологи, що приводить до підвищеного ВГД, є невід'ємною частиною патофізіології глаукоми. Гіпертензія ока є станом, при якому підвищений ВОТ, але не відбувається явної втрати зорової функції; вважають, що для таких пацієнтів існує високий ризик можливого розвитку втрати зору, асоційованого з глаукомою. Деякі пацієнти з глаукоматозной скотомой мають відносно низький ВГД. Таким пацієнтам із так званої глаукому з нормальним тиском або глаукомою з низьким тиском також можуть бути корисні засоби, які знижують і контролюють ВГД.

Глаукому зазвичай ідентифікують щодо змін ВГД, дефектів поля зору та/або змінами очного дна в області диска зорового нерва. Підвищений ВОТ, що зустрічається у більшості пацієнтів з глаукомою, є результатом морфологічних і біохімічних змін в трабекулярної мережі (TM), тканини, фільтруючої водянисту вологу, розташованої в кутку між райдужною оболонкою і рогівкою ока. По мірі прогресування глаукоми відбувається втрата клітин TM і наростання позаклітинних продуктів, �фактори, такі генетичні дефекти, що можуть призводити до механічної деформації головки зорового нерва (ONH), в кінці кінців призводить до екскавації ONH і втрати RGC і їх аксонів. Точний механізм такого патологічного процесу в даний час невідомий. Передбачалося, що зниження ВОТ у пацієнтів, у яких діагностовано глаукома, щонайменше на 20-30% буде знижувати прогресуюче збільшення захворювання на 50-60% (Quigley 2005 Ophthalmology 112: 1642-1643). Без правильного діагнозу і лікування глаукома може прогресувати до загальної необоротної сліпоти.

Спочатку більшість пацієнтів з відкритокутовою глаукомою лікували одним або декількома з широкого безлічі місцевих очних або пероральних гіпотензивних медикаментозних засобів, які діють, збільшуючи відтік водянистої рідини і/або знижуючи утворення водянистої рідини, або використовуючи хірургічні способи, такі, як лазерна тробекулопластика і фільтруюча операція. Схеми лікування, доступні в даний час для пацієнтів, у яких спостерігається підвищений ВОТ, незалежно від причини, зазвичай включають місцеве застосування від одного разу на добу до декількох разів на добу однієї або декількох очних крапель або таблеток, що містять нЏнистой вологи, від двох до чотирьох разів на добу. Зазвичай призначають при глаукомі лікарські засоби включають холінергічні агоністи, адренергічні агоністи бета-адренергічні блокатори, інгібітори карбоангідрази та аналоги простагландину. Хоча зазначені класи лікарських засобів ефективними в регулюванні ВГД, кожен з них має певні обмеження, пов'язані з ефективністю і несприятливими ефектами. Наприклад, бета-адренергічні блокатори не знижують ВГД вночі; багато пацієнти з глаукомою не відповідають на конкретний клас лікарського засобу; для більшості пацієнтів з глаукомою потрібне застосування поєднання лікарських засобів. Крім того, багато лікарські засоби викликають місцеве подразнення ока, таке як печіння, горіння, свербіж, сльозовиділення, гіперемія кон'юнктиви, відчуття чужорідного тіла, затуманений зір і біль в оці. Деякі іноді індукують системні побічні ефекти. Отже, дійсно існує постійна потреба в нових і поліпшених засобах лікування глаукоми.

Терміни «глаукома» і «глаукоматозная оптична нейропатія» і «глаукоматозная ретинопатія» у використовуваному в цьому описі сенсі взаимозамее незворотного пошкодження гангліозних клітин сітківки і зорового нерва. Основним фактором ризику розвитку глаукоми і пов'язаної втрати зорової функції є підвищений внутрішньоочний тиск. Існують різні типи глаукоми, включаючи первинну відкритокутову глаукому (ПВКГ), закритокутову глаукому і вроджену/пов'язану з аномаліями розвитку глаукому.

У використовуваному в цьому описі сенсі термін «внутрішньоочний тиск» або «ВОТ» відноситься до тиску вмісту всередині очі. В нормальному людському оку ВГД зазвичай знаходиться в діапазоні від 10 до 21 мм Hg. ВОТ у людей варіює, наприклад, воно може стати підвищеним внаслідок анатомічних проблем, запалення ока, в якості побічного ефекту лікарського засобу або внаслідок генетичних факторів. «Підвищеним» внутрішньоочним тиском в даний час вважають тиск ≥21 мм Hg, яке також вважають основним фактором ризику розвитку глаукоми.

Однак у деяких людей з підвищеним ВГД глаукома може не розвиватися, і вважають, що у них має місце офтальмогипертензия. «Офтальмогипертензия» у використовуваному в цьому описі сенсі відноситься до стану, при якому внутрішньоочний тиск в оці людини вище, ніж нормальне, але зоровий нерв і поля зору находяая зазвичай асоційована з глаукомою. У використовуваному в цьому описі значенні терміни «схильні» або «схильність» відносяться до людини або суб'єкта, у якого є або для якого існує ризик розвитку ушкодження зорового нерва або пошкодження сітківки, яке асоційоване з підвищеним внутрішньоочним тиском.

Таким чином, даний винахід відноситься до способів лікування або профілактики очної хвороби у суб'єкта, які включають введення суб'єкту терапевтично ефективного кількості композиції, яка містить один або кілька агоністів NPR-B, які описані в цій публікації, при цьому очної хворобою є глаукома, підвищений внутрішньоочний тиск або офтальмогипертензия. Суб'єктом може бути ссавець, таке як людина, примат, корова, кінь, собака, кішка, миша чи пацюк. У конкретних варіантах суб'єктом є людина.

В основних аспектах агоністи NPR-B згідно винаходу будуть знижувати внутрішньоочний тиск, асоційоване з глаукомою. Глаукома може являти собою будь-який тип глаукоми, такий як первинна відкритокутова глаукома, закритокутова глаукома, глаукома з нормальним тиском, вроджена глаукома, неова�изванная клітинами-тінями, або глаукома, пов'язана з відшаруванням судинної оболонки ока).

Даний винахід відноситься до способів зниження внутрішньоочного тиску у суб'єкта, що включає введення суб'єкту фармацевтично ефективного кількості композиції, що містить агоніст NPR-B, описаний у цій публікації, при якому знижується внутрішньоочний тиск. У конкретних варіантах суб'єктом є людина. Наприклад, у конкретних варіантах людина є пацієнтом з офтальмогипертензией або підвищеним ВГД.

3. Недостатності CNP як у випадку діабету

Діабетична нефропатія є прогресуючим захворюванням нирок, що виникає внаслідок довготривалого цукрового діабету. Експериментальні дані показують, що натрийуретические пептиди грають патофізіологічну роль в гломерулярних аномалії, що спостерігаються при цукровому діабеті. Надекспресія BNP запобігала діабетичну нефропатию в індукованого стрептозотоцином мишачої моделі діабету (Makino et al. 2006, Diabetologia, 49: 2514-2524). В іншому дослідженні на щурах з індукованим стрептозотоцином діабету, концентрації мРНК CNP в серці знижувалися в 2,6 рази (Walther et al. 2000, J. Mol. Endocrinol. 24: 391-395). У генетичній моделі діабету на мишасверхэкспрессию NPR-C; така надекспресія була асоційована з пониженим відповіддю у вигляді продукції цГМФ на обробку ANP або CNP (Ardaillou et al. 1999, Kidney Int. 55: 1293-1302).

4. Стану з гиперпролиферацией гладком'язових клітин судин

Аномальний ріст гладком'язових клітин судин (VSMC) є загальною причиною багатьох захворювань судин. Порушення балансу між інгібіторами росту і стимуляторами росту призводить до гіперпроліферації таких клітин, і вазоактивні речовини, включаючи натрийуретические пептиди, мабуть, грають основну роль в даному процесі. Ранні експериментальні дані свідчать, що пов'язані з гуанилилциклазой рецептори натрийуретических пептидів опосередковує антипролиферативную активність натрийуретических пептидів по відношенню до зростання гладком'язових клітин судин (Hutchinson et al. 1997, Cardiovasc. Res. 35: 158-167). Експерименти ex vivo показали пряме інгібування росту VSMC щурів при дії CNP (Furuya et al. 1991, Biochem. Biophys. Res. Commun. 177: 927-931). Крім того, міграція VSMC щурів може бути ингибирована CNP (Ikeda et al. 1997, Arterioscler. Thromb. Vase Товарbiol. 17: 731-736). Перенесення гена CNP приводив до зменшення проліферації VSMC в стегнових артеріях свиней in vivo, і вплив навіть перевищувало вплив застосування пептиду CNP (Pelisek et al. 2006, J. Gene Med. 8: 835-844). В дру�o (Morishige et al. 2000, J. Am. Coll. Cardiol. 35: 1040-1047), таким чином, додатково підсилюючи обґрунтування застосування CNP для припинення гіперпроліферації VSMC.

5. Патології серця, зокрема серцева недостатність і гіпертрофія

Безліч даних підтверджують центральну патофізіологічну роль натрийуретических пептидів у серцево-судинних захворюваннях, зокрема, серцевої недостатності. Перевагою концентрування уваги на CNP при таких показаннях є незмінна реактивність NPR-B, в той час як показано, що активність NPR-A знижена при такому стані (Dickey et al. 2007, Endocrinology. 148: 3518-3522, Nakamura et al. 1994, Circulation. 90: 1210-1214). Той факт, що зміст CNP в плазмі підвищений у пацієнтів з серцевою недостатністю (Del Ry et al. 2005, Eur. J. Heart. Fail. 7: 1145-1148, Del Ry et al. 2007, Peptides. 28: 1068-1073), інтерпретують як частину компенсаторного судинорозширювального відповіді периферичних судин (Del Ry et al. 2005, Eur. J. Heart Fail. 7: 1145-1148, Wright et al. 2004, Hypertension. 43: 94-100). Традиційне лікування серцевої недостатності спрямоване на підтримання функції серця за допомогою запобігання втрати кардіоміоцитів і гіпертрофії. CNP здатний підтримувати функцію серця завдяки позитивному впливу на життєздатність кардіоміоцитів (Rosenkranz et al. 2003, Cardiэффект був сильніший, ніж при дії ANP або BNP. Результати досліджень на собаках показали можливе інотропну дію CNP (Beaulieu et al. 1997, Am. J. Physiol. 273: H1933-1940), що підтверджує передбачувану здатність CNP лікувати серцеву недостатність.

Гіпертрофія серця являє собою збільшення органу внаслідок збільшення обсягу його м'язових волокон. Експериментальні дані свідчать про те, що CNP здійснює важливі аутокринние і паракринние функції в серці та коронарному кровообігу (D Souza et al. 2004, Pharmacol. Ther. 101: 113-129). Показано, що введення CNP in vivo покращує серцеву функцію і послаблює ремоделювання серця після інфаркту міокарда у щурів (Soeki et al. 2005, J. Am. Coll. Cardiol. 45: 608-616). В іншому нещодавньому дослідженні показано, що CNP здатний зменшувати реактивну гіпертрофію кардіоміоцитів після експериментального інфаркту міокарда у трансгенних мишей, сверхэкспрессирующих CNP в кардиомиоцитах (Wang et al. 2007, Eur. J. Heart Fail. 9: 548-557).

6. Серцево-судинні патології, зокрема атеросклероз, гіпертензія, ендотеліальна дисфункція та тромботичні події

Атеросклероз є хронічною запальною реакцією у стінках артеріальних кровоносних судин. Отримані in vitro дані свідчать, що CNP і�: 927-931, Shinomiya et al. 1994, Biochem. Biophys. Res. Commun. 205: 1051-1056). Натрийуретический пептид типу C ингибировал потовщення неоинтими в пошкоджених артеріях кролів і щурів in vivo (Furuya et al. 1995, Ann. NY Acad. Sci. 748: 517-523, Ueno et al. 1997, Circulation. 96: 2272-2279). В експериментальній моделі атеросклерозу у кроликів, локальна інфузія CNP призводила до збереження ендотеліальної функції та запобігання потовщення неоинтими, яке в нормі виникає в результаті пошкодження ендотелію (Gaspari et al. 2000, Clin. Exp. Pharmacol. Physiol. 27: 653-655).

Легенева гіпертензія є прогресуючим захворюванням, таким, що характеризується підвищеним тиском в артеріальній системі легенів. Звичайне лікування полягає у застосуванні судинорозширювальних речовин. Здатність CNP розслабляти артерії, ймовірно, завдяки прямій взаємодії з VSMC, було показано раніше на ізольованих коронарних артеріях свиней (Marton et al. 2005, Vascul. Pharmacol. 43: 207-212). Більш конкретно, CNP здатний послаблювати індуковану монокроталином легеневу гіпертензію у щурів і підвищувати життєздатність (Itoh et al. 2004, Am. J. Respir. Crit. Med Care. 170: 1204-1211), навіть якщо лікування з використанням CNP розпочинали через 3 тижні після появи симптомів.

Ендотеліальна дисфункція відіграє важливу роль у розвитку атеросклерозу і рестеноза. У моделі �ртериальное введення ANP або CNP запобігало ендотеліальну дисфункцію та розвиток неоинтими (Gaspari et al. 2000, Clin. Exp. Pharmacol. Physiol. 27: 653-655, Barber et al. 2005, J. Vase Res. 42: 101-110).

Запобігання тромботичних подій важливо при лікуванні серцево-судинних захворювань. Противотромботическое дію CNP добре відомо (Ahluwalia et al. 2004, Basic Res. Cardiol. 99: 83-89). Утворення тромбу було значно придушене в присутності CNP в аутологічних трансплантатах яремних вен кролика (Ohno et al. 2002, Circulation. 105: 1623-1626). У моделі пошкоджених при введенні балона сонних артеріях кролика показано, що CNP проявляє противотромботическую активність, ймовірно, через збільшення продукції NO при посиленні експресії індукованої NO-синтази (Qian et al. 2002, Circ. Res. 91: 1063-1069).

7. Стимуляція артериогенеза

Артериогенез відноситься до зростання колатеральних артеріол у функціональні колатеральних артерії і пов'язаний з підвищеним кров'яним тиском і збільшеним потоком, що викликає сдвиговое напруга на стінку артеріол. Стимуляція такого процесу являє собою методику лікування оклюзійних захворювань артерій (van Royen et al. 2001, Cardiovasc. Res. 49: 543-553). Корисна дія ANP на коронарний коллатеральний кровотік показано раніше (Kyriakides et al. 1998, Clin. Cardiol. 21: 737-742).

8. Запалення, зокрема, зниження рівня медіаторів запалення, наприклад, TNF-альѸ CNP в модулировании запальних реакцій: у моделі пошкоджених при введенні балона сонних артерій кролика експресія CNP in vivo знижувала експресію маркерів запалення ICAM-1 і знижувала інфільтрацію макрофагів, можливо, внаслідок посилення утворення NO (Qian et al. 2002, Circ Res 91: 1063-1069). В іншому дослідженні у гладком'язових клітинах аорти щурів in vitro CNP посилював активацію транскрипції iNOS, індукованої запальними цитокінами (інтерлейкіном-1 і фактором некрозу пухлин-α), і отже, продукцію NO (Marumo et al. 1995, Endocrinology. 136: 2135-2142). Інфузія CNP у щурів з гострим експериментальним міокардитом призводила до зниження інфільтрації CD68-позитивних запальних клітин і нижчих рівнів хемоаттрактантного білка-1 моноцитів у міокарді та сироватці (Obata et al. 2007, Biochem. Biophys. Res. Commun. 356: 60-66). Завдяки виборчому ослаблення експресії P-селектина CNP придушував у мишей роллінг лейкоцитів, індукований IL-1β або гістаміном, швидким, оборотним і залежним від концентрації чином (Scotland et al. 2005, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 102: 14452-14457). У моделі індукованого блеоміцином фіброзу легенів у мишей інфузія CNP помітно знижувала рівні IL-1β в рідині бронхоальвеолярного лаважу (Murakami et al. 2004, Am. J. Physiol. Cell Lung Mol. Physiol. 287: L1172-1177).

9. Патологічна адгезія лейкоцитів на ендотелії і диапедез в тканини

У мишачих мезентеріальних посткапілярних венулах in vivo у тварин з високою базальної активацією лейкоцитів (у мишей, нокаутированних за эном) CNP придушував базальний роллінг лейкоцитів швидким, оборотним і залежним від концентрації. CNP також здатний інгібувати взаємодії тромбоцитів-лейкоцитів (Scotland et al. 2005, Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 102: 14452-14457). У моделі індукованого блеоміцином фіброзу легенів у мишей інфузія CNP протягом 14 днів значимо ингибировала інфільтрацію макрофагів в альвеолярні та інтерстиціальні області (Murakami et al. 2004, Am. J. Physiol. Cell Lung Mol. Physiol. 287: L1172-1177). Також відомо, що CNP знижує експресію молекул клітинної адгезії, таких як ICAM-1 (Qian et al. 2002, Circ. Res. 91: 1063-1069) і P-селектин (Scotland et al. 2005, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 102: 14452-14457), що додатково підтверджує його роль в модулировании молекул адгезії.

10. Захворювання нирок, зокрема, ниркова недостатність, ниркова недостатність внаслідок зниженої перфузії нирок, гломерулонефрит та фіброз нирок

Раніше була показана локальна продукція CNP і експресія рецептора CNP в клубочках (Terada et al. 1994, Am. J. Physiol. 267: F215-222, Lohe et al. 1995, J. Am. Soc. Nephrol. 6: 1552-1558, Mattingly et al. 1994, Kidney Int. 46: 744-747, Dean et al. 1994, Am. J. Physiol. 266: F491-496), в клітинах нирок (Zhao et al. 1994, Kidney Int. 46: 717-725) і в мезангиальних клітинах (Suga et al. 1992, Hypertension, 19: 762-765), що свідчить про роль у фізіології нирок. При деяких станах рівні CNP в плазмі та сечі змінюються. Рівень CNP в плазмі та сечі воиррозе з нирковою недостатністю (Gulberg et al. 2000, Gut. 47: 852-857), рівні CNP в нирках і сечі зростали при експериментальному діабеті (Shin et al. 1998, J. Endocrinol. 158: 35-42), і рівні NP підвищувалися при хронічному захворюванні нирок, але знижувалися після гемодіалізу або трансплантації (Horl 2005, J. Investig. Med. 53: 366-370).

Користь застосування CNP при таких показаннях, як ниркова недостатність і відмова в роботі нирок, обумовлена його здатністю приводити до розслаблення гладких м'язів артеріальних кондуїтах (Drewett et al. 1995, J. Товарbiol. Chem. 270: 4668-4674, Madhani et al. 2003, Br. J. Pharmacol. 139: 1289-1296), до розширення вен (Chen and Burnett 1998, J. Cardiovasc. Pharmacol. 32 Suppl. 3: S22-28, Wei et al. 1993, J. Clin. Invest. 92: 2048-2052) і розширенню як приносять, так і виносять артеріол в клубочках, як показано в гидронефротических нирках щурів (Endlich and Steinhausen 1997, Kidney Int. 52: 202-207).

Гломерулопатии, подібні гломерулонефриту, зазвичай асоційовані з проліферацією мезангиальних клітин і інфільтрацією лейкоцитів (Buschhausen et al. 2001, Cardiovasc. Res. 51: 463-469). Інгібуючу дію CNP на інфільтрацію лейкоцитів внаслідок понижувальної регулювання ICAM-1 було показано раніше (Qian et al. 2002, Circ. Res. 91: 1063-1069, Buschhausen et al. 2001, Cardiovasc. Res. 51: 463-469). Крім того, всі NP надавали антипроліферативну вплив на мезангиальние клітини у дослідженнях in vitro на клітинах щурів (Suganami et al. 2001, J. Am. Soc. Nephrol. 12: 2652-2вной моделі анти-Thy 1.1 (Canaan-Kuhl et al. 1998, Kidney Int. 53: 1143-1151). У ще одному дослідженні CNP ингибировал проліферацію мезангиальних клітин клубочків, секрецію MCP-1 і знижував продукцію колагену IV мезангиальними клітинами (Osawa et al. 2000, Nephron. 86: 467-472).

Інгібуючий вплив CNP на проліферацію мезангиальних клітин клубочків (Suganami et al. 2001, J. Am. Soc. Nephrol. 12: 2652-2663, Canaan-Kuhl et al. 1998, Kidney Int. 53: 1143-1151, Osawa et al. 2000, Nephron. 86: 467-472) свідчить про його застосування для лікування фіброзу нирок.

11. Захворювання печінки, зокрема, портальна гіпертензія, цироз печінки, асцити печінки, фіброз печінки і гепаторенальний синдром

Дані про локальній системі натрийуретических пептидів в печінці людини отримані на основі аналізу мРНК; можуть бути виявлені специфічні транскрипти для всіх трьох NPR, а саме NPR-A, NPR-B і NPR-C, поряд з мРНК для ANP і CNP, але не BNP (Vollmar et al. 1997, Gut. 40: 145-150). При хронічних захворюваннях печінки вважають, що зірчасті клітини печінки відіграють роль у патогенезі фіброзу печінки і портальної гіпертензії (Friedman 1993, N. Engl. J. Med. 328: 1828-1835), набувають фенотип миофибробластов, проліферують і синтезують компоненти, ассоциирующие з фіброзом. Показано, що активація NPR-B під дією CNP в миофибробластних зірчастих клітинах печінки інгібує ріст і сокращениеиводействовать фиброгенезу в печінці і асоційованої портальної гіпертензії.

Цироз печінки є результатом хронічного захворювання печінки, що характеризується заміною печінкової тканини тканиною фіброзного рубця. Присутність CNP в нирках і сечі людини (Mattingly et al. 1994, Kidney Int. 46: 744-747) свідчить про ролі CNP в гомеостазі рідини і електролітів і, ймовірно, про роль у порушеннях функції нирок у пацієнтів з цирозом печінки. Рівень CNP в сечі пацієнтів з цирозом з порушеною функцією нирок зростав, тоді як рівні у плазмі були нормальними (Gulberg et al. 2000, Gut. 47: 852-857). У пацієнтів з цирозом інфузія ANP знижувала тиск у ворітній вені та збільшувала кровотік у печінці, що є показником зниження внутрішньопечінкового опору потоку у ворітній вені (Brenard et al. 1992, J. Hepatol. 14: 347-356). Введення фармакологічних доз CNP щурів з цирозом значущо знижував тиск у ворітній вені та опір периферичних судин і збільшувало серцевий викид (Komeichi et al. 1995, J. Hepatol. 22: 319-325).

Багато порушення можуть викликати асцити, але найбільш поширений цироз. Отже, лікування таких порушень, як цироз печінки, у кінцевому підсумку допоможе уникнути асцитов.

Згідно теорії вазодилатації гепаторенальний синдром є результатом впливу систем вазоконстрикторів, дей�зія нирок і швидкість клубочкової фільтрації помітно знижуються, тоді як функція канальців зберігається. Таким чином, будь-яка речовина, що збільшує перфузію нирок і швидкість клубочкової фільтрації, підходить для застосування у разі гепаторенального синдрому.

12. Захворювання легень, зокрема, легенева гіпертензія, астма та фіброз легень

Показано, що CNP локально синтезується в тканинах легенів і тому може впливати на прохідність дихальних шляхів (Suga et al. 1992, Circ. Res. 71: 34-39). CNP in vitro на порядок більш ефективний ніж ANP щодо продукції цГМФ у культивованих гладком'язових клітинах аорти.

Легенева гіпертензія є прогресуючим захворюванням, таким, що характеризується підвищеним тиском в артеріальній системі легенів. Звичайне лікування полягає у застосуванні судинорозширювальних речовин. Здатність викликати розслаблення артерій, ймовірно, внаслідок прямої взаємодії з VSMC, показана раніше в ізольованих коронарних артеріях свиней (Marton et al. 2005, Vascul. Pharmacol. 43: 207-212). Більш конкретно, CNP здатний послаблювати індуковану монокроталином легеневу гіпертензію у щурів і підвищувати життєздатність (Itoh et al. 2004, Am. J. Respir. Crit. Med Care. 170: 1204-1211), навіть якщо лікування з використанням CNP розпочинали через 3 тижні після появи сім� бронхоконстрикцию і капілярний просочування залежним від дози чином (Ohbayashi et al. 1998, Eur. J. Pharmacol. 346: 55-64). У астматиків in vivo Fluge з співавторами змогли продемонструвати залежні від дози бронходилатирующие властивості внутрішньовенного натрійуретичного пептиду (Fluge et al. 1995, Regul. Pept. 59: 357-370).

У моделі індукованого блеоміцином фіброзу легенів у мишей інфузія CNP помітно послаблювала фіброз, як показано на значимого зниження оцінки в балах за шкалою Ешкрофта і зниження вмісту гідроксипроліну в легенях (Murakami et al. 2004, Am. J. Physiol. Cell Lung. Mol. Physiol. 287: L1172-1177). Імуногістохімія на зрізах легких виявила значимо знижену інфільтрацію макрофагів в альвеолярні та інтерстиціальні області. Помітно знижене кількість Ki-67-позитивних клітин у фіброзних ушкодження легкого додатково підтверджує точку зору про антипролиферативном вплив CNP на фіброз легенів.

13. Проблеми чоловічого та жіночого безпліддя, зокрема, еректильна дисфункція, стимуляція чоловічої фертильності і стимуляція жіночої фертильності

Пенильная ерекція залежить від розслаблення гладенького м'яза печеристого тіла, однією з губчастих областей кавернозної тканини. Присутність NPR-B в мембрані печеристого тіла щурів і кроликів показано Kim з співавторами (Kim et al. 1998, J. Urol. 159: 1741 - 1746). Kim з співавторами показали, що C�азано, що NPR-B локалізована в пещеристом тілі статевого члена людини; у дослідженнях з використанням інкубації органів на смужках м'язів кавернозних тіл CNP в концентрації від 0,1 нМ до 1 мкМ приводив до розслаблення гладких м'язів від 5% до 40% (Kuthe et al. 2003, J. Urol. 169: 1918-1922); додаткове підтвердження ролі CNP в еректильної дисфункції отримано в недавньому дослідженні, показує, що рівні CNP асоційовані з присутністю, тяжкістю і тривалістю еректильної дисфункції (Vlachopoulos et al. 2008, Eur. Urol., у пресі).

Обґрунтування застосування CNP для стимуляції чоловічої фертильності засноване на його можливої функції в кровопостачанні насінників, модулировании розвитку зародкових клітин і рухливості сперматозоїдів та його ролі в пенильной ерекції (яка описана вище). CNP виявлений в насінній плазмі деяких видів (Hosang and Scheit 1994, DNA Cell Товарbiol. 13: 409-417, Chrisman et al. 1993, J. Товарbiol. Chem. 268: 3698-3703); клітини Лейдіга людини, розташовані поблизу сім'яних канальців у сім'яниках, містять CNP і рецептор NPR-B (Middendorff et al. 1996, J. Clin. Endocrinol. Metab. 81: 4324-4328). CNP здатний збільшувати рівні тестостерону in vitro в очищених клітинах Лейдіга миші (Khurana and Pandey 1993, Endocrinology, 133: 2141-2149), а також in vivo у відні яєчка у чоловіків (Foresta et al. 1991, J. Clin. Endocrinol. Metab. 72: 392-395). Оскільки тессредственное вплив на сперматогенез. Місцева ін'єкція натрийуретических пептидів in vivo щурам викликала залежне від дози збільшення кровотоку в сім'яниках (Collin et al. 1997, Int. J. Androl. 20: 55-60).

Припущення про функція CNP в запліднення, вагітності та ембріональному розвитку спочатку було зроблено після виявлення CNP в насінній плазмі свиней (Chrisman et al. 1993, J. Товарbiol. Chem. 268: 3698-3703). Подальші дослідження виявили експресію рецепторів NPR-A і-B в плаценті людини (Itoh et al. 1994, Biochem. Biophys. Res. Commun. 203: 602-607) та її модуляція в яєчниках і матці щурів в ході естрального циклу (Huang et al. 1996, Am. J. Physiol. 271: H1565-1575, Dos Reis et al. 1995, Endocrinology, 136: 4247-4253, Noubani et al. 2000, Endocrinology, 141: 551-559). У мишей концентрації мРНК CNP в матці зростали під час вагітності, тоді як в яєчниках рівні знижувалися порівняно з контрольними невагітними мишами (Stepan et al. 2001, Regul. Pept. 102: 9-13). У плаценті та міометрії людини CNP експресувався незалежно від терміну вагітності у третьому триместрі. При вагітності із затримкою внутрішньоутробного розвитку спостерігали протилежну регуляцію CNP в плаценті та міометрії, що свідчить про специфічної для органу функції пептиду в репродуктивній тканини людини (Stepan et al. 2002, Fetal Diagn. Ther. 17: 37-41). Така функція була підтверджена при дослідженні нокаутированнихatl. Acad. Sci. USA. 101: 17300-17305).

14. Прееклампсія та/або передчасні пологи

Прееклампсія, гіпертензивну порушення при вагітності, зазвичай асоційоване з підвищеним кров'яним тиском і вражає приблизно 2-8% вагітних. Неповноцінне надходження крові до плаценти призводить до ендотеліальної дисфункції, в кінцевому рахунку, призводить до пошкодження материнського ендотелію та нирок і печінки. При важкій прееклампсії рівні BNP підвищені, що може відображати напруження шлуночка та/або субклінічну дисфункцію серця, асоційовану з таким станом (Resnik et al. 2005, Am. J. Obstet. Gynecol. 193: 450-454). У вагітних з затримкою внутрішньоутробного розвитку або прееклампсії спостерігається протилежна регулювання CNP зі зниженням у плаценті і збільшенням у міометрії порівняно зі станом нормальної вагітності (Stepan et al. 2002, Fetal Diagn. Ther. 17: 37-41), тоді як рівні CNP в плазмі матері залишалися постійними; отримані дані можуть свідчити про компенсаторної або причинного специфічної для органу функції пептиду в репродуктивній тканини людини при таких патофізіологічних станах, що свідчить про те, що застосування CNP може бути корисним.

15. Порушення росту скелета, зокрема, низький зріст (ийуретический пептид C-типу, діє через свій рецептор, NPR-B, відіграє важливу роль у зростанні трубчастих кісток (Olney 2006, Growth Horm. IGF Res. 16 Suppl. A: S6-14), оскільки він стимулює эндохондриальное окостеніння (Tamura et al. 2004, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 101: 17300-17305, Miyazawa et al. 2002, Endocrinology, 143: 3604-3610). Спонтанна аутосомная рецесивна точкова мутація в гені CNP, звана аномалією довгих кісток (lbab), викликає важку карликовість у мишей (Yoder et al. 2008, Peptides. 29: 1575-1581, Tsuji et al. 2008, Biochem. Biophys. Res Commun. 376: 186-190). Повна відсутність CNP у мишей призводило до карликовості і ранньої загибелі (Chusho et al. 2001, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 98: 4016-4021).

16. Дефекти передачі сигналу FGF-R (рецептора, отриманого з тромбоцитів фактора росту), зокрема, гіперактивність FGF-R або недостатність CNP або остеокрина або знижений рівень CNP або остеокрина в пластинках росту довгих кісток

Дослідження in vitro та ex vivo показали, що CNP діє в пластинці зростання. CNP, найбільш ймовірно синтезується проліферують хондроцитами (Chusho et al. 2001, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 98: 4016-4021), діє локально, стимулюючи подальшу проліферацію. Відомо, що в якості протилежного елемента шлях FGF/FGFR-3 негативно регулює эндохондриальное окостеніння допомогою активації шляху MAP-кіназ Erk, таким чином інгібуючи пролифесия CNP в хондроцитах коригує карликовість в мишачої моделі ахондроплазии з активованим рецептором фактора росту фібробластів 3 в хрящі, засвідчуючи про прямому взаємодії їх шляхів передачі сигналу (Yasoda et al. 2004, Nat Med. 10:80-86). Крім того, Ozasa з співавторами виявили, що CNP здатний антагонизировать активацію каскаду MAPK під дією FGF, роблячи шлях CNP/NPR-B привабливим як нової терапевтичної мішені при лікуванні ахондроплазии (Ozasa et al. 2005, Bone. 36: 1056-1064). CNP також частково антагонизировал FGF2-індуковану експресію, вивільнення і активацію деяких ремодулирующих матрикс молекул, включаючи кілька металопротеїназ матриксу. Незалежно від передачі сигналу FGF CNP симулював підвищує регуляцію освіти матриксу (Krejci et al. 2005, J. Cell Sci. 118: 5089-5100).

Остеокрин є специфічним лігандом кліренс-рецептора натрійуретичного пептиду NPR-C, який модулює зростання кісток (Thomas et al. 2003, J. Товарbiol. Chem. 278: 50563-50571). Завдяки блокуванню кліренс-функції NPR-C він викликає локальне підвищення рівнів CNP, приводячи до проліферації хондроцитів (Moffatt et al. 2007, J. Товарbiol. Chem. 282: 36454-36462).

Отже, існують серйозні доводи на користь застосування CNP, щоб компенсувати надактивні рецептори FGF і у разі недостатності або знижених рівнів CNP або остеокрина.

17. Артрит, зокрема, дегенеративні захворювання хрящової тканини, остеоартр�атрийуретических пептидів для лікування та/або профілактики артритних захворювань є виявлення того, що CNP залучений до зростання скелета, зокрема, в освіту хрящового позаклітинного матриксу (Chusho et al. 2001, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 98: 4016-4021, Yasoda et al. 2004, Nat. Med. 10: 80-86), який здатний стабілізувати пошкоджений хрящ.

Показано, що виснаження CNP призводить до порушення росту кісток, подібно порушення, спостережуваного у разі ахондропластических кісток, з подібною гістологічною картиною зменшеної товщини шарів проліферуючих і гіпертрофічних хондроцитів в пластинці зростання (Chusho et al. 2001, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 98: 4016-4021). Цільова надекспресія CNP в хондроцитах протидіяла розвитку карликовості в мишачої моделі ахондроплазии з активованим рецептором фактора росту фібробластів 3 в хрящі. CNP коригував знижений синтез позаклітинного матриксу в пластинці зростання шляхом інгібування MAPK-шляхи передачі сигналу FGF, приводячи до стимуляції синтезу глюкозаминогликана і колагену хряща (типу II) (Yasoda et al. 2004, Nat. Med. 10: 80-86).

У хондроцитах щурів при хондросаркоме після опосередкованої FGF2 затримки росту CNP опосредовал інгібування індукції MMP і стимулював синтез позаклітинного матриксу (Krejci et al. 2005, J. Cell Sci. 118: 5089-5100, Ozasa et al. 2005, Bone, 36: 1056-1064), обидва ефекти призводили до загального збільшення позаклітинного матрик� розмноження хрящових клітин ex vivo до отримання кількості клітин, достатнього для того, щоб знову трансплантувати клітини пацієнта

CNP володіє стимулюючою активністю по відношенню до синтезу глюкозаминогликана і колагену хряща (типу II) в хондроцитах (Krejci et al. 2005, J. Cell Sci. 118: 5089-5100, Yasoda et al. 2004, Nat Med. 10: 80-86), ознакою, який корисний для регенерації хряща in vivo. Щоб отримати ex vivo тканина з обмеженої кількості клітин, які можуть бути виділені з організму людини, для терапевтичних цілей, він також повинен стимулювати проліферацію клітин. В основній публікації Waldman з співавторами повідомлялося, що в культурах 3D високої щільності низькі дози CNP (від 10 до 100 пМ) викликали проліферацію хондроцитів з збільшенням клітинної до 43% при самій високій дозі. Більш високі дози CNP (10 нМ), головним чином, стимулювали накопичення матриксу, не зачіпаючи клеточность тканини (Waldman et al. 2008, Tissue Eng. Part A. 14: 441-448). Таким чином, CNP підходить в якості модулятора як проліферації хондроцитів, так і накопичення ECM під час росту хряща in vitro.

19. Конструювання тканини та регенерація кістки, зокрема, для прискорення зрощення кісток або для поліпшення регенерації кісткової тканини

Роль системи NPR-B/CNP як важливого регулятора росту кісток встановлена в неско�01: 17300-17305, Pfeifer et al. 1996, Science, 274: 2082-2086); у мишей з делецією гена CNP також спостерігали знижений ріст кісток, і такий фенотип може бути знятий за надекспресії CNP в хондроцитах (Chusho et al. 2001, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 98: 4016-4021); надекспресія BNP у мишей призводило до надмірного росту скелета (Suda et al. 1998, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 95: 2337-2342). Більш конкретно, CNP здатний стимулювати проліферацію хондроцитів і освіта матриксу (Krejci et al. 2005, J. Cell Sci. 118: 5089-5100, Ozasa et al. 2005, Bone, 36: 1056-1064). Використовуючи органну культуру великогомілкових кісток зародків мишей, модель эндохондриального окостеніння in vitro, ріст довгих кісток стимулювали, використовуючи CNP (Yasoda et al. 1998, J. Товарbiol. Chem. 273: 11695-11700).

Отже, експериментальні дані переконливо підтверджують придатність CNP для регенерації кісток.

20. Модулювання активності нейронів, зокрема, у разі заміщення «центральної нервової функції» CNP

Широке поширення рецептора NPR-C в стовбурі головного мозку свідчить про участь NPR-C нейромодулирующем дії натрийуретических пептидів (Abdelalim et al. 2008, Neuroscience, 155: 192-202), які, як було показано, викликають різноманітні периферичні ефекти у разі застосування на головному мозку (Puurunen and Ruskoaho 1987, Eur. J. Pharmacol. 141: 493-495, Bianciotti et al. 2001, Regul. Pept. 102: 12например, призводило до стимуляції секреції кислоти в шлунку, яка повністю припинялася при ваготомії, що свідчить про участь блукаючого нерва (Puurunen and Ruskoaho 1987, Eur. J. Pharmacol. 141: 493-495). У двох дослідженнях Sabbatini з співавторами церебровентрикулярное введення CNP щурам залежним від дози чином посилювало екзокринну вироблення панкреатичного соку допомогою активації рецептора NPR-C і ваго-вагального рефлексу (Sabbatini et al. 2005, Eur. J. Pharmacol. 524: 67-74, Sabbatini et al. 2007, Eur. J. Pharmacol. 577: 192-202), таким чином, імітуючи вплив ендогенного CNP.

21. Злоякісна пухлина, використання інгібування проліферації пухлинних клітин, зокрема, клітин гліоми, клітин нейробластоми, клітин аденокарциноми, клітин аденокарциноми в головному мозку, підшлункової залозі та простаті, клітин меланоми і клітин карциноми нирок

У кількох публікаціях показано присутність рецепторів натрийуретических пептидів на пухлинних клітинах, що свідчить про можливості впливу на проліферацію таких клітин за допомогою застосування CNP, як було показано на ряді інших типів клітин.

Раніше отримані дані досліджень in vitro на культивованих клітинах гліоми щурів показали присутність рецепторів на таких клет� Pharmacol. 225: 79-82). В іншій лінії клітин, лінії пухлинних клітин гіпофіза AtT-20, єдиним натрійуретичний рецептором на поверхні клітин був рецептор NPR-B. CNP стимулював продукцію цГМФ у таких клітинах AtT-20 до 200 разів (Gilkes et al. 1994, Biochem. J. 299 (Pt 2): 481-487).

За допомогою Вестерн-імуноблотінгу ідентифікували рецептори NPR-A і NPR-C в клітинах аденокарциноми ободової кишки людини. Застосування 1 мМ ANP на таких клітинах призводило до зниження до 97% кількості клітин протягом 24 годин, що свідчить про антипролиферативной активності (Gower et al. 2005, Int. J. Gastrointest. Cancer. 36: 77-87).

CNP викликав 39% зниження кількості клітин мелкоклеточного раку легені в концентрації 100 мкМ. Механізм інгібування росту імовірно заснований на інгібуванні синтезу ДНК, частково опосередкованому цГМФ (Vesely et al. 2005, Eur. J. Clin. Invest. 35: 388-398).

У ще одному типі клітин, у клітинах карциноми нирок людини, CNP також знижував кількість клітин в концентрації 100 мкМ на 10%. Такий ефект підтримувався без проліферації клітин протягом трьох діб після обробки CNP. Всі три типи рецепторів натрийуретических пептидів, NPR-A, NPR-B і NPR-C, були виявлені на клітинах раку нирок (Vesely et al. 2006, Eur. J. Clin. Invest. 36: 810-819).

22. Фіброз, зокрема, фіброз легенів, фіброз вих вивчення явищ фіброзу в різних системах органів, показано, що застосування натрийуретических пептидів, зокрема, CNP сприяло корисний вплив на прогресування захворювання. Більш загальним ефектом CNP-опосередкованого утворення цГМФ у фібробластах є блокування активації каскаду протеїнкіназ, що активуються мітогенами (Chrisman and Garbers 1999, J. Товарbiol. Chem. 274: 4293-4299), що може бути використано для лікування будь-якого виду фіброзу, зокрема, полиорганного системного фіброзу/склерозу; можливість лікування фіброзу одного органу з використанням CNP підтверджується наступними даними.

У моделі індукованого блеоміцином фіброзу легенів у мишей інфузія CNP помітно знижувала рівні запального IL-1β в рідині бронхоальвеолярного лаважу, ингибировала інфільтрацію макрофагів в альвеолярні та інтерстиціальні області і помітно послаблювала фіброз, як показано на значимого зниження оцінки в балах за шкалою Ешкрофта і зниження вмісту гідроксипроліну в легенях (Murakami et al. 2004, Am. J. Physiol. Cell Lung Mol. Physiol. 287: L1172-1177).

Що стосується фіброзу нирок, то було описано, що CNP надавав інгібуючий вплив на проліферацію мезангиальних клітин клубочків (Suganami et al. 2001, J. Am. Soc. Nephrol. 12: 2652-2663, Canaan-Kuhl et al. 1998, Kidney Int. 53: 1143-1151, Osawa et al. 2000, Nephron. 86: 467-472). Зокрема, CNP та�n. 86: 467-472).

Фіброз серця, що характеризується проліферацією інтерстиціальних фібробластів і біосинтезом компонентів позаклітинного матриксу в шлуночках серця, є наслідком процесів ремоделювання. Soeki з співавторами показали, що застосування CNP покращувало функцію серця і захищало від ремоделювання серця після інфаркту міокарда у щурів (Soeki et al. 2005, J. Am. Coll. Cardiol. 45: 608-616). In vitro у фібробластах серця CNP надавав переважна дію на проліферацію фібробластів і продукцію позаклітинного матриксу, при цьому ефект був сильніший, ніж у випадку ANP або BNP (Horio et al. 2003, Endocrinology, 144: 2279-2284).

Вважають, що при хронічних захворюваннях печінки зірчасті клітини печінки відіграють роль у патогенезі фіброзу печінки і портальної гіпертензії (Friedman 1993, N. Engl. J. Med. 328: 1828-1835), набувають фенотип миофибробластов, проліферують і синтезують компоненти, асоціюють з фіброзом. Показано, що активація NPR-B під дією CNP в миофибробластних зірчастих клітинах печінки інгібує ріст і скорочення (Tao et al. 1999, J. Товарbiol. Chem. 274: 23761-23769), що свідчить про те, що при хронічних захворюваннях печінки CNP може протидіяти фиброгенезу.

C. Фармацевтичні препарати

Інші варіанти здійснення настояще�описаний у цій публікації, ставляться до лікування або профілактики захворювання у суб'єкта, яке асоційоване з підвищеним ВГД, глаукоми, офтальмогипертензии та/або втрати гангліозних клітин сітківки.

1. Ефективне кількість

У використовуваному в цьому описі сенсі термін «ефективна кількість» або «терапевтично ефективна кількість» відноситься до кількості засобу, який буде активувати функцію і/або активність рецептора натрійуретичного пептиду типу B. Нові агоністи NPR-B, описані в цій публікації, знижують внутрішньоочний тиск або дозволяють лікувати офтальмогипертензию у пацієнтів, які мають підвищений ВОТ або офтальмогипертензию. Таким чином, ефективне кількість представляє собою кількість, достатню для того, щоб помітно і багаторазово послаблювати, знижувати, мінімізувати або обмежувати ступінь будь-якого захворювання, асоційованого з підвищеним внутрішньоочним тиском або офтальмогипертензией, такого як будь-яке з захворювань, обговорюваних вище.

Способи лікування та/або профілактики будуть полягати в лікуванні індивідуума з використанням ефективного кількості композиції, що містить терапевтично ефективна кількість, щонайменше, одЂакое кількість, яке, як відомо або як передбачається, є корисним щодо зменшення ознак або симптомів захворювання. В деяких варіантах здійснення цього винаходу ефективним кількістю зазвичай є кількість, яку, як відомо або передбачається, корисно щодо зменшення ознак або симптомів глаукоми та асоційованого пошкодження зорового нерва або сітківки у суб'єкта. Передбачається, що лікування агоністами NPR-B буде стабілізувати або покращувати зорову функцію (на підставі вимірювання гостроти зору, поля зору або на підставі іншого способу, відомого фахівця в даній області).

В деяких варіантах ефективне кількість агоніста NPR-B, яке можна вводити суб'єкту, включає дозу приблизно від 1 мікрограм/кг маси тіла до приблизно 500 мікрограм/кг маси тіла або більше на одне введення і дозу в будь-якому похідному діапазоні.

2. Препарати

Для способів, описаних в цій публікації агоніст NPR-B може бути приготовлений будь-яким чином, відомим фахівцям в даній області. У композиціях, описаних в цій публікації, концентрація агоніста NPR-B може являти собою будь-яку концентрацію, яка, �ой хвороби, асоційованої з підвищеним внутрішньоочним тиском або офтальмогипертензией.

Фактичне дозовое кількість композиції згідно з цим винаходу, що вводиться суб'єкту, можна визначити за фізичним і фізіологічним показникам, таким як маса тіла, тяжкість стану, тип захворювання, що піддається лікуванню, попереднє або терапевтичне втручання, індивідуальність пацієнта і шлях введення. Лікар, відповідальний за вступ, в будь-якому випадку буде визначати концентрацію активного інгредієнта(ів) в композиції і відповідну дозу (дози) для конкретного пацієнта.

У деяких неограничивающих варіантах офтальмологічні фармацевтичні композиції можуть містити, наприклад, щонайменше, приблизно 0,03% (масових або об'ємних) активного інгредієнта. В інших варіантах активний інгредієнт може становити приблизно від 0,001% до приблизно 75% (масових або об'ємних) одиниці дозування або приблизно від 0,01% до приблизно 60% і може входити в будь-похідний діапазон. У більш конкретних варіантах фармацевтична композиція може містити приблизно від 0,03% до приблизно 2,0% (масових або об'ємних) активного інгредієнта. У більш конкретних варіантах композиції� композиція містить приблизно від 0,05% до приблизно 1,2% (масових або об'ємних) активного інгредієнта.

Доза може містити будь-яку кількість фармацевтичної композиції, яке, як відомо або як передбачається, є терапевтично корисним. Наприклад, доза може становити від 1 мікрограма/кг маси тіла до приблизно 500 мікрограм/кг маси тіла або більше на одне введення, доза може бути в будь-якому похідному діапазоні. При необхідності, яка визначається фахівцем в даній області, доза може бути багаторазовою, що домогтися необхідного терапевтичного ефекту. Наприклад, дозу можна повторювати один раз, два рази, три рази і так далі. В деяких варіантах дозу вводять двічі на добу, три рази на добу, чотири рази на добу або більш часто. У наступних варіантах дозу вводять через день, двічі на тиждень, один раз в місяць або з більш тривалими інтервалами.

В деяких варіантах здійснення цього винаходу композиції, описані в цій публікації можуть містити більше одного агоніста NPR-B. Фахівця в даній області може бути відомо отримання і введення фармацевтичних композицій, які містять більше одного терапевтичного засобу. В деяких варіантах композиція містить один або кілька додаткових терапевтичних засобів, які не�здобудуть один або кілька эксципиентов. Эксципиенти, що зазвичай використовуються у фармацевтичних композиціях, включають без обмеження носії, засоби для тоничности, консерванти, хелатори, буферні кошти, поверхнево-активні речовини та антиоксиданти.

Фахівця в даній галузі буде зрозуміло, що композиції згідно з цим винаходу можуть містити будь-яку кількість сполучень інгредієнтів (наприклад, активний засіб, полімери, эксципиенти тощо). Також передбачається, що концентрації таких інгредієнтів можуть варіювати. У неограничивающих аспектах процентний вміст кожного інгредієнта в композиції можна обчислити за масою або об'ємом від загальної маси або об'єму композиції. Фахівця в даній галузі буде зрозуміло, що концентрації можуть варіювати в залежності від додавання, заміни та/або видалення інгредієнтів з даної композиції.

В деяких варіантах здійснення винаходу конкретну кількість агоніста NPR-B вводять, використовуючи композиції, описані в цій публікації.

Фраза «фармацевтично прийнятний носій» відома в даній області і відноситься, наприклад, до фармацевтично прийнятним речовин, композиціям або наповнювачів, таких як рідкий або твердий наповнювачам�ровке будь добавки або композиції або її компонента з одного органу або частини тіла в інший орган або частина тіла. Кожен носій повинен бути «прийнятним» в сенсі сумісності з іншими інгредієнтами добавки і не завдає шкоди пацієнтові.

Будь-який з безлічі носіїв можна використовувати в препаратах відповідно до цього винаходу, включаючи воду, суміші води і змішуються з водою розчинників, таких як C1-7-алканоли, рослинні масла або мінеральні оливи, що містять від 0,5 до 5% нетоксичних водорозчинних полімерів, натуральні продукти, такі як желатин, альгінати, пектини, трагакантовая камедь, камедь карайя, ксантанова камедь, каррагенин, агар і аравійська камедь, похідні крохмалю, такі як ацетат крохмалю і гидроксипропил-крохмаль, а також інші синтетичні продукти, такі як полівініловий спирт, полівінілпіролідон, поливинилметиловий ефір, поліетиленоксид, переважно поперечно зшита поліакрилова кислота, суміші таких полімерів. Концентрація носія зазвичай становить від 1 до 100000-кратної концентрації активного інгредієнта.

Відповідні засоби для коригування тоничности включають маніт, натрію хлорид, гліцерин, сорбіт і тому подібні. Слушними консервантами є складний ефір п-гідроксибензойної кислоти, бензалконію хлорид, бромід бензододецин�Відповідні буферні кошти включають фосфати, борати, цитрати, ацетати і тому подібні. Відповідні поверхнево-активні речовини містять іоногенні і неіоногенні поверхнево-активні речовини, при цьому кращі неіоногенні поверхнево-активні речовини, такі як полісорбати, полиоксиэтилированние похідні касторової олії і оксиэтилированний третинний октилфенолформальдегидний полімер (тилоксапол). Слушними є антиоксидантами сульфіти, аскорбати, BHA і BHT. Композиції згідно з цим винаходу необов'язково містять додатковий активний засіб.

У конкретних варіантах композиції підходять для застосування для очей ссавців. Наприклад, для очного введення препарат може бути у вигляді розчину, суспензії, гелю або мазі.

В основних аспектах композиції, які містять агоністи NPR-B, можуть бути приготовані для місцевого застосування на очах у водному розчині у формі крапель. Термін «водний» зазвичай означає водну композицію, в якій носій містить >50%, більш переважно >75% і, зокрема, >90% мас. води. Такі краплі можна застосовувати з ампули, що містить одну дозу, яка переважно може бути стерильною і, отже, робить непотрібними бактериос�ащего кілька доз, який переважно може мати пристрій, який видаляє консервант з препарату по мірі його доставки, такі пристрої відомі в даній області.

В інших аспектах компоненти згідно винаходу можуть бути доставлені в око у вигляді концентрованого гелю або в подібному наповнювачі, який утворює розчинні вставки, які поміщають з нижнього боку століття.

Композиції згідно з цим винаходу також можуть бути приготовлені у вигляді розчинів, які піддаються фазового переходу в гель при введенні в око.

Крім одного або декількох агоністів NPR-B композиції згідно з цим винаходу можуть містити інші інгредієнти в якості эксципиентов. Наприклад, композиції можуть містити одне або кілька фармацевтично прийнятних буферних засобів, консервантів (включаючи консервуючі добавки), неіоногенних коштів для коригування тоничности, поверхнево-активних речовин, солюбилизаторов, стабілізаторів, що підвищують комфортність коштів, полімерів, пом'якшувачів, засобів для коригування pH та/або ковзних речовин.

Для місцевого застосування на очах препарати переважно є изотоничними або слабо гіпотонічними, щоб протиу винаходу зазвичай мають осмоляльність в діапазоні 220-320 миллиосмоль/кг, і переважно мають осмоляльність в діапазоні 235-260 миллиосмоль/кг. Композиції згідно винаходу мають pH в діапазоні 5-9, переважно 6,5-7,5 і найбільш переважно 6,9-7,4.

Препарати, описані в цій публікації можуть містити один або кілька консервантів. Приклади консервантів містять четвертинні амонієві сполуки, такі як хлорид бензалконію або хлорид бензоксония. Інші приклади консервантів включають алкилртутние солі тиосалициловой кислоти, такі як, наприклад, тиомерсал, нітрат фенилртути, ацетат фенилртути або борат фенилртути, перборат натрію, хлорит натрію, парабени, такі як, наприклад, метилпарабен чи пропілпарабен, спирти, такі як, наприклад, хлорбутанол, бензиловий спирт або фенилэтанол, похідні гуанідину, такі як, наприклад, хлоргексидин або бигуанид полигексаметилена, перборат натрію або сорбінова кислота.

В деяких варіантах агоністи NPR-B готують у вигляді композиції, яка містить один або кілька слезозаменителей. Різні слезозаменители відомі в даній області і включають без обмеження: мономерні поліоли, такі як гліцерин, пропіленгліколь і етиленгліколь; полімерні поліоли, такі як поліетиленгліколь; �ропилцеллюлоза; декстрани, такі як декстран 70; водорозчинні білки, такі як желатин; вінілові полімери, такі як полівініловий спирт, полівінілпіролідон і повідон; і карбомери, такі як карбомер 934P, карбомер 941, карбомер 940 і карбомер 974P. Препарат згідно з цим винаходу можна використовувати з контактними лінзами або іншими офтальмологічними продуктами.

В деяких варіантах композиції, описані в цій публікації, мають в'язкість 0,5-10 сП, переважно 0,5-5 сП і найбільш переважно 1-2 сП. Така відносно низька в'язкість забезпечує зручність використання продукту, при цьому продукт не викликає каламутності і легко піддається обробці при виробництві, транспортуванні та операціях заливки.

3. Шлях введення

Введення композицій згідно винаходу може бути здійснене будь-яким способом, відомим фахівцям в даній області, проте переважно локальне введення. Передбачається, що можна використовувати всі локальні шляху доставки в очі, включаючи місцевий, субконъюнктивальное, периокулярное, ретробульбарне, субтеноновое, внутрикамерное, інтравітреальне, внутрішньоочний, субретинальное, околосклеральное і супрахориоидальное введення. Підхід�римишечное введення і пероральну доставку. Найбільш кращим способом введення може бути інтравітреальна або субтеноновая ін'єкція розчинів або суспензій або інтравітреальне або субтеноновое розміщення біологічно руйнуються або біологічно неразрушаемих пристроїв або місцеве очне введення розчинів або суспензій або заднє околосклеральное введення гелевого препарату.

У світлі цього опису фахівцям в даній області буде зрозуміло, що можуть бути здійснені очевидні модифікації варіантів, описаних у цій публікації, не відходячи від суті і не виходячи за рамки обсягу винаходу. Всі варіанти, описані в цій публікації, можуть бути здійснені без надмірного експериментування з урахуванням цього опису. Повний обсяг винаходу викладено в описі і його еквівалентних варіантах. Опис не слід розглядати як надто звужує обсяг охорони, який дає право на цей винахід.

Хоча показаний і описаний конкретний варіант здійснення винаходу, численні зміни і альтернативні варіанти можуть бути придумані фахівцями в даній області. Відповідно, винахід можна втілити в інших конкретних формах, не відходячи від його суті або ѽе обмежуючими. Тому обсяг винаходу вказаний в прикладеній формулі винаходу, а не в наведеному вище описі. Всі зміни пунктів формули винаходу, які підпадають під значення і потрапляють в діапазон еквівалентів формули винаходу, входять в її обсяг. Крім того, всі опубліковані документи, патенти і заявки, що згадуються в цьому описі, включені у вигляді посилання так, як ніби представлені в повному вигляді.

D. Вторинні форми терапії

В деяких варіантах здійснення цього винаходу суб'єкт отримує одну або декілька вторинних форм терапії, спрямованої на лікування або профілактику конкретного захворювання очей.

Містить агоніст NPR-B офтальмологічна композиція згідно з цим винаходу може бути введена разом з іншим засобом або іншим способом терапії. Наприклад, введення людині композиції, що містить агоніст NPR-B, згідно з цим винаходу може передувати, може слідувати або може бути одночасним з використанням інших способів лікування глаукоми, підвищеного внутрішньоочного тиску або офтальмогипертензии. В деяких варіантах агоніст NPR-B готують у однієї і тієї ж композиції разом з вторинною формою терапії. У дни протоколи введення більш ніж однієї форми фармакологічного засобу для лікування суб'єкту з захворюванням і відомі способи приготування більш ніж одного фармакологічного засобу у вигляді однієї композиції.

Прикладами вторинних терапевтичних засобів без обмеження засобів проти глаукоми, такі як бета-блокатори, включаючи тимолол, бетаксолол, левобетаксолол, картеолол, миотики, включаючи пілокарпін, інгібітори карбоангідрази, простагландини, серотонергические кошти, мускарінові кошти, допамінергічні агоністи, адренергічні агоністи, включаючи апраклонидин і бримонидин; засоби проти ангіогенезу; протиінфекційна кошти, включаючи хінолони, такі як ципрофлоксацин і аміноглікозиди, такі як тобраміцин і гентаміцин; нестероїдні та стероїдні протизапальні засоби, такі як супрофен, диклофенак, кеторолак, римексолон і тетрагидрокортизол; фактори росту, такі як фактор росту нервів (NGF), основний фактор росту фібробластів (bFGF), отриманий з головного мозку нейротрофічний фактор (BDNF), цилиарний нейротрофічний фактор (CNTF); імунодепресанти; та протиалергічні засоби, включаючи олопатадин. Інформацію, що відноситься до препаратів олопатадина, можна знайти в патенті США 6995186, публікації заявки на видачу патенту № 2005/0158387 і публікації заявки на видачу патенту № 2003/0055102, кожна з яких спеціально включена у вигляді посилання. Офтальмол�леат тимололу, тартрат бримонидина або диклофенак натрію.

Інші приклади вторинного терапевтичного засобу включають інгібітор рецепторної тирозинкінази (RTK). Приклади інгібіторів RTK описані в публікації заявки на видачу патенту № 2006/0189608 і в патенті США № 7297709, які спеціально включені в даний опис у вигляді посилання. У кращих варіантах інгібітором рецепторної тирозинкінази є N-[4-[3-аміно-1H-индазол-4-іл]феніл]-N'-(2-фтор-5-метилфенил)сечовина.

В інших конкретних варіантах вторинним терапевтичним засобом є простагландин або аналог простагландину. Наприклад, аналогом простагландину може бути латанопрост, биматопрост, унопростон або травопрост.

У конкретних варіантах вторинним терапевтичним засобом є стероїд. Наприклад, стероїдом може бути глюкокортикоїд, прогестин, минералокортикоид або кортикостероїд. Приклади кортикостероїдів включають кортизон, гідрокортизон, преднізон, преднізолон, метілпреднізон, триамцинолон, фторметалон, дексаметазон, медризон, бетаметазон, лотепреднол, флуоцинолон, флуметазон або мометазон. Інші приклади стероїдів включають андрогени, такі як тестостерон, метилтестостерон або даназол. Вторинним терапе�коидов, такий як кортизен. Кращі кортизени для застосування в способах згідно винаходу включають ацетат анекортава і дезацетат анекортава. Часто вводять стероїди у вигляді сложноэфирних, ацетальних або кетальних проліків, багато з яких є нерозчинними у воді. Вторинні терапевтичні засоби можуть бути спрямовані на лікування або профілактику захворювання або можуть бути спрямовані на лікування або профілактику двох або більше захворювань.

Крім використання фармакологічних засобів можуть бути виконані хірургічні операції в поєднанні з введенням агоністів NPR-B. Однією з таких хірургічних операцій може бути лазерна трабекулопластика або трабекулэктомия. У разі лазерної трабекулопластики. енергію лазера направляють на кілька окремих плям в трабекулярної мережі. Вважають, що енергія лазерного випромінювання стимулює метаболізм трабекулярних клітин і змінює позаклітинний матрикс в трабекулярної мережі.

Іншою хірургічною операцією може бути фільтруюча хірургія. При використанні фільтруючої хірургії роблять отвір у склері поблизу кута. Таке отвір дозволяє водянистої рідини витікати з ока альтернативним путемез кон'юнктиви; кон'юнктива являє собою прозору тканину, яка покриває склеру. Кон'юнктиву відсувають убік, розкриваючи склеру до лімба. Отримують розщеплений склеральний клапоть і висікають на половину товщини в рогівку. Передню камеру вводять під склеральний клапоть і ділянку глибоких шарів склери та/або трабекулярної мережі вирізують. Склеральний клапоть знову вільно вшивають на місце. Кон'юнктивальний розріз щільно закривають. Після операції водяниста рідина проходить через отвір, під склеральним клаптем, який чинить певний опір, і збирається у збільшеному просторі під кон'юнктивою, званому подушечкою. Потім рідину або всмоктується через кровоносні судини в кон'юнктиву, або проходить через кон'юнктиву в слізну плівку.

E. Приклади

Наступні приклади включені для демонстрації кращих варіантів здійснення винаходу. Фахівцям у даній галузі слід розуміти, що способи, описані у наведених далі прикладах, представляють методики, які, як виявлено автором винаходу, добре працюють при практичному здійсненні винаходу, і, отже, можна вважати, що вони утворюють переважні способи буде зрозуміло, що можуть бути здійснені численні зміни конкретних варіантів, які описані, та все ж отримати такий або подібний результат, не відходячи від суті і не виходячи за рамки обсягу винаходу.

ПРИКЛАД 1

Матеріали і способи

Матеріали і способи, а також загальні способи додатково проілюстровано такими прикладами:

Розчинники:

Використовували розчинники зазначеного якості без додаткового очищення.

Ацетонітрил (градієнт чистота, J. T. Baker); дихлорметан (для синтезу, VWR); діетиловий ефір (для синтезу, VWR); N,N-диметилформамід (LAB, VWR); діоксан (для синтезу, Aldrich); метанол (для синтезу, VWR).

Вода: Milli-Q Plus, Millipore, демінералізована.

Реагенти:

Використовуються реагенти купували у Advanced ChemTech (Bamberg, Germany), Sigma-Aldrich-Fluka (Deisenhofen, Germany), Bachem (Heidelberg, Germany), J. T. Baker (Phillipsburg, USA), Iris Biotech (Marktredwitz, Germany), Lancaster (Griesheim, Germany), VWR (Darmstadt, Germany), NeoMPS (Strasbourg, France), Novabiochem (Bad Soden, Germany, 2003, Merck Biosciences, Darmstadt, Germany) та Acros (Geel, Belgium, дистриб'ютор Fisher Scientific GmbH, Schwerte, Germany), Peptech (Cambridge, MA, USA), Synthetech (Albany, OR, USA), Pharmacore (High Point, NC, USA), Anaspec (San Jose, CA, USA) і використовували у зазначеному якості без додаткового очищення.

Комерційно недоступні незвичайні амінокислоти отримували згідно стандартним протоколх амінокислот під час твердофазного синтезу.

Якщо не вказано інше, концентрації наведені у вигляді відсотків за обсягом.

Аналіз пептидів відповідно до цього винаходу:

Аналіз пептидів здійснювали способами аналітичної ВЕРХ з наступною реєстрацією в ESI-МС або MALDI-МС. Для аналітичної хроматографії використовували систему Hewlett Packard 1100 і ESI-МС (мас-спектрометр типу іонна пастка Finnigan LCQ). Використовували гелій в якості газу для зіткнення в іонній пастці. Для хроматографічного розділення використовували колонку RP-18 (Vydac (Merck) при 30°C. Для всіх хроматограмм використовували бінарний градієнт (5-95% B, лінійний, A: 0,1% ТФУ у воді, та B: 0,1% ТФУ в CH3CN). УФ-реєстрацію проводили при λ=220 нм.

Аналізи з використанням ВЕРХ/МС здійснювали, використовуючи лінійний градієнт від 95:5 до 5:95 (A: 0,1% ТФУ у воді і B: 0,1% ТФУ в ацетонітрилі); використовували колонки RP від компаній Phenomenex або Waters (Typ Luna C-18, 3 мкм, 2,00×50 мм, набір колонок Symmetry C18 колонка MV, 5 мкм, 4,6×250 мм, відповідно); для ESI-МС-вимірювання використовували мас-спектрометр ThermoFinnigan Advantage і/або LCQ Classic (в обох випадках іонні пастки). У разі ESI-іонізації гелій служив в якості газу для зіткнення в іонній пастці. У разі MALDI-МС-аналізів використовували мас-спектрометр Applied Biosystems Voyager RP MALDI з α-ціано-�єм препаративної ВЕРХ:

Поділу у разі препаративної ВЕРХ здійснювали, використовуючи колонки Varian PLRP-S (10 мкм, 100 Å) (15×25 мм або 150×50 мм) і наступні розчинники для градієнта: A: 0,05% ТФУ в H2O і B: 0,05% ТФУ в CH3CN.

Таблиця 4
Скорочення:
AAV - загальний спосіб,
Ac - ацетил,
Acm - ацетамидометил,
ДХМ - дихлорметан,

DIC - диизопропилкарбодиимид,
DIPEA - N,N-диизопропилэтиламин,
ДМФА - N,N-диметилформамід,
ДМСО - диметилсульфоксид,
Екв. - еквівалент (еквіваленти),
ESI - іонізація в электроспрее,
Фіг. - фігура,
Fmoc - 9-флуоренилметилоксикарбонил,
Година - година (години),
HATU - O-(7-азабензотриазол-1-іл)-1,1,3,3-тетраметилуронийгексафторфосфат,
HBTU - O-(бензотриазол-1-іл)-1,1,3,3-тетраметилуронийгексафторфосфат,
HOBt - 1-гидроксибензотриазол,
ВЕРХ - високоефективна рідинна хроматографія,
MALDI - матрично-активована лазерна десорбція/іонізація,
Me - метил,
хв - хвилина (хвилини),
мл - мілілітр,
МС - мас-спектрометрія,
М. м. - молекулярна маса,
NMP - N-метилпирро">

TIPS - триизопропилсилан,
ТФУ - трифторуксусная кислота,
УФ - ультрафіолет.

ПРИКЛАД 2

Синтез пептидів

Лінійні пептиди синтезували, використовуючи Fmoc-tBu-методику. Синтез здійснювали або вручну у поліпропіленових шприцах, або використовуючи автоматичний синтезатор (Syro з Multisyntech, Witten або Sophas з Zinsser-Analytic, Frankfurt).

Для отримання пептидів, несучих C-кінцева карбонову кислоту, C-кінцеву амінокислоту або пов'язували з тритилхлоридной смолою (приблизно 100 мг смоли; навантаження реакційно-здатних груп приблизно 1,5 ммоль/г; зв'язування з 0,8 еквівалентами Fmoc-амінокислоти і 3,0 еквівалентами DIPEA в ДХМ протягом 2 годин; навантаження першої амінокислоти приблизно 0,2-0,4 ммоль/г), або зі смолою Ванга (100-200 мг смоли; навантаження реакційно-здатних груп приблизно 0,6 ммоль/г; зв'язування з 4 еквівалентами Fmoc-амінокислоти, 4 еквівалентами DIC і 3 еквівалентами NMI в ДМФА протягом 3 годин; навантаження першої амінокислоти приблизно 0,2-0,6 ммоль/г).

Для отримання пептидів, несучих C-кінцевий амід карбонової кислоти, першу амінокислоту пов'язували зі смолою шляхом видалення Fmoc-захисту F20% пиперидина в ДМФА протягом 20 хвилин) і подальшим зв'язуванням Fmoc-амінокислоти (взаємодія з 5 еквівалентами Fmoc-амінокислоти; 5 еквівалентами HBTU або 5 еквівалентами HATU і 10 еквівалентами DIPEA в NMP протягом 30-60 хвилин, і вказану стадію необов'язково повторювали).

Після зв'язування першої амінокислоти здійснювали синтез пептиду, при необхідності повторюючи послідовність стадій, що складається з видалення Fmoc-захисту та зв'язування відповідної Fmoc-амінокислоти або карбонової кислоти. Для видалення Fmoc-захисту смолу обробляли 20% пиперидином в ДМФА протягом 20 хвилин. Зв'язування амінокислот здійснювали за допомогою взаємодії з 5 еквівалентами амінокислоти, 5 еквівалентами HBTU або 5 еквівалентами HATU і 10 еквівалентами DIPEA в ДМФА протягом 30-60 хвилин. Кожну стадію зв'язування необов'язково повторювали.

Для введення N-кінцевий ацетильной групи пептид з вільним N-кінцем, пов'язаний зі смолою, інкубували з розчином 10% ангідриду оцтової кислоти і 20% DIPEA в ДМФА протягом 20 хвилин. Для введення N-кінцевий сульфонільної групи пептид з вільним N-кінцем, пов'язаний зі смолою, інкубували з розчином 2 еквівалентів відповідного сульфонилхлорида і 4 еквівалентами DIPEA в ДМФА або ДХМ протягом 30 хвилин, і таку обробку повторювали один раз.

Для відщеплення пептиду від смоли і захисних груп бічних ланцюгів в суміш�єм ТФУ з використанням роторного випарювача, або преципітацією з допомогою метил-трет-бутилового ефіру при 0°C.

ПРИКЛАД 3

Індукована NPR-A продукція циклічного ГМФ в стабільно трансфицированной клітці

Щоб оцінити специфічність сполук щодо активації NPR, використовували клітини 293-T людини, трансфицированние NPR-A (Potter and Garbers 1992, J. Товарbiol. Chem. 267: 14531-14534) в експериментах по стимуляції.

У зазначеному гомогенном аналізі клітини стимулюють в суспензії тестованим з'єднанням і визначають продукцію циклічного ГМФ (цГМФ), і в результаті обчислюють значення EC50. ANP, що зустрічається в природі ліганд NPR-A, використовують в якості внутрішнього контролю та для визначення максимальної продукції цГМФ клітинами, що дозволяє обчислювати значення активації для тестованих сполук порівняно з ANP.

Підготовка клітин:Трансфицированние NPR-A клітини 293-T промивають один раз фосфатно-сольовим буфером (PBS) і открепляют від стінок флакона для культури тканини площею 75 см2, додаючи 3 мл розчину для неферментативной дисоціації клітин (Sigma-Aldrich) і інкубуючи протягом 10 хвилин при кімнатній температурі. Открепленние клітки збирають у 20 мл PBS і центрифугують протягом 10 хвилин при 200×g при кімнатній температурі. Клітини ре�до/мл і інкубують протягом 15 хвилин при кімнатній температурі.

Стимуляція клітин:20 мкл клітин (2,5×103клітин) додають у кожну лунку 96-лункового оптичного планшета для культури тканини з білим дном (Nunc, Germany). Додають 10 мкл розведеного з'єднання і клітини стимулюють протягом 25 хвилин при кімнатній температурі. Стимуляцію зупиняють додаванням 20 мкл лікувальної буфера (реагент включений в набір для аналізу цГМФ).

Визначення цГМФ:Кількість продукованого цГМФ у клітинах визначають, використовуючи набір для аналізу HitHunterTM (DiscoveRX) згідно з інструкціями виробника.

Розведення з'єднань: Для визначень EC50клітини в лунках у двох повторах стимулюють серійними розведеннями вихідного розчину з'єднання в 10 мМ ДМСО. Розведення готують у середовищі з додаванням IBMX (1 мМ). Кінцева концентрація сполуки в аналізі знаходиться в діапазоні від 45 мкМ до 20 нМ. ANP в якості з'єднання для внутрішнього стандарту використовували в концентраціях в діапазоні від 5 мкМ до 310 пМ.

ПРИКЛАД 4

Індукована NPR-B продукція циклічного ГМФ в клітинах трабекулярної мережі людину з глаукомою (GTM-3)

Ефективність сполук в активації NPR-B оцінювали у функціональному аналізі, використовуючи клітини GMT-3, ендогенно экспрессиределяют значення EC50. Зустрічається в природі ліганд NPR-B, тобто CNP, використовують в якості внутрішнього контролю та для визначення максимальної продукції цГМФ клітинами, яка дозволяє обчислювати значення активації для тестованих сполук порівняно з CNP.

Підготовка клітин:В оптичний 96-лунковий планшет для культури тканини з білим дном (Nunc, Germany) висівають по 1,5×105клітин/лунку в середовищі MEM Дульбекко (DMEM, Biochrom) з додаванням гентаміцину (0,056 мг/мл) і інкубують протягом 18 годин з 10% CO2у зволоженій атмосфері.

Стимуляція клітин:Середовище з культури клітин аспіріруют і кожну лунку промивають 200 мкл середовища DMEM/Хама F12 (Gibco). Потім у кожну лунку вносять 200 мкл середовища з додаванням 1,5 мМ IBMX (3-изобутил-1-метилксантини, Sigma) і інкубують протягом 15 хвилин при кімнатній температурі. Додають 25 мкл розведеного з'єднання і клітини стимулюють протягом 15 хвилин при кімнатній температурі. Стимуляцію зупиняють аспірацією середовища і додаванням 20 мкл лікувальної буфера (реагент включений в набір для аналізу цГМФ).

Визначення цГМФ:Кількість продукованого цГМФ у клітинах визначають, використовуючи набір для аналізу HitHunterTM(DiscoveRX) згідно з інструкціями виробника.

РазбавлеЏми вихідного розчину з'єднання в 10 мМ ДМСО. Розведення готують у середовищі з додаванням IBMX (1,5 мМ). Кінцева концентрація сполуки знаходиться в діапазоні від 45 мкМ до 20 нМ. Високо активні сполуки, наприклад, CNP, використовують для стимуляції в концентраціях в діапазоні від 5 мкМ до 6 нМ.

ПРИКЛАД 5

Ефективність у кроликів

Одну краплю об'ємом 30 мкл зразка досліджуваного препарату вводили в очі кролів (n=8-10). Внутрішньоочний тиск (ВГД) оцінювали в кожному оці 0 годин, безпосередньо перед введенням дози, і знову щогодини аж до 4 годин після введення дози. Ефективність даного препарату визначали на підставі відмінності між даними ВГД, зареєстрованими перед обробкою в 0 годин і даними, зареєстрованими після обробки. Максимальне зниження ВГД у відсотках більш ніж на 15% відзначено символом «+». Максимальне зниження ВГД менш ніж на 15% вказано символом «-».

Результати, отримані з використанням нових сполук згідно винаходу в описаних вище аналізах, наведені в таблиці 5 нижче.

HCl-сіль за винятком *ТФУ; доза становить DB, за винятком NZA, оцінки 1-4 (4=ВГД може не бути); "" вказана фаза гіпертензії; (n=#R) означає кількість відповідають 10-12 тестованих тварин; 1% - +супензия, ++ розчин.

Всі способи описані і заявлені в цій публікації, можуть бути підготовлені і виконані без зайвого експериментування у світлі цього опису. Хоча способи згідно з цим винаходу були описані у відношенні кращих варіантів, фахівцям в даній області буде зрозуміло, що можуть бути здійснені зміни способів, описаних у цій публікації, не відходячи від принципів, суті і не виходячи за рамки обсягу винаходу. Більш конкретно, буде зрозуміло, що деякі засоби, які є хімічно і фізіологічно родинними, можуть бути використані для заміни засобів, описаних у цій публікації, при цьому можуть бути досягнуті такі ж або подібні результати. Мається на увазі, що всі такі подібні заміни й модифікації, очевидні для фахівців в даній області, входять в обсяг, утворюють сутність і відповідають принципам винаходи, які визначені в прикладеній формулі винаходу.

Всі публікації, цитовані настк зазначеним у цій публікації, спеціально включені в даний опис у вигляді посилання.

1. З'єднання, обраний із групи, що складається з










2. З'єднання по п. 1, обраний із групи, що складається з


3. З'єднання формули:

де
У вибирають із групи, що складається з Rb1- і Rb2-C(O)-, де:
Rb1вибирають із групи, що складається з C6-C10-алкила і C6-C10-алкила, заміщеного NRb4Rb5;
Rb2вибирають із групи, що складається з C6-C10-алкила і C6-C10-алкила, заміщеного NRb4Rb5;
Rb4і Rb5незалежно вибирають із групи, що складається з Н і C1-C4-алкила;
R1aвибирають з H і C1-C4-алкила;
R1bвибирають з H, C1-C4-алкила, н� і R1bразом утворюють гетероциклічна кільце;
n1являє собою 0 або 1;
R2aвибирають із групи, що складається з H, метилу, етилу, пропилу, изопропила, C1-C2-алкіл-C3-C7-циклоалкила і арил-C1-C2-алкила;
R2bі R2cнезалежно вибирають із групи, що складається з H, метилу, етилу, пропила, і изопропила, за умови, що принаймні один з R2bі R2cявляє собою H;
R2dозначає від 0 до 3 заступників, при цьому кожен такий заступник незалежно обраний із групи, що складається з H, Cl, F, Br, CN, CF3, OH, OR2eі C1-C4-алкила, де R2eвибирають із групи, що складається з метилу, етилу, пропила і изопропила;
R3aвибирають із групи, що складається з H і C1-C4-алкила;
R3bвибирають із групи, що складається з H - (CH2)n3a-X3a, де
n3a одно 1-5;
X3aвибирають із групи, що складається з H і NR3cR3d, де R3cі R3dнезалежно вибирають із групи, що складається з H, C1-C8-алкила і -(C=N)-NH2; або альтернативно,
R3aі R3bпов'язані з утворенням циклічної структури; або альтернативно,
R3aі R3bпов'язані з гетероатомом,�уппи, складається з H і C1-C8-алкила, який необов'язково заміщений фрагментом, вибраним з групи, що складається з АХ і CO2R4c, де R4cвибирають із групи, що складається з H і C1-C3-алкила;
R4bвибирають із групи, що складається з Н і метилу;
R5aозначає (CH2)n5a-X5a,
де n5a одно 1-6;
X5aобраний із групи, що складається з H, NH2і аміновмісного C4-C7-аліфатичного гетероциклічного кільця;
R5cобраний із групи, що складається з Н і метилу; або альтернативно,
R5cі R5aоб'єднуються з утворенням 4-6-членного гетероциклічного кільця, де зазначене гетероциклічна кільце має від 0 до 2 заступників, при цьому кожен заступник незалежно вибирають із групи, що складається з OH, F, C1-C4-алкила, -NHC(=NH)NH2, аріла і NR5eR5f, де
R5eвибирають із групи, що складається з H, C1-C4-алкила, -C(=O)(CH2)n5b-X5bі-CH2(CH2)n5c-X5b;
R5fвибирають із групи, що складається з H, C1-C4-алкила і-CH2(CH2)n5d-X5c; де
n5b вибирають із групи, що складається з 1, 2, 3 і 4;
n5c і n5d незалежно вибирають із групи, сос�е R5gі R5hнезалежно вибирають із групи, що складається з H і C14-алкила;
R5bвибирають із групи, що складається з Н і метилу;
R6aвибирають із групи, що складається з C1-C8-алкила, арил-C1-C4-алкила, C4-C7-циклоалкіл-C1-C4-алкила і C4-C7-циклоалкила, де кожен з C1-C8-алкила і C4-C7-циклоалкила необов'язково заміщають фрагментом, вибраним з групи, що складається з АХ і O(C1-C4-алкіл);
R6bозначає H;
R6cобраний із групи, що складається з H і C1-C4-алкила;
R7aобраний із групи, що складається з C1-C4-алкила, C3-C7-циклоалкила, 2-тиенила, (CH2)n7a-X7aі C1-C4-алкила, заміщеного OH, де
n7aвибирають із групи, що складається з 1 і 2; і
X7aвибирають із групи, що складається з 2-тиенила, C(=O)OR7e, C(=O)NH2, S(=O)2OH, OS(=O)2OH, B(OH)2, P(=O)(OH)2і OP(=O)(OH)2, де R7eвибирають із групи, що складається з H і C1-C4-алкила;
R7bозначає H або 2-тиенил;
R7cвибирають із групи, що складається з H і метилу;
R8aозначає (CH2)m8a-X8a, де m8a=1-5;<ящей з H і метилу;
R9aвибирають із групи, що складається з C1-C5-алкила і C4-C7-циклоалкила;
R9bвибирають із групи, що складається з H і C1-C5-алкила; або альтернативно,
R9aі R9bутворюють 5-7-членное циклоалкильное кільце;
R9cобраний із групи, що складається з Н і метилу;
R11bвибирають із групи, що складається з H, C1-C8-алкила, C4-C8-циклоалкила, C7-C12-бициклоалкила, C7-C12-циклоалкиларила і C1-C4-алкіл-C4-C8-циклоалкила.

4. З'єднання по п. 3, де з'єднання має формулу:

5. З'єднання по п. 4, де:
В означає Rb2-C(O)- і Rb2означає C6-C10-алкіл; і R11bвибирають із групи, що складається з H і C1-C8-алкила.

6. З'єднання по п. 3, де з'єднання являє собою:

7. Спосіб зниження внутрішньоочного тиску у суб'єкта, що потребує у цьому, що включає введення вказаному суб'єкту терапевтично ефективного кількості з'єднання по кожному з пп. 1-6.

8. Спосіб лікування офтальмологічного захворювання у суб'єкта, що потребує в цьому, вк, �де зазначене офтальмологічне захворювання являє собою глаукому, підвищений внутрішньоочний тиск і гіпертензію очі.



 

Схожі патенти:

Пептид, що володіє нейропротекторной і ноотропною активністю, і фармацевтична композиція на його основі

Винахід відноситься до гексапептиду формули Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH2, що володіє нейропротекторной і ноотропною активністю. Запропоновано новий склад фармацевтичної композиції на основі пептиду, який високоефективний у низьких дозах і використовується у вигляді крапель в ніс. Пропонована фармацевтична композиція може знайти застосування в медицині для профілактики і лікування нейродегенеративних і цереброваскулярних захворювань. 2 н. п. ф-ли, 3 іл., 6 табл.

Олігопептиди imp-3 і утримують їх вакцини

Винахід відноситься до олигопептидам, що містить послідовність NLSSAEVVV (SEQ ID NO:6), в якій одна або дві амінокислоти можуть бути заміщені, мають индуцибельность цитотоксичних Т-клітин, їх фармацевтичним композиціям і застосування для виготовлення протиракових вакцин. 10 н. і 10 з.п. ф-ли, 6 іл., 1 табл., 1 пр.

Гетеромерние пептиди на основі имидазо[4,5-е]бензо[1,2;3,4-з']дифуроксана, що інгібують агрегацію тромбоцитів

Запропоновані гетеромерние пептиди на основі имидазо[4,5-е]бензо[1,2;3,4-з']дифуроксана, що інгібують агрегацію тромбоцитів: , де R=Phe-Ile-Ala-Asp-Thr; Arg-Tyr-Gly-Asp-Arg; Lys-Ile-Ala-Asp Asp; His-Ile-Gly-Asp Asp. 1 іл., 2 табл., 4 пр.

Равномерномеченний дейтерієм або тритієм his-phe-arg-trp-pro-gly-pro

Винахід відноситься до равномерномеченному дейтерієм або тритієм His-Phe-Arg-Trp-Pro-Gly-Pro, який може бути використаний в аналітичній хімії та біологічних дослідженнях. 2 табл., 2 пр.

Похідні опиорфинного пептиду як потенційні інгібітори эктопептидаз, що беруть участь у деградації енкефалінів

Даний винахід відноситься до модифікованим опиорфинним пептидів в якості нових інгібіторів метало-эктопептидаз. 4 н. і 13 з.п. ф-ли, 23 іл., 1 табл., 3 пр.

Застосування мимеотопов альфа-синуклеинових епітопів для лікування захворювань, пов'язаних з тільцями леві

Група винаходів відноситься до галузі фармацевтики та медицини і стосується пептидів або поліпептидів, які індукують утворення антитіл, спрямованих на альфа-синуклеин in vivo для отримання лікарських засобів для профілактики та/або лікування синуклеинопатий. Група винаходів забезпечує отримання пептидів або поліпептидів, які індукують антитіла, які відповідають за вилучення альфа-синуклеина, який залучений до утворення агрегатів альфа-синуклеина, тілець Леві та/або за розчинення агрегатів альфа-синуклеина, тілець Леві у індивідуума з синуклеинопатией. 4 н. і 18 з.п. ф-ли, 3 ін., 5 табл., 5 іл.

Эпитопние пептиди rab6kifl/kif20a і містять їх вакцини

Даний винахід відноситься до галузі імунології. Запропоновані варіанти олігопептиду, виділені з білка RAB6KIFL (KIFL20A), які здатні індукувати цитотоксичні Т-лімфоцити (CTL) у складі комплексу з молекулою HLA-A*0201. Також розглянуті: фармацевтична композиція та спосіб знищення клітин, що експресують RAB6KIFL і HLA-A*0201, экзосома, виділена антиген-презентирующая клітка і спосіб її індукції, фармацевтична композиція та спосіб індукції CTL, застосування активних інгредієнтів по справжньому винаходу для отримання фармацевтичної композиції для лікування раку, а також полинуклеотид, що кодує олигопептид по справжньому винаходу. Цей винахід може знайти подальше застосування в терапії захворювань, асоційованих з RAB6KIFL. 11 н. і 2 з.п. ф-ли, 6 іл., 1 табл.

Пептиди ттк і вакцини, що їх містять

Винахід відноситься пептидним вакцин проти раку. Представлені эпитопние пептиди, отримані з гена ТТК, які викликають розвиток CTL, фармацевтичні композиції, що містять в якості активних інгредієнтів зазначені пептиди або полінуклеотиди, що кодують зазначені пептиди. Також представлені антигенпрезентирующие клітини і виділені CTL, які націлені на зазначені пептиди, і способи індукування антигенпрезентирующих клітин або CTL. 12 н. і 6 з.п. ф-ли, 4 іл., 1 пр.

Спосіб отримання тиоефіру пептиду

Винахід відноситься до нового способу хімічного перетворення пептидного ланцюга в тиоэфир пептиду. Групу-C(=X)-R1 вводять в тиоловую групу залишку цистеїну, і потім отриманий пептид в органічному розчиннику реагує з з'єднанням, що мають перепризначену групу, представлену формулою: -NH-C(=Y)NHR3, і група-NH-C(=Y)NHR3 зв'язується в реакції приєднання з карбоксильної групою пептидного зв'язку на N-кінцевий стороні залишку цистеїну, за допомогою чого пептидний зв'язок розщеплюють і фрагмент пептиду, С-кінцевий стороні вирізують. Коли отримана пептидний ланцюг, що має групу-NH-C(=Y)NHR3, реагує з тиолом в буферному розчині, то відбувається реакція обміну тіолів, а саме тиоловая група з'єднання меркаптани зв'язується з вуглецем карбонила, до якої була приєднана група-NH-C(=Y)NHR3, за допомогою чого групу-NH-C(=Y)NHR3 видаляють. Таким чином, досягають перетворення в тиоэфир пептиду. 6 н. і 8 з.п. ф-ли, 4 ін.

Модульний молекулярний кон'югат для спрямованої доставки генетичних конструкцій та спосіб його одержання

Винахід відноситься до галузі медицини та ветеринарії і може бути використане як ефективний засіб адресної доставки комплексів ДНК з молекулярними кон'югатами в певні органи і тканини ссавців. В заявляється винахід значно підвищується ефективність доставки ДНК в пухлинні клітини та суттєво спрощується, здешевлюється і скорочується час синтезу молекулярних кон'югатів за рахунок застосування модульного підходу, а також можливості швидкої зміни лигандних складових для зміни тропности кон'югату до різних пухлинних і нормальних клітин організму. Винахід дозволяє вирішувати проблему генотерапії пухлинних захворювань, оскільки отриманий модульний пептидний кон'югат є, як показали результати численних випробувань в режимі реального часу, ефективним засобом адресної доставки і, що особливо важливо, не токсичні, иммуногенни для організму, і не викликають побічних ефектів. 2 н.п. ф-ли, 7 іл., 10 пр.

Новий епітоп bnp (1-32) і антитіла, спрямовані проти зазначеного епітопу

Винахід відноситься до галузі біохімії, зокрема до поліпептиду, несе епітоп BNP(1-32) людини, для отримання лігандів, спрямованих проти BNP(1-32) людини або proBNP(1-108) людини, де зазначений поліпептид має формулу a 1 - R 1 - X 1 - F G R K M D R - X 2 - R 2 - a 2 . Розкрито застосування зазначеного поліпептиду для отримання лігандів, спрямованих проти BNP(1-32) людини або proBNP(1-108) людини і для отримання гибридоми, яка секретує моноклональне антитіло, спрямоване проти BNP(1-32) людини або proBNP(1-108) людини. Розкрито спосіб отримання гибридоми, яка секретує моноклональне антитіло, спрямоване проти BNP(1-32) людини або proBNP(1-108) людини, а також отримана гибридома. Розкрито ліганд, специфічний до эпитопу з послідовністю FGRKMDR, а також його застосування для детектування в біологічному зразку BNP(1-32) людини або proBNP(1-108) людини. Розкрито способи детектування в біологічному зразку BNP(1-32) людини або похідного proBNP(1-108) людини, спосіб in vitro діагностики, прогнозу, стратифікації ризику або подальшого спостереження віддалених результатів серцевої та/або судинної патології у індивідуума, а також спосіб in vitro діагностики інсульту у індивідуума з використанням вказано�ізов BNP(1-32), proBNP(1-108), а також набір для детектування BNP(1-32) людини або proBNP(1-108) людини. Винахід дозволяє ефективно детектувати серцеві та/або судинні патології у індивідуума. 12 н. і 3 з.п. ф-ли, 17 іл., 12 табл., 18 пр.

Натрийуретические з'єднання, кон'югати та їх застосування

Винахід відноситься до конъюгатам натрийуретических сполук

Пептид, що володіє властивостями амилина (варіанти), та його застосування (варіанти)

Винахід відноситься до галузі біотехнології, конкретно до отримання пептиду, що володіє властивостями амилина, і може бути використане в медицині

Специфічні антитіла для діагностики серцевої недостатності

Винахід відноситься до біотехнології та медицині

Пептиди, що зв'язуються з рецептором кальцитоніну

Винахід відноситься до синтетичного связивающемуся з рецепторами кальцитоніну з'єднанню, що має молекулярну масу менше 10000 Д, яке являє собою пептид, ковалентно поєднане з хелатором радіоактивного металу з утворенням реагенту, при цьому згаданий реагент проявляє спорідненість по зв'язуванню з рецептором кальцитоніну, що дорівнює або перевищує афінність зв'язування з згаданим рецептором, характерну для нативного, поміченого радіоактивним йодом кальцитоніну

Захищені пептиди кальцитоніну

Винахід відноситься до сполук формули Х1-Leu-His-Lys(R1)-Leu-Gln-Thr-Tyr(R2)-Pro-Y, де Х1- H-, A1O-CO-, H-Lys(R3)-Leu-Ser-Gln-Glu(B4)-A1O-CO-Lys(R3)-Leu-Ser-Gln-Glu(B4)-; Y - -OH, -Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2; А1є трет-бутил; R1- захисна група формули В1Про-СО - для епсилон-аміногрупи залишку Lys, R2- захисна група формули В2Про-СО - для гідроксильної групи залишку Туг, R3- захисна група формули В3Про-СО - для епсилон-аміногрупи залишку Lys,4- захисна група для гамма-карбоксильної групи залишку Glu, причому В1,2,3і В4можуть бути однаковими або різними і вибирається з ряду: 2-алкилсульфонилэтил, 2-фенилсульфонилэтил, 2-(замещенний арил)сульфонилэтил
Винахід відноситься до медицини, стосується застосування антагоністів CGRP та/або для приготування косметичної або фармацевтичної композиції, особливо для топічного застосування, з метою лікування окулярних або пальпебральних почесух (пруріго), окулярних або пальпебральних болів і окулярних або пальпебральних дизестезий
Винахід відноситься до медицини, а саме до офтальмології, і може бути використане для лікування кератоконуса. Спосіб включає видалення епітеліального шару, вплив на рогівку шляхом насичення її багаторазовими інстиляціями 0,1% розчином рибофлавіну з наступним ультрафіолетовим опроміненням. При цьому після видалення епітеліального шару на поверхню очного яблука перилимбально накладають кільце, отримане з контактної лінзи з ультрафіолетовим захистом. Зовнішній діаметр кільця перекриває лімб на величину не більше 2 мм, а внутрішній діаметр кільця відповідає діаметру підстави кератоконуса. В процесі всього періоду ультрафіолетового опромінення рогівки додатково інстилюють розчин рибофлавіну на рогівку кожні 3-4 хвилини. Опромінення проводять довжиною хвилі 365 нм потужністю 3,0 мВт/см2 з відстані 50 мм протягом 30 хвилин з наступним видаленням кільця після завершення опромінення. Спосіб простий у виконанні, не представляє складності для фахівців, забезпечуючи при цьому підвищення ефективності лікування за рахунок обмеження зони впливу ультрафіолету, запобігання ультрафіолетового опромінення лімба і зниження ризику розвитку післяопераційних ускладнень. 1
Up!