Спосіб забезпечення поліпшеного ущільнення з допомогою фібрину

 

ОБЛАСТЬ ТЕХНІКИ, ДО ЯКОЇ НАЛЕЖИТЬ ВИНАХІД

Даний винахід відноситься до фібринової матриці з поліпшеними ущільнюючими властивостями, її отримання та використання.

ПЕРЕДУМОВИ СТВОРЕННЯ ВИНАХОДУ

Фібриновий ущільнювач, як правило, являє собою продукт крові, що отримується як з промислових джерел,так і з деяких регіональних центрів переливання крові. До числа компонентів, які звичайно використовуються для отримання фібринових ущільнювачів, відносяться, головним чином, фібриноген, доповнений різною кількістю фактора VIII, фактора XIII, фібронектину, витронектина та фактора фон Віллебранда (vWF). Фибриногенний компонент, як правило, активується останньої протеази коагулирующего каскаду - тромбином.

Фібриновий ущільнювач утворюється в результаті ферментативної реакції, що включає серед іншого фібриноген, тромбін і фактор XIII. Тромбін перетворюєфібриноген у фібрин шляхом ферментативного дії при швидкості, обумовленоїконцентрацією тромбіну. Фактор ХІІІ, як правило, присутня у фибриногенном компоненті ущільнювача і являє собою фермент системи коагуляції крові, поперечно зв'язує і стабілізуючий Ѱзу. Деякі виробники додають антипротеолитические речовини до складу фібринового ущільнювача (див. патент WO 93/05822) або спеціально видаляють плазміноген з метою зупинити або відстрочити фібриноліз (див. патенти США №№ 5792835 і 7125569).

У патенті США № 4427650 розкривається тканинний адгезив, який можна наносити у вигляді сухої порошкоподібної суміші відразу і безпосередньо на рану або на операційне поле. Адгезив складається з твердих порошкоподібних біологічно активних компонентів і містить від 60 до 96% вагу. фібриногену, виділеного переважно з крионерастворимого глобуліну, від 0,05 до 5% вагу. інгібітора фібринолізу і від 0,1 до 15% вагу. тромбіну і (або) протромбіну.

У патенті США № 5962405 розкривається ліофілізований фибриногенний препарат для отримання фибриногенного розчину, використовуваного в якості тканинного адгезиву. Фибриногенний препарат містить речовина, що покращує розчинність.

Деякий час тому стало відомо, що фібриновий ущільнювач можна накладати на рани, такі як відкриті рани людини, з метою їх закриття, зупинення кровотечі та запобігання попадання в рану інших речовин, таких як інфекційні речовини.

Повідомлялося про результати застосування�анях шлунково-кишкового тракту і легенів. Проте в цих повідомленнях присутні розбіжності.

Один описаний підхід до скорочення післяопераційних дефектів, таких як підтікання по лінії скобочного або ниткового (скобочного/ниткового) шва після шлунково-кишкової резекції, передбачає посилення скобочного/ниткового шва. У продажу є різні продукти для посилення скобочного/ниткового шва. Наприклад, лікарі застосовують неабсорбируемие або полуабсорбируемие продукти для посилення скобочного шва, такі як Seamguard®, Peristrips Dry® і Surgisis®. Однак у ранніх експериментальних і клінічних дослідженнях абсорбируемий матеріал для посилення скобочного шва продемонстрував суттєві переваги порівняно з неабсорбируемим або полуабсорбируемим матеріалом для посилення скобочного шва (Yo et al. «Buttressing of the staple line in gastrointestinal anastomoses: overview of new technology designed to reduce perioperative complications». Dig Surg. 2006; 23:283-291). Недавні повідомлення про використання фібрину в якості орс підсилювача скобочного шва для запобігання післяопераційних підтікань в області шлунково-кишкового тракту (Fullum et al. «Decreasing anastomotic and staple line leaks after laparoscopic Roux-en-Y gastric bypass». Surg Endosc. 2009; 23:1403-1408; Efthimiou et al. «Fibrin sealant associated with increased body temperature and leukocytosis after laparoscopic gastric bypass». Surg Obes для посилення скобочних/ниткових швів.

У патенті США № 5690675 розкривається спосіб закриття ран в легеневій тканині за допомогою двохетапного способу, по суті складається з накладення скріплюючих елементів (наприклад, скоб, кліпс, штифтів, гачків) на околораневую область, де скріплюють елементи можуть утворювати проникаючі отвори. Що скріплюють елементи покриті попередньо сформованим шаром колагену, фібрину, фібриногену, еластину, альбуміну або їх комбінацією, і під впливом на дану область енергії матеріал вплавляється в тканину і герметично ущільнює отвори проникають у тканини.

У патенті США № 5883078 розкривається стабільний тканинний адгезив, що містить фібриноген і активатор або проактиватор протромбіну. Адгезив може бути представлений у рідкої чи сухої формі. В одному варіанті здійснення твердий 2-сторонній тканинний адгезив отримують шляхом накладення сухого адгезиву у твердій формі на ранову поверхню і подальшої обробки другий ранової поверхні (другий частини тканини) і короткочасного стиску двох частин разом. Препарат швидко розчиняється при допомоги присутньої крові та (або) ранового секрету і потім твердне з початком коагуляції, при цьому досягається щільне соединениких тканин, таких як печінка або селезінка.

Lillemoe et al. [(2004) J Gastrointest Surg., том 8, № 7, стор 766-774 у статті під назвою «Does Fibrin Glue Sealant Decrease the Rate of Pancreatic Fistula After Pancreaticoduodenectomy? Results of a Prospective Randomized Trial»] показали, що місцеве нанесення фібринового клею-ущільнювача на поверхню панкреатичного анастомозу не сприяло зниженню частоти виникнення фістули підшлункової залози або загальних ускладнень у пацієнтів після панкреатикодуоденэктомии, і прийшли до висновку, що застосування цієї речовини в даному випадку не приносить користі.

Інше дослідження («The sealing effect of fibrin glue against alveolar air leakage evaluated up to 48h; comparison between different methods of application» Kawamura et al. (2005 р.) Eur J of Cardiothorac Surg. 28(1):39-42) розкриває ущільнене дію фібринового клею проти витоку альвеолярного повітря на прикладі тваринної моделі та оцінює різні способи застосування. Використовували розчин A, що складається з протеїнового концентрату, що містить фібриноген, і розчин B, що містить тромбін. В рамках способу нанесення розтиранням і розпиленням розчин A наносили по краплях і обережно розтирають на поверхні області витоку повітря. Потім обидва розчину одночасно розпилювали у вигляді змішаного аерозолю. У рамках іншого способу отримували подвійний шар пвор B. У рамках іншого способу моделях на тваринах (собаки) використовували колагенову матрицю, з одного боку покриту сухим фібриногеном і тромбином (TachoComb), і перевіряли результати після закінчення 24 годин. За словами авторів, ущільнюючий ефект фібринового клею залишається відносно стабільним протягом періоду до 12 годин після нанесення. Крім того, автори прийшли до висновку, що спосіб нанесення розтиранням і розпиленням може сприяти підвищенню швидкості досягнення фибриновим ущільнювачем своєї повної сили порівняно з іншими двома способами.

Інше дослідження, проведене Yo et al. (2006 р.) (Dig Surg 23: 283-291), розкриває спроби зменшити ускладнення анастомозу, такі як кровотеча або підтікання по лінії скобочного шва, при виконанні шлунково-кишкових резекцій. Yo зазначає, що у тваринній моделі щури при толстокишечном анастомозе застосування фібринового клею для ущільнення та запобігання підтікання не представляється доцільним. В роботі розкривається, що при резекції шлунка застосування фібринового клею для підтримки і ущільнення скобочного шва представляється більш успішним.

У патенті США № 7196054 розкривається спосіб обробки ушкодженої тканини у пацієнта, включення, достатньому для формування фібринової матриці в присутності тромбіну, фактора XIII, Ca2+та водного розчину; введення в композицію тромбіну, фактора XIII, Ca2+та водного розчину в кількостях, достатніх для формування фібринової матриці в присутності фібриногену.

Fullum et al. (2009 р.) розкриває, що неспроможність анастомозу та підтікання по лінії скобочного шва (ASL) з'являються після лапароскопічного шунтування шлунка з гастроеюноанастомозом за Ру (LRYGB) у пацієнтів, які страждають ожирінням. Фібриновий ущільнювач наносили уздовж лінії скобочного шва на шлунку. Автори прийшли до висновку, що оперативна техніка, включаючи відповідний розмір скоб, посилення скобочного шва, зшивання розрізу вручну, фіксуючий шов, випробування на перебіг, проведений під час операції, і фібринові ущільнювачі, стала інструментом для зниження частоти виникнення ASL після LRYGB. Авторам не вдалося установити, який з компонентів зіграв основну роль у запобіганні ASL.

На відміну від цього Efthimiou et al. (2009 р.) розкриває, що використання фібринового ущільнювача не вплинуло на ступінь неспроможності анастомозу і підтікань по лінії скобочного шва при LRYGB.

Існує незадоволений�одящихся в постійному русі, наприклад тканинах шлунково-кишкового тракту і легенів.

КОРОТКИЙ ОПИС ВИНАХОДУ

В даний час фібринові ущільнювачі застосовують в основному для гемостазу; ця дія може бути посилена аутогенними факторами згортання крові, наприклад фібриногеном, присутнім в крові, що покриває ранову область.

Фібриновий ущільнювач застосовується також для ущільнення тканини при підтіканні, наприклад при витоку повітря і (або) текучого середовища, наприклад сечі, травної рідини, серозної рідини. Зазвичай при наявності в тканинах таких підтікань аутогенні фактори згортання крові відсутні. Більшість ущільнювачів, включаючи синтетичні ущільнювачі, не ефективні для ущільнення підтікань у тканинах. Без прив'язки до механізму повітря/рідина може виступати в якості бар'єру між ущільнювачем і тканиною і, таким чином, перешкоджає безпосередньому контакту між ущільнювачем і тканиною.

Як правило, хірурги часто максимально висушують ранову подтекающую пошкоджену тканину перед нанесенням ущільнювача. Зазвичай висушування виконується вручну за допомогою губки/марлі і газового спрею (Hidas et al. «Sutureless nephron-sparing surgery: use of albumin glutaraldehyde tissue adhesive (BioGlue)». Urology, 2006; 67:697-700). Товарbiol. 2010; 150(2):111-118).

Крім того, ці процедури з висушування також проблематично виконати на недоступних для хірурга ділянках, наприклад при виконанні лапароскопічних операцій.

Даний винахід пропонує фібринову матрицю, ефективну для ущільнення підтікань тканини.

В одному аспекті даний винахід відноситься до способу нанесення фібринової матриці на вологу тканину, що включає: нанесення ефективного кількості твердої фібринової ущільнювальної суміші на вологу тканину; і нанесення ефективного кількості рідкої фібринової ущільнювальної композиції поверх щонайменше частині нанесеного твердої фібринової ущільнювальної суміші, причому ефективні кількості твердої фібринової ущільнювальної суміші і рідкої фібринової ущільнювальної композиції достатні для формування фібринової матриці на вологої тканини, що володіє більш високою ущільнюючої здатністю, пов'язаної з нанесенням ефективного кількості або рідкої фібринової ущільнювальної композиції, або твердої фібринової ущільнювальної суміші.

В одному варіанті здійснення цього винаходу ущільнююча здатність зростає щонайменше в 1,2 рази по відношенню до нанесення ж�отняющая здатність зростає приблизно в 1,7 рази по відношенню до нанесення рідкої фібринової ущільнювальної композиції.

В іншому додатковому варіанті здійснення цього винаходу нанесення здійснюється на тканину, яка є необогащенной, має невелику кількість, недостатня кількість або не має кровоносних судин, та (або) на тканині, повільно виділяють текуче середовище або некровоточащие.

В одному варіанті здійснення цього винаходу тверда фібринова ущільнювальна суміш містить твердий компонент, який містить фібриноген, і твердий компонент, який містить протеолітичний ферментний компонент, здатний утворювати фібрин при взаємодії з фібриногеном.

В іншому додатковому варіанті здійснення цього винаходу компонент твердої фібринової ущільнювальної суміші, що містить фібриноген, готують на стадії висушування фібриноген-містить розчину з концентрацією фібриногену менше 25 мг/мл

В одному варіанті здійснення цього винаходу концентрація фібриногену становить приблизно 20 мг/мл

Ще в одному варіанті здійснення цього винаходу протеолітичний фермент являє собою тромбін.

В іншому додатковому варіанті здійснення цього винаходу нанесення здійснюється на �щонайменше на частину скобочного або ниткового шва на тканині.

Інший аспект цього винаходу відноситься до способу отримання фібринової матриці на вологій поверхні, що включає наступні стадії: надання твердого компонента, що містить фібриноген; надання твердого компонента, що містить протеолітичний фермент, здатний до утворення фібрину при взаємодії з фібриногеном; надання рідкої фібринової ущільнювальної композиції; нанесення ефективного кількості твердих компонентів щонайменше на частину вологій поверхні; нанесення ефективного кількості рідкої фібринової ущільнювальної композиції поверх щонайменше частини нанесених твердих компонентів.

В одному варіанті здійснення цього винаходу волога поверхня не містить фібриногену.

В іншому варіанті здійснення цього винаходу рідку фібринову ущільнювальну композицію надають у твердій формі і відновлюють перед нанесенням.

В іншому додатковому варіанті здійснення цього винаходу рідку фібринову ущільнювальну композицію надають у замороженому вигляді і розморожують перед нанесенням.

В іншому варіанті здійснення цього винаходу тверді�ія цього винаходу твердий компонент надають у замороженому вигляді і висушують перед нанесенням.

В іншому додатковому варіанті здійснення цього винаходу тверді компоненти наносять одночасно або один за одним.

В іншому варіанті здійснення цього винаходу рідкі компоненти наносять одночасно або один за одним.

В іншому додатковому варіанті здійснення цього винаходу тверді компоненти представлені у вигляді суміші.

В одному варіанті здійснення цього винаходу поверхня являє собою тканину.

В одному варіанті здійснення цього винаходу тканина є необогащенной, має невелику кількість, недостатня кількість або не має кровоносних судин та (або) повільно виділяє текуче середовище або не кровоточить.

В іншому аспекті даний винахід відноситься до фібринової матриці, одержуваної у відповідності з цим винаходом.

Ще в одному аспекті даний винахід пропонує спосіб обробки або запобігання дефекту на вологій тканині потребує в обробці об'єкта, що включає наступні стадії:

a) надання компонента, що містить твердий фібриноген, надання компонента, що містить твердий протеолітичний фермент, здатний до утворення фибрианесение ефективного кількості твердих компонентів з п. a) щонайменше на частину вологій поверхні;

c) нанесення ефективного кількості рідкої фібринової ущільнювальної композиції з п. a) поверх щонайменше частини нанесених твердих компонентів.

В одному варіанті здійснення цього винаходу волога тканина є необогащенной, має невелику кількість, недостатня кількість або не має кровоносних судин та (або) повільно виділяє текуче середовище або не кровоточить.

В іншому варіанті здійснення цього винаходу дефект являє собою підтікання в тканини.

В іншому додатковому варіанті здійснення цього винаходу просачивающееся речовина є необогащенним, має невелику кількість, недостатня кількість або не має плазми або компонентів крові.

В одному варіанті здійснення цього винаходу рідку фібринову ущільнювальну композицію надають у твердій формі і відновлюють перед нанесенням.

В іншому додатковому варіанті здійснення цього винаходу рідку фібринову ущільнювальну композицію надають у замороженому вигляді і розморожують перед нанесенням.

В одному варіанті здійснення цього изобр� здійснення цього винаходу твердий компонент надають у замороженому вигляді і висушують перед нанесенням.

В іншому додатковому варіанті здійснення цього винаходу тверді компоненти наносять одночасно або один за одним.

В одному варіанті здійснення цього винаходу рідкі компоненти наносять одночасно або один за одним.

В іншому варіанті здійснення цього винаходу тверді компоненти з п. a) представлені у вигляді суміші.

В іншому додатковому варіанті здійснення цього винаходу дефект являє собою скобу або нитку.

В одному аспекті даний винахід пропонує набір, що містить: (i) контейнер (- и), що містить(ие) тверді компоненти, що містять (a) фибриногенний компонент і (b) протеолітичний ферментний компонент, здатний до утворення фібрину при взаємодії з фібриногеном, причому компоненти (a) і (b) знаходяться в окремих контейнерах або в одному і тому ж контейнері у вигляді суміші; і (ii) принаймні два окремих контейнера, причому щонайменше один окремий контейнер містить рідкий, заморожений або твердий фибриногенний компонент, і щонайменше другий окремий контейнер містить рідкий, заморожений або твердий протеолітичний ферментний компонент, здатний до утворення фібрину при взаимнти, компоненти (a) і (b) знаходяться в одному і тому ж контейнері у вигляді суміші.

В одному варіанті здійснення цього винаходу протеолітичний фермент являє собою тромбін.

В іншому варіанті здійснення цього винаходу набір використовують стосовно до вологої поверхні.

В іншому додатковому варіанті здійснення цього винаходу набір застосовують для ущільнення підтікань у тканинах, які є необогащенними, мають невелику кількість, недостатня кількість або не мають кровоносних судин, та (або) тканинах, повільно виділяють текуче середовище або некровоточащих.

Фібринову матрицю або набір у відповідності з цим винаходом можна використовувати для обробки або запобігання дефекту на вологої тканини.

КОРОТКИЙ ОПИС КРЕСЛЕНЬ

На малюнку 1 представлено зусилля, необхідне для відокремлення двох шарів тканини клубової кишки (зусилля відшарування), пов'язаних разом за допомогою двох різних фібринових ущільнювальних композицій: суміші ліофілізованого фібриногену і тромбіну у порівнянні з двокомпонентною рідкої фібринової ущільнювальної композицією.

На малюнку 2 представлена ущільнююча здатність (измерей фібринової ущільнювальної фібринової композиції і матриці, отриманої шляхом послідовного нанесення ліофілізованого фібриногену і тромбіну і двокомпонентного рідкого фібринового ущільнювача.

На малюнку 3 представлена ущільнююча здатність (виміряна шляхом руйнівного випробування) фібрину, отриманого шляхом нанесення ліофілізованого тромбіну з наступним розпиленням рідкого фібринового ущільнювача; фібрину, отриманого шляхом нанесення ліофілізованого фібриногену з наступним розпиленням рідкого фібринового ущільнювача; фібрину, отриманого шляхом нанесення суміші ліофілізованого фібриногену і тромбіну з наступним розпиленням рідкого фібринового ущільнювача; і фібринової композиції, отриманої шляхом нанесення сухого альбуміну з наступним розпиленням рідкого фібринового ущільнювача.

ДЕТАЛЬНИЙ ОПИС ВАРІАНТІВ ЗДІЙСНЕННЯ ВИНАХОДУ

Даний винахід відноситься до способу нанесення фібринової матриці на слизову оболонку або іншу вологу тканину, причому спосіб включає в себе послідовне нанесення твердої фібринової ущільнювальної суміші на поверхню тканини з подальшим нанесенням рідкої фібринової ущільнювальної композиції поверх щонайменше частини поверхні.лажні тканини шляхом послідовного нанесення спочатку твердої фібринової ущільнювальної суміші, а потім рідкої фібринової ущільнювальної композиції.

В основі цього винаходу лежать наступні дані дослідження.

Силу адгезії (або зусилля відшаровування) різних випробовуваних фібринових композицій вивчали шляхом проведення дослідження на відшарування. Випробування дозволяє виміряти міцність з'єднання фібринового клею між шарами підслизової оболонки тонкої кишки свині. В одному варіанті здійснення випробовувану адгезивних композицію наносили на серозне поле клубової кишки свині. Після нанесення випробовуваної фібринової ущільнювальної композиції тканина клубової кишки згортали (сероза до серозе) і залишали фібринову ущільнювальну композицію для полімеризації. Зусилля, необхідне для відокремлення двох злиплих шарів тканини клубової кишки один від одного (зусилля відшарування), вимірювали за допомогою універсальних розривних випробувальних машин LFPLUS виробництва Lloyd Instruments. Зазвичай, чим вище виміряне зусилля відшаровування, тим більше сила адгезії випробовуваної композиції. У відповідності з цим винаходом було встановлено, що сила адгезії істотно підвищилася завдяки використанню ліофілізованої фібринової ущільнювальної композицииибриновой ущільнювальної композиції була приблизно в 2,7 рази вище в порівнянні з силою адгезії рідкої фібринової ущільнювальної композиції.

Ущільнюючі властивості різних фібринових композицій вимірювали шляхом проведення руйнівного випробування. Руйнівне випробування дозволяє визначити та оцінити здатність ущільнювача запобігати підтікання. Коротко кажучи, алюмінієву трубку, з'єднану з джерелом води і має отвори, вводять в трубчастий сегмент клубової кишки свині, який ущільнюють і затискають на обох кінцях трубки. Після цього в алюмінієву трубку подають воду, вода надходить через отвори в простір між клубовою кишкою і алюмінієвою трубкою, при цьому зворотний струм води в алюмінієву трубку виключається. Перед подачею води виконують 10-міліметровий розріз перпендикулярно довжині кишки, розріз спочатку зшивають ниткою по середньої лінії, а потім на область розрізу наносять випробовувану фібринову ущільнювальну композицію через трафарет з парафильма площею 6 см2, який розміщують навколо розрізу. Після нанесення випробовуваної композиції фібрин залишають для затвердіння (або полімеризації) протягом 10 хвилин і заповнюють кишечник водою для вивчення його здатності витримувати тиск. При надходженні води в простір між клубовою кишкою і ластами тиск води в� тиску вимірюють за допомогою манометра (D-logmate 590 MRC (Ізраїль)), сполученого з лінією подачі рідини. Тиск, виміряний до зниження, реєструють і приймають за тиск руйнування. Зазвичай більш високу зареєстроване тиск руйнування вказує на більш високі ущільнюючі властивості випробовуваної композиції.

У відповідності з цим винаходом також було встановлено, що ліофілізований фібриновий ущільнювач, який показав більш високу силу адгезії порівняно з рідким фибриновим ущільнювачем, виявився неефективним для ущільнення. На відміну від цього рідка фібринова ущільнювальна композиція володіє кращим ущільнюючим дією, ніж ліофілізований фібриновий ущільнювач.

Крім того, несподівано встановлено, що послідовне нанесення ліофілізованого фібринового ущільнювача і рідкої фібринової ущільнювальної композиції забезпечує взаимоусиливающее підвищення ущільнюючого властивості. Відмічено підвищення ущільнюючої здібності приблизно в 1,7 рази порівняно з ущільнюючим здатністю рідкої фібринової ущільнювальної композиції. Однак взаимоусиливающее підвищення ущільнюючих властивостей не було виявлено при послідовному нанесенні ліофілізованого фібриногену або лиофилизироввлено, що висушування слизової оболонки перед нанесенням рідкої фібринової ущільнювальної композиції (наприклад, шляхом нанесення сухого білка, такого як сухий альбумін, на слизовий шар) не призводить до підвищення ущільнюючих характеристик рідкої фібринової ущільнювальної композиції.

Ці дані сприяли розробці удосконаленого способу створення фібринової матриці з більш високою ущільнюючої здатністю на слизовій оболонці або інший вологої тканини. Фібринову матрицю, отриману згідно з принципами цього винаходу, можна використовувати для ущільнення дефектів у слизовій оболонці або інший вологої тканини, наприклад, на тканинах, що перебувають у постійному русі, таких як тканини шлунково-кишкового тракту і легенів.

Термін «тканина» відноситься до асоціації клітин і (або) клітинних компонентів, об'єднаних для виконання конкретної функції. Клітини тканини можуть належати до одного типу або більш ніж до одного типу. Тканина може бути штучною, де клітини вирощені для забезпечення функціонування подібно тканини в живому організмі. Тканина може бути тканиною організму людини або тварини.

Термін «фібринова матриця» відноситься до фибрину, підлозі�тнительной композиції.

Термін «ефективне кількість твердої фібринової ущільнювальної суміші» відноситься до кількості твердого компонента, що містить фібриноген, і кількістю твердого компонента, що містить протеолітичний фермент, здатний до утворення фібрину при взаємодії з фібриногеном, які після гідратації на вологої тканини утворюють фібриновий згусток.

Термін «ефективне кількість рідкої фібринової ущільнювальної композиції» відноситься до кількості рідкого компонента, що містить фібриноген, і кількістю рідкого компонента, що містить протеолітичний фермент (здатний до утворення фібрину при взаємодії з фібриногеном), які забезпечують утворення фібринового згустку після змішування рідких компонентів.

Без прив'язки до механізму виходить, що після нанесення твердої ущільнювальної суміші на вологу тканину відбувається її гідратація. Гидратированная тверда ущільнювальна суміш заповнює тканина, отверждая рідина, присутню у вологому тканини і утворюючи фібриновий шар у безпосередній близькості до тканини. Потім наносять рідку фібринову ущільнювальну композицію на цю заповнену тканину, що призводить до підвищення ущільнюючої здібності і пть губку або марлю здатне знизити ризик утворення спайок в післяопераційному періоді.

Термін «спайка» відноситься до неправильного з'єднанню між тканинами і (або) органами. Зазвичай спайки утворюються після хірургічних операцій, наприклад внаслідок нерівномірного обробки тканин; внаслідок висушування поверхні тканини і (або) з-за присутності реакційно-здатних сторонніх тіл (наприклад, шовних матеріалів, талькового пудри або залишків волокна) на операційному полі.

Термін «слизова оболонка» або «слизова тканина» відноситься до вологої тканини, що покриває деякі органи і порожнини організму. Зазвичай слизова тканина секретує слизовий матеріал. Приклади слизової тканини включають, крім іншого, слизову оболонку порожнини рота, наприклад буккальную і сублингвальную; слизову оболонку носа; слизову оболонку ока; слизову оболонку статевих органів; ректальную слизову оболонку; слизову оболонку вуха; слизову оболонку легень; слизову оболонку бронхів; слизову оболонку шлунка; слизову оболонку кишечника; слизову оболонку органів нюху; слизову оболонку матки; і слизову оболонку стравоходу. Термін «слизовий» використовується для визначення сирого (вологого) та в'язкого матеріалу, такого як речовина, багате муцином, альбуміном гликопрот�вибудовується тканини. Тканина може змочуватися фізіологічними рідинами організму, такими як сироватка, інфільтрат сироватки, кров і запальні рідини, і (або) іншими рідинами (текучими середовищами), такими як фосфатний буферний розчин (ФБР). В одному варіанті здійснення цього винаходу текуча середовище не містить факторів згортання крові (тобто не містить фібриногену).

В рамках цього документа термін «дефект» відноситься до надриву, розбіжності, каналу, фиссуре, проколу, рані, свищу, отвору, порізу, щілини, перфорації, тріщині, проколу або розриву, підтікання, наприклад в тканини. Наприклад, дефект може виникнути в результаті накладання анастомозу. Дефект може бути вродженим, наприклад грижа; викликаний патологією в організмі, наприклад серома, грижа, інфекція, запалення; виникнути після хірургічного втручання, накладення ниткового і (або) скобочного шва; або обумовлений зовнішніми факторами, наприклад такими як нещасний випадок, травми.

Термін «підтікання» відноситься до просочування або витікання речовини, наприклад текучого середовища, в'язкого матеріалу і (або) повітря, наприклад через надрив, розбіжність, канал, фісурру, прокол, рану, свищ, отвір, поріз, щілини, отвори, тріщини,урів, застосовується для повторного з'єднання двох або більше ділянок органу або тканини. Процедуру можна виконувати після розсічення сечовивідних шляхів (уретри), горла (стравоходу) або при проведенні хірургічних операцій на кишечнику. Процедуру можна виконувати після видалення ураженої тканини (такий як запалена, ракова тканину або тканину з іншою патологією, наприклад при виразковій хворобі).

Справжній винахід також відноситься до набору, містить: (i) контейнер (- и), що містить(ие) тверді компоненти, що містять (a) фибриногенний компонент і (b) протеолітичний ферментний компонент, здатний до утворення фібрину при взаємодії з фібриногеном; і (ii) принаймні два окремих контейнера, причому щонайменше один окремий контейнер містить рідкий, заморожений або твердий фибриногенний компонент, і щонайменше другий окремий контейнер містить рідкий, заморожений або твердий протеолітичний ферментний компонент, здатний до утворення фібрину при взаємодії з фібриногеном.

Компоненти (a) і (b) елемента (i) можуть знаходитися в окремих контейнерах або в одному і тому ж контейнері у вигляді суміші. В одному варіанті здійснення, якщо щонайменше два отдельде суміші. В іншому варіанті здійснення, якщо принаймні два окремих контейнера (ii) містять тверді компоненти, то щонайменше один контейнер містить водний розчин для їх гідратації.

На відміну від наявних у продажу фібринових наборів, призначених спеціально для гемостазу, набір, що становить предмет цього винаходу, припустімо також для ущільнення підтікань у тканинах, які не є збагаченими, мають невелику кількість, недостатня кількість або не мають кровоносних судин.

Неогранічівающімі прикладами тканин, які не є збагаченими, що мають невелику кількість, недостатня кількість або не мають кровоносних судин, є: тверда мозкова оболонка, сечовий міхур, очі, легені і жовчний міхур.

В одному варіанті здійснення цього винаходу набір призначений для ущільнення підтікань в тканинах, не є збагаченими, що мають невелику кількість, недостатня кількість або не мають кровоносних судин.

Термін «гемостаз» відноситься до здатності агента зупиняти кровотечу з пошкоджених кровоносної судини і (або) сприяти утриманню крові в межах кровоносної судини.

Крім то�ія з пошкодженого кровоносної судини і (або) для утримання крові в межах кровоносної судини, набір, що становить предмет цього винаходу, припустімо також для ущільнення підтікань речовин, що не містять крові і плазми, наприклад таких як цереброспінальна рідина (ЦСР), повітря, вміст кишечника, жовч, лімфатична рідина і рідка частина склоподібного тіла.

В одному варіанті здійснення фібринова матриця або набір, що становить предмет цього винаходу, призначений для ущільнення підтікань у тканинах, повільно виділяють текуче середовище або некровоточащих. Термін «повільне виділення текучого середовища» позначає, наприклад, незначна кровотеча. Термін «повільне виділення текучого середовища» охоплює випадки кровотечі, де має місце відносно низька крововтрата при відносно низькій швидкості.

Набір також може містити інструкцію із застосування. Набір також може містити засоби для розтину і (або) зшивання тканини або органу скобами або ниткою, такі як механічні або ручні різальні і зшивають пристрою. В якості контейнера можна використовувати ампулу, попередньо наповнений шприц, бутилкою, трубку або будь-який інший допустимий контейнер, що містить тверді або рідкі компоненти. Контейнери можуть бути різного раолее приблизно 10 мл, а кожен твердий компонент може мати масу сухої речовини не більше приблизно 3 р. В набір також може бути додатково включений аплікатор для введення твердих і рідких компонентів.

Фібринову матрицю або набір у відповідності з цим винаходом можна використовувати для будь-яких терапевтичних цілей. Термін «будь-які терапевтичні цілі» відноситься до будь-яких видів лікування і профілактики у об'єкта. Приклади терапевтичних цілей включають, крім іншого, ущільнення висвердленого отвору, виконаного в тканині або органі, наприклад у кістки; анастомоз на кровоносних судинах; з'єднання частин тканини, наприклад частин м'яких тканин; обробку або запобігання дефектів твердої мозкової оболонки, наприклад розривів і підтікань після інфекцій твердої мозкової оболонки, фісур або тріщин; зупинку або запобігання кровотеч; усунення або запобігання витоків повітря, наприклад після резекції легені; обробку або запобігання дефектів після перфорації кишечника; обробку або запобігання дефектів після процедури анастомозу, виконаної на будь тканини, наприклад такий як матка,стравохід, шлунок, підшлункова залоза, протока підшлункової залози, желчн�едотвращение післяопераційних підтікань у будь-якої тканини, наприклад такий як матка, стравохід, шлунок, підшлункова залоза, протока підшлункової залози, жовчний міхур, жовчний проток, кишечник (включаючи тонкий кишечник і товсту кишку) і пряма кишка; запобігання або зниження частоти виникнення післяопераційних підтікань по лінії скобочного або ниткового шва, наприклад шляхом накладення фібринової матриці у відповідності з цим винаходом щонайменше на частину дефекту, такого як скобочний/нитковий шов; для міцної фіксації протеза, наприклад під час операції з приводу грижі; для посилення скобочного/ниткового шва; запобігання або зменшення витоку альвеолярного повітря; обробку або запобігання ниркових дефектів; обробку або запобігання свищів; обробку або запобігання серцевих дефектів, наприклад проникаючих ран у серце; зміцнення судинного трансплантата; усунення або запобігання течі цереброспінальної рідини.

В одному варіанті здійснення цього винаходу терапевтичне використання передбачає ущільнення підтікань в тканинах, не збагачених кровоносними судинами або мають недостатню кількість кровоносних судин.

В іншому варіанті здійснення >�ибриновую матрицю, що становить предмет цього винаходу, можна використовувати для ущільнення дефектів без скоб і ниток.

Термін «скоба або нитка» включає будь-який скріплює елемент, що використовується для закриття рани, такий як, крім іншого, скоба, кліпса, штифт, гачок, нитка і т. п.

Термін «принаймні частина дефекту» в рамках цього документа відноситься до області, яка менше, дорівнює або більша області дефекту. Наприклад, область може становити 1, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 або 100%, включаючи будь діапазон між зазначеними процентними величинами, або більше від області дефекту. В одному варіанті здійснення цього винаходу фібринову матрицю або набір, що становить предмет цього винаходу, застосовують для посилення скобочного/ниткового шва. Наприклад, 10-міліметровий розріз, виконаний у об'єкта під час хірургічної операції, спочатку зшивають за допомогою нитки або скоб. Для підсилення на скобочний/нитковий шов наносять 100 мг твердої фібринової ущільнювальної суміші (1 000 МО тромбіну на 70 мг фібриногену), після чого розпилюють рідку фібринову ущільнювальну композицію. Рідкий фібрин наносять шляхом розпилення композиції загальним об'ємом 2 мл (у співвідношенні двох компонеа включає тварин, належать до класу ссавців, включаючи людину. В одному варіанті здійснення об'єктом є пацієнт.

В одному аспекті даний винахід пропонує спосіб нанесення фібринової матриці на вологу тканину. Спосіб включає наступні стадії: нанесення ефективного кількості твердої фібринової ущільнювальної суміші на вологу тканину; і нанесення ефективного кількості рідкої фібринової ущільнювальної композиції поверх щонайменше частини твердої фібринової ущільнювальної суміші, причому ефективні кількості твердої фібринової ущільнювальної суміші і рідкої фібринової ущільнювальної композиції достатні для формування фібринової матриці на вологої тканини, що володіє поліпшеною ущільнюючої здатністю, пов'язаної з нанесенням ефективного кількості або рідкої фібринової ущільнювальної композиції, або твердої фібринової ущільнювальної суміші. Переважним є нанесення твердого фібринового ущільнювача перед рідким фибриновим ущільнювачем, що підвищує ущільнюючу здатність рідкого фібринового ущільнювача.

Термін «волога тканина» відноситься до змочується тканини і включає, наприклад, слизову оболонку, слизову тканина та іншу влаж�підлягає фібриногену. Термін «не містить фібриногену» відноситься, наприклад, до концентрації фібриногену менше ніж 1,5 г/л

Термін «поверх щонайменше частини твердої фібринової ущільнювальної суміші» в рамках цього документа відноситься до області, що варіюється від області з меншою площею поверхні до області з більшою площею поверхні у порівнянні з областю, на яку нанесений(и) твердий(і) фібриновий(і) ущільнювальний(і) компонент(и). Наприклад, рідка фібринова ущільнювальна композиція може бути нанесена на 1, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 або 100%, включаючи будь діапазон між зазначеними процентними величинами, від площі поверхні, на яку нанесений(и) твердий(і) компонент(и). В альтернативному варіанті здійснення рідку фібринову ущільнювальну композицію можна наносити на велику площу поверхні, ніж площа, на яку нанесений(и) твердий(і) компонент(и), наприклад на всю поверхню вологою тканини або органу.

Термін «рідка фібринова ущільнювальна композиція» відноситься в рамках цієї заявки щонайменше до двох окремих рідких компонентів, необхідним для утворення фібринового ущільнювача. Щонайменше один окремий компонент містить фібриноген, і м�ри взаємодії з фібриногеном (або з фібриноген-містить композицією). При введенні щонайменше двох окремих компонентів, наприклад при ін'єкції в цільову область, рідкі компоненти вступають у взаємодію, імітуючи заключні стадії коагуляційного каскаду крові і утворюючи відомий фахівцям згусток, фібрин.

Термін «м'яка тканина» зазвичай відноситься до структур організму, що з'єднує, підтримуючим, що охоплює і (або) оточуючим інші структури і органи. М'яка тканина може бути сполучною тканиною або несоединительной тканиною. Приклади м'якої тканини включають, крім іншого, сухожилля, зв'язки, волокнисті сполучні тканини, синовіальну перетинку, сполучнотканинну оболонку, м'язи, м'язову стінку, нерви, кишечник, жирову тканину, печінку, шкіру, селезінку і кровоносні судини.

Термін «тверда фібринова ущільнювальна суміш» в рамках цієї заявки відноситься до твердої композиції, що містить вихідні речовини для утворення фібринового ущільнювача. Композиція містить твердий протеолітичний фермент, здатний до утворення фібрину при взаємодії з фібриногеном (або фібриноген-містить композицією), і твердий фібриноген. Тверда суміш також може містити інші компоненти, такі як альбумін. У качдном варіанті здійснення цього винаходу тверда композиція містить фибриногенний і тромбиновий компоненти в ліофілізованої формі. В іншому варіанті здійснення розчини, що містять тромбін і фібриноген, висушують окремо, наприклад шляхом ліофілізації, для отримання відповідних твердих компонентів у складі загальної твердої фібринової ущільнювальної суміші. В іншому варіанті здійснення цього винаходу отримані тверді матеріали подрібнюють в порошок за допомогою млина надтонкого помелу або млини з охолоджуваною лопаткою або вручну шляхом протирання твердого матеріалу через сито, наприклад за допомогою шпателя. В одному варіанті здійснення цього винаходу матеріал подрібнювали протиранням через сито з чарунками 200 мкм за допомогою шпателя. В іншому варіанті здійснення цього винаходу тверді матеріали подрібнено, використовуючи метод, описаний в міжнародній патентній заявці WO 2008/053475, включеної в справжній документ шляхом посилання.

Розмір частинок твердого матеріалу після помелу може становити менше 1 000 мкм. В одному варіанті здійснення цього винаходу розмір частинок твердого матеріалу після помелу складає не більше 200 мкм. Розмір часток може перебувати в діапазоні від 10 до 100 мкм або від 10 до 60 мкм. Твердий протеолітичний фермент і твердий фибриног� окремо і наносять на цільову поверхню одночасно або один за іншим. В одному варіанті здійснення цього винаходу твердий протеолітичний фермент і твердий фібриноген надають у вигляді суміші.

Справжній винахід також пропонує спосіб отримання фібринової матриці на змочується поверхні. Спосіб включає наступні стадії: надання твердого компонента, що містить фібриноген; надання твердого компонента, що містить протеолітичний фермент, здатний до утворення фібрину при взаємодії з фібриногеном; надання рідкої фібринової ущільнювальної композиції; нанесення ефективного кількості твердих компонентів щонайменше на частину змочується поверхні; нанесення ефективного кількості рідкої фібринової ущільнювальної композиції поверх щонайменше частини твердих компонентів.

Термін «смачиваемая поверхню» відноситься до вологої поверхні. Поверхнею можуть бути слизова оболонка, слизова тканина і (або) інша волога тканина. Поверхня може змочуватися біологічними рідинами, такими як інфільтрат сироватки, кров і запальні рідини, і (або) небиологическими рідинами, такими як ФБР.

Смачиваемая поверхня може представляти собою поверхню годину�омимо іншого, область статевих органів, включаючи матку, піхву і яєчники; легені; анус; селезінку; печінка; на тверду мозкову оболонку; нирки; стравохід; шлунок; підшлункову залозу; протока підшлункової залози; жовчний міхур; жовчний проток; кишечник (включаючи тонкий кишечник і товсту кишку); і серцевий м'яз. Поверхня може кровоточити або не кровоточити. В одному варіанті здійснення цього винаходу поверхня не кровоточить. В іншому варіанті здійснення цього винаходу поверхня змочується текучої середовищем, що не містить фактора згортання крові (тобто не містить фібриногену). Поверхня може являти собою будь-яку поверхню, наприклад робочу поверхню, поверхню протеза.

Термін «принаймні частина змочується поверхні» в рамках цього документа відноситься до області, яка менше, дорівнює або більше змочується поверхні. Наприклад, область може становити 1, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 або 100%, включаючи будь діапазон між зазначеними процентними величинами, або більше від площі поверхні.

Тверді компоненти у твердій фібринової суміші взаємодіють після гідратації, наприклад після контакту з вологою тканиною, утворюючи фібриновий ущільніть�рілої відносно низький вміст рідини. Перевага полягає в тому, що фибриногенний компонент використовується твердої фібринової ущільнювальної суміші здатний до швидкого розчинення і (або) гідратації після нанесення на тканину.

Термін «поверх щонайменше частини твердого(их) компонента(ів)» відноситься до області, що варіюється від області з меншою площею поверхні до області з більшою площею поверхні у порівнянні з областю, на яку нанесений(и) твердий(і) фібриновий(і) ущільнювальний(і) компонент(и). Наприклад, рідка фібринова ущільнювальна композиція може бути нанесена на 1, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 або 100%, включаючи будь діапазон між зазначеними процентними величинами, від площі поверхні, на яку нанесений(и) твердий(і) компонент(и). В альтернативному варіанті здійснення рідку фібринову ущільнювальну композицію можна наносити на велику площу поверхні, ніж площа, на яку нанесений(и) твердий(і) компонент(и), наприклад на всю поверхню.

У відповідності з цим винаходом твердий фібриноген, отриманий шляхом ліофілізації фібриноген-містить розчину з концентрацією фібриногену 20 мг/мл, відновили у водному розчині при кімнатній температурі протягом періоду часу мо�ой ущільнювальної суміші отримано з фібриноген-містить розчину з концентрацією фібриногену не більше 150, наприклад не більше 85, 25 мг/мл або менше 20 мг/мл

Тверда фібринова ущільнювальна суміш може бути отримана шляхом висушування рідкої фібринової ущільнювальної композиції. Допускається використання будь-якої відомої в даній області процедури висушування, включаючи, крім іншого, лиофилизацию (сублимационное висушування) або висушування розпиленням. Висушування можна виконувати при різних температурах з використанням різного обладнання для висушування, такого як камера з регульованою вологістю, сушильна піч, сушильний канал, вакуумна сушарка, або будь-яким іншим допустимим способом, не впливає на утворення згустку.

Термін «твердий» в рамках цього опису ставиться до композиції, що містить рідину в кількості не менше 5%, наприклад менш 4, 3, 2, 1% по вазі або менше від загальної ваги сухої композиції. Термін «твердий» і терміни «сухий» або «порошок» є взаємозамінними.

Твердий фібриновий ущільнювач можна наносити на тканину за допомогою дозатора. Приклади дозаторів представлені в патенті США № 1776489 і в патенті США № 7455248, включених в цей документ шляхом посилання.

Термін «покращена ущільнююча здатність» відноситься, наприклад, до уплотняющеодного рідкого ущільнювача. В одному варіанті здійснення цього винаходу ущільнююча здатність зростає приблизно в 1,7 рази по відношенню до нанесення рідкої фібринової ущільнювальної композиції. Ущільнюючу здатність можна виміряти, наприклад, за допомогою руйнівного випробування, описаного вище.

Фраза «ущільнююча здатність, збільшена в 1,2 рази» відноситься до ущільнюючої здатності, яка на 20% перевищує ущільнюючу здатність, що досягається при нанесенні рідкої фібринової ущільнювальної композиції. Фраза «ущільнююча здатність, збільшена в 1,7 рази» відноситься до ущільнюючої здатності, яка на 70% перевищує ущільнюючу здатність, що досягається при нанесенні рідкої фібринової ущільнювальної композиції.

Як протеолітичного ферменту можна використовувати тромбін і (або) речовина, що отримується з зміїної отрути. Рідкі компоненти можуть бути заморожені до моменту використання (наприклад, при температурі -18°C або нижче) або висушені, наприклад, шляхом ліофілізації, для тривалого зберігання. Висушені компоненти можуть бути відновлені перед застосуванням шляхом додавання різного обсягу фармацевтично прийнятного носія. Термін «фармацевтично прийнятний овеку або іншим тваринам. Носій може бути обраний з числа відомих в даній області носіїв, таких як, крім іншого, фосфатний буферний розчин (ФБР), фізіологічний розчин, розчин хлориду натрію, розчин хлориду кальцію, лактат Рінгера (ЛР), 5% декстроза в нормальному фізіологічному розчині і вода для ін'єкцій. Для відновлення ліофілізованого фібриногену перед використанням можна застосовувати стерилізовану воду. Для відновлення ліофілізованої тромбіну перед використанням можна застосовувати стерильний розчин хлориду кальцію або воду, наприклад дистильовану воду. Відновлені ліофілізовані фібриноген і тромбін можна використовувати в складі рідкої фібринової ущільнювальної композиції з подальшим утворенням фібрину. Два компонента можна наносити на потрібну область одночасно або один за одним.

В одному варіанті здійснення цього винаходу фібриноген-містить компонент складається з біологічно активного компонента (БАК), що представляє собою розчин білків, отриманих із плазми крові. Цей компонент може додатково містити транексамовую кислоту і аргінін, або лізин, або суміші аргініну і лізину, або їх фармацевтично прийнятні сол�реципитат» відноситься до компоненту крові, що одержуються з замороженої плазми, отриманої з цільної крові. Кріопреципітат може бути отриманий при розморожуванні замороженої плазми на холоді, зазвичай при температурі 0-4°C, в результаті чого утворюється обложений супернатант, який містить фібриноген і фактор XIII. Осад можна зібрати, наприклад, шляхом центрифугування. Зазвичай БАК містить фактор VIII, фібронектин, фактор фон Віллебранда (vWF), витронектин і т. д., наприклад, як описано в патенті США № 6121232 і відповідної опублікованій заявці PCT WO 98/33533, включених в цей документ шляхом посилання.

БАК може містити стабілізатори, такі як аргініну гідрохлорид. Зазвичай кількість фібриногену в БАК знаходиться в діапазоні від приблизно 40 до приблизно 60 мг/мл Кількість транексамової кислоти в розчині БАК може перебувати в діапазоні приблизно від 80 до 110 мг/мл Кількість аргініну гідрохлориду може перебувати в діапазоні приблизно від 15 до приблизно 25 мг/мл

Розчин необов'язково буферизують до фізіологічно сумісний рівня кислотності. Буферний розчин може складатися з гліцину, цитрату натрію, хлориду натрію, хлориду кальцію і води для ін'єкцій, що використовується в якості срединатрия може бути в діапазоні від близько 1 до близько 5 мг/мл, хлорид натрію може бути в діапазоні від приблизно 5 до приблизно 9 мг/мл) і концентрація хлориду кальцію може становити приблизно 0,1-0,2 мг/мл

В іншому варіанті здійснення концентрацію плазміногену і плазміну в композиції БАК знижують до значення, яке становить не більше 15 мкг/мл, наприклад до 5 мкг/мл або менше плазміногену, наприклад, способом, описаним у патенті США № 7125569 і відповідної опублікованій заявці PCT WO 02/095019, включених в цей документ шляхом посилання.

Допускається також, щоб фібринова ущільнювальна композиція містила компоненти, що сприяють утворенню згустку, такі як Ca2+, фактор VIII, фібронектин, витронектин, фактор фон Віллебранда (vWF), які можуть бути підготовлені у вигляді окремих компонентів або в суміші з рідкими компонентами.

Рідку фібринову ущільнювальну композицію можна наносити на тканину за допомогою дозатора, який дозволяє наносити ущільнювач безпосередньо на тканину або інший носій, або робочу поверхню за допомогою струменя повітря або без неї, наприклад шляхом додавання по краплях. В одному варіанті здійснення цього винаходу ущільнювач розпилюють під тиском повітря 103,4 665067, 5989215, 6461361 і 6585696, 6620125 і 6802822, і в публікаціях PCT №№ WO 96/39212, WO 2007/059801 і WO 2010/095128, включених в цей документ шляхом посилання.

Перед використанням хірургічних операціях рідка фібринова ущільнювальна композиція містить щонайменше два компоненти. В одному варіанті здійснення рідка фібринова ущільнювальна композиція містить два рідких компонента, причому один компонент містить фібриноген і при взаємодії з другим компонентом, що містить протеолітичний фермент, такий як людський тромбін, утворює фібриновий згусток. Під час хірургічних операцій окремі рідкі компоненти, наприклад два рідких компонента, наносять одночасно або один за іншим, наприклад, за допомогою двох шприців, в результаті чого два компоненти змішуються з утворенням фібрину.

В одному варіанті здійснення цього винаходу в якості протеолітичного ферменту використовується людський тромбін, що володіє активністю в діапазоні приблизно від 2 до приблизно 4 000 МО/мл Коагулирующую активність тромбіну можна виміряти безпосередньо, наприклад, у відповідності з процедурою випробування відповідно до Європейської фармакопеї (0903/1997), і (або) опосередковано, наприклад путеной заявці на патент США 2010/0203033) або будь-яким іншим способом, відомим в даній області. Фахівцеві буде зрозуміло, що у складі фібринового клею може бути вказаний коагулюючий білок замість коагулирующего фібриногену.

В іншому варіанті здійснення цього винаходу фибриногенний і протеолітичний ферментні компоненти наносять таким чином, що однакові обсяги двох компонентів змішують і наносять на ранову поверхню пацієнта. Зрозуміло, слід розуміти, що фібринову матрицю, що становить предмет цього винаходу, можна використовувати під час хірургічних операцій, а також в інших ситуаціях, коли необхідно зупинити кровотечу.

Тверду фібринову ущільнювальну суміш можна отримати шляхом змішування твердого фібриногену і твердого тромбіну в будь-якому необхідному діапазоні співвідношень. Наприклад, якщо твердий фибриногенний компонент отримали з фібриноген-містить розчину з концентрацією фібриногену 40-85 мг/мл, а твердий тромбиновий компонент отримали з тромбін-містить розчину з концентрацією тромбіну приблизно 800-1 200 МО/мл, два твердих компонента можуть бути змішані у співвідношенні 1:1, 3,2:1, 6,4:1 відповідно і т. д. Змішування може проводитися в умовах регульовано в закритій ємності.

Перед висушуванням фібриноген-містить розчин можна розвести, наприклад, до отримання концентрації фібриногену 25 мг/мл або 20 мг/мл Змішування двох компонентів можна виконувати перед нанесенням твердої фібринової ущільнювальної суміші на тканину або можна наносити ці компоненти безпосередньо на тканину в необхідній пропорції.

Під час нанесення рідкої фібринової ущільнювальної композиції на тканину можна наносити фібриноген-містить компонент і тромбін-містить компонент в будь-якому необхідному діапазоні співвідношень. Наприклад, якщо концентрація фибриногенного компонента становить 40-85 мг/мл і концентрація тромбіну становить приблизно 800-1 200 МО/мл, два компоненти можуть бути змішані у співвідношенні 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6 відповідно і т. д. В одному варіанті здійснення цього винаходу компоненти рідкого фібринового ущільнювача використовують у співвідношенні 1:1.

Фібринову матрицю, що становить предмет цього винаходу, можна використовувати в терапевтично ефективній кількості. Термін «терапевтично ефективна кількість» відноситься до дозі, необхідній для профілактики або лікування захворювання, розлади або патологічного стану. Ефективну �еза) та інших факторів, які можуть бути виявлені фахівцями в даній області. Наприклад, тверду фібринову ущільнювальну суміш можна наносити в обсязі від 0,1 до 100 мг на см2наприклад , в обсязі 0,5, 1, 4, 8, 16, 30, 60 або 100 мг на см2. Рідку фібринову ущільнювальну композицію можна наносити в обсязі приблизно від 0,01 до приблизно 1 мл на см2наприклад , в обсязі 0,01, 0,05, 0,5 або 1 мл на см2.

В одному варіанті здійснення при розрізі 10 мм на ділянку площею 6 см2послідовно шляхом розсіювання наносять 100 мг твердої фібринової ущільнювальної суміші (1 000 МО тромбіну на 70 мг фібриногену), після чого розпилюють рідку фібринову ущільнювальну композицію. Рідку композицію наносять шляхом розпилення загальним об'ємом 2 мл (у співвідношенні двох компонентів 1:1), де тромбін становить 1 000 МО/мл і фібриноген становить 70 мг/мл

У відповідності зі способами цього винаходу рідка фібринова ущільнювальна композиція може бути надана у твердій формі і відновлено перед нанесенням. Відновлення можна здійснювати шляхом додавання фармацевтично прийнятного носія в різних обсягах. Термін «відновлення» відноситься до способу перетворення твердої форми в ж�і на водній основі до сухих речовин, з яких заздалегідь видалили рідина.

В альтернативному варіанті здійснення рідка фібринова ущільнювальна композиція може бути надана в замороженому вигляді, наприклад при температурі
-18°C або нижче, і розморожена перед нанесенням. Розморожування можна здійснювати шляхом інкубування контейнерів, що містять рідкі компоненти, при кімнатній температурі (від 20°C до 25°C), при температурі від 2 до 8°C або при температурі 37°C. В іншому варіанті здійснення рідкі компоненти наносять одночасно. В іншому додатковому варіанті здійснення рідкі компоненти наносять один за іншим.

Твердий компонент може бути наданий в рідкій формі і висушений перед нанесенням, наприклад шляхом ліофілізації (сублимационное висушування) або висушування розпиленням. В альтернативному варіанті здійснення твердий компонент може бути наданий у замороженому вигляді і висушений перед нанесенням. Заморожені компоненти можуть бути розморожені і потім висушені або можуть бути перетворені безпосередньо з замороженої у тверду форму, наприклад шляхом сублімації.

Твердий компонент може бути наданий у зваженому стані, наприклад в будь-якому допустимому раствоорой не розчиняється твердий компонент, таку як спирти, ефіри або інші органічні рідини. Тверді компоненти та (або) рідкі компоненти можна наносити одночасно або один за одним у відповідності зі способами, що становлять предмет цього винаходу. В одному варіанті здійснення тверді компоненти надають у вигляді суміші і наносять одночасно. В іншому варіанті здійснення тверді компоненти надають в окремих контейнерах і наносять одночасно. В іншому додатковому варіанті здійснення тверді компоненти надають в окремих контейнерах і наносять один за іншим.

Фібринову матрицю, що становить предмет цього винаходу, можна наносити будь-яким способом, що використовується хірургами для усунення або запобігання дефектів, включаючи, крім іншого, відкрите оперативне втручання і мінімально інвазивну операцію (МІО), таку як лапароскопічна операція. В одному варіанті здійснення цього винаходу на операційному полі виконують розріз і на дефект наносять фібринову матрицю. В іншому варіанті здійснення на операційному полі виконують розріз, розріз зшивають скобами або ниткою і на скобочний або нитковий шов наносять фібринову матрицю. Пацієнт получгическому втручанню, при якому хірург отримує прямий доступ до операційного поля за допомогою відносно великого розрізу.

В рамках цього документа термін «мінімально інвазивна операція» відноситься до хірургічного втручання, при якому хірург отримує доступ до операційного поля за допомогою невеликих розрізів або через порожнину організму, або через анатомічне отвір, наприклад шляхом лапароскопії. Для візуалізації операційного поля можна використовувати спеціальну техніку, таку як мініатюрні камери з мікроскопами, мініатюрні оптоволоконні ліхтарі і монітори з високою роздільною здатністю. Стосовно до операційного поля можна використовувати інструменти, що мають «кінцеві затискачі», таких як щипці, кусачки, голкотримачі, прижигатели і т. п.

Фібриноген і тромбін-містять компоненти постачають такі виробники, як OMRIX (наприклад, EVICEL®, QUIXIL®, ADHEXIL™; EVITHROM®); Baxter (наприклад, TISEEL®); CSL (наприклад, Beriplast®) і т. п. В одному варіанті здійснення рідкі фібринові ущільнювальні компоненти отримують із загальної плазми людини і поставляють у вигляді набору для одноразового застосування, що включає дві ампули: одна ампула містить біологічно активний компонент 2 (БАК2), а інша ампула соді�му варіанті здійснення компонент БАК2 являє собою стерильний розчин з рн 6,7-7,2, по суті складається з концентрату людського фібриногену. Фібриноген - білок крові людини, утворює згусток при взаємодії з тромбином. Рідка фібринова ущільнювальна композиція, така як розчин БАК2, може містити: концентрат людського фібриногену (55-85 мг/мл), аргініну гідрохлорид, гліцин, натрію хлорид, цитрат натрію, хлорид кальцію і воду для ін'єкцій (WFI).

В одному варіанті здійснення тромбиновий компонент представлений у вигляді стерильного розчину, рн 6,8-7,2, що містить людський тромбін високого очищення, що активує коагуляцію кінцевого об'єднаного продукту. Тромбін - це високоспецифичная протеаза, трансформує фібриноген, що міститься в БАК2, в фібрин. Розчин тромбіну може містити: людський тромбін (800-1 200 МО/мл), хлорид кальцію, людський альбумін, манітол, ацетат натрію і воду для ін'єкцій.

Кріопреципітат, який може бути вихідним матеріалом для БАК2, і криосупернатантная плазма, яка може бути вихідним матеріалом для отримання тромбіну, можуть бути отримані із загальної плазми людини. Фахівцям в даній області добре відомі стадії отримання кріопреципітату та криосупернатантной плазми. В одному варіанті осуле її активації хлоридом кальцію, наприклад, як описано в патенті США № 5143838, включеному в справжній документ шляхом посилання. В іншому варіанті здійснення фибриногенний компонент отримують з кріопреципітату, зокрема з концентрованого кріопреципітату.

Фибриногенний і тромбиновий компоненти, згадані вище як частина рідкого фібринового ущільнювального компонента або ліофілізованого компонента, можуть бути отримані з плазми людини або тварини. Проте допускається також отримання компонентів рекомбінантними способами. Фибриногенние компоненти можуть бути отримані у відповідності зі способами, описаними в патенті США № 6121232 і опублікованій заявці PCT WO 98/33533, де плазмін(оген) видаляють, як описано в опублікованій заявці EP 1390485, і не додають транексамової кислоти.

Фібринові ущільнювальні компоненти у складі двокомпонентного рідкого фібринового ущільнювача або твердої фібринової ущільнювальної суміші, отримані з крові або фракцій крові, зазвичай піддають щонайменше двом дискретним стадіями інактивації/видалення вірусів. Процеси інактивації та видалення вірусів можна виконувати, наприклад, такими способами: нанофильтрацией; розчиненням/очищенням; обробкою при низькому pH, �ін «стадія інактивації вірусів» ставиться до ситуації, в якій віруси залишаються у розчині, але виявляються нежиттєздатними, наприклад при розчиненні їх жирової оболонки. Термін «стадія видалення вірусів» ставиться до ситуації, в якій віруси фізично видаляють з розчину, наприклад шляхом виключення за розміром.

Термін «щонайменше дві дискретні стадії інактивації/видалення вірусів» включає виконання принаймні двох різних і незалежних видів обробки для інактивації або видалення вірусів. Допускається комбінування двох або більше з наступних неограничивающих прикладів обробки: пастеризація, розчинення/очищення (Н/О), нанофильтрация, обробка при низькому pH, УФ-опромінення та обробка тіоціанатом натрію.

Використання БАК, отриманого з концентрованого кріопреципітату, є переважним, оскільки така фракція, крім фібриногену, містить також цінні компоненти крові, які відіграють важливу роль в процесі коагуляції крові при взаємодії протеолітичного ферменту, такого як людський тромбін, з розчином БАК. До числа цінних компонентів відносяться, наприклад, фактор VIII, фактор XIII, фібронектин, витронектин, фактор фон Віллебранда (vWF), і т. д.

Нанесення твердої фібринової уплотнител�ибриновой матриці на тканини з більш високою ущільнюючої здатністю, досягти яку допомогою нанесення кожної зі згаданих ущільнювальних композицій окремо не представляється можливим. Фібринова матриця, утворена згідно з цим винаходом, особливо придатна для ущільнення дефектів у тканинах і слизових інший кишкової або вологої тканини, що перебувають у постійному русі, наприклад в тканини шлунково-кишкового тракту. Наприклад, фібрин у відповідності з цим винаходом можна використовувати для профілактики ускладнень у вигляді підтікань після резекції з накладенням скобочних швів або анастомозу в хірургії шлунково-кишкового тракту. Крім цього, використання фібрину у відповідності з цим винаходом може бути краще для надійної фіксації протеза під час операції з приводу грижі.

Змісту заявок, патентів і публікацій, згаданих вище і далі за текстом, справжнім включені в цей документ шляхом посилання.

Даний винахід далі описано з посиланням на наступні неограничивающие приклади.

ПРИКЛАДИ

Матеріали і способи

Ліофілізація

Ліофілізація виконувалась у відповідності ="0">Час (год:м)Темп. (°C)Вакуум
(Па (мбар))
1Початкові значення--:--4НЕМАЄ
2Заморожування1:00-30НЕМАЄ
3Заморожування1:00-50НЕМАЄ
4Заморожування5:40-50НЕМАЄ
5Отримання0:20-45НЕМАЄ
6Сублімація0:15-4220(0,2)
7Сублімація0:1525:00-2520(0,2)
9Сублімація1:00-1520(0,2)
10Сублімація12:00-1520(0,2)
11Сублімація2:002020(0,2)
12Сублімація5:002020(0,2)
13Вторинне висушування0:302512(0,12)
14Вторинне висушування18:002512(0,12)

Рідкий фібриноген і тромбін

У таких експериментах в якості двокомпонентного жидн; Omrix Biopharmaceuticals Ltd.). Фибриногенний компонент (містить 70 мг фібриногену/мл) використовували у наявному стані і, якщо не вказано інше, тромбиновий компонент використовували у наявному стані (1 000 МО/мл) або розведеним в 10 разів розведеним буферним розчином [0,04 M CaCl2в дистильованої, деіонізованої води (DDW)]. У всіх експериментах рідкий фібриновий ущільнювач розпилювали під тиском повітря 103,4 кПа (15 фунтів на кв. дюйм).

Отримання ліофілізованої суміші фібриногену і тромбіну

Композиції розчинів, що використовуються для отримання ліофілізованих порошків, представляли собою два рідких компонентаEVICEL®. Кожен з компонентів лиофилизировали роздільно згідно з циклом ліофілізації, описаному вище. Перед процедурою ліофілізації фибриногенний компонент розбавляли DDW до отримання концентрації фібриногену 20 мг/мл

Після ліофілізації порошки протирали за допомогою шпателя через сито з чарунками 200 мкм. Протерті порошки фібриногену і тромбіну змішували у співвідношенні за вагою 3,2:1 (дорівнює співвідношенню 1 000 МО тромбіну на 70 мг фібриногену, як у складі EVICEL) або 6,4:1 (дорівнює співвідношенню 500 МО тромбіну на 70 мг фібриногену) відповідно. Змішування виконували в умовах �ня в закритій ємності. Для кожного експерименту готували свіжу порошкову суміш.

Приклад 1. Сила адгезії ліофілізованої фібринової ущільнювальної композиції і рідкої фібринової ущільнювальної композиції.

У наступному експерименті вимірювали сили адгезії ліофілізованої фібринової ущільнювальної композиції і рідкої фібринової ущільнювальної композиції.

Оцінку виконували шляхом дослідження зусилля відшаровування, по суті, як описано в публікації Nicoson ZR, р. Баклі, штат Каліфорнія. «Bond strength of fibrin glue between layers of porcine small intestine submucosa (SIS)». Biomed Sci Instrum. 2002; 38:179-184. Коротко кажучи, випробовувану адгезійну композицію наносили на серозне поле клубової кишки свині (сегмент 4×10 см) через трафарет з парафильма розміром 4×4 см (16 см2) (спосіб нанесення див. нижче).

Після нанесення різних фібринових ущільнювальних композицій трафарет з парафильма видалили, тканина клубової кишки загорнули (сероза до серозе) і залишили для полімеризації на 10 хвилин при кімнатній температурі (приблизно 20-25°C). Для отримання чотирьох реплік сегмент нарізали на смужки розміром 1×10 см і вимірювали силу, необхідну для відокремлення двох злиплих шарів тканини клубової кишки один від одного (відому як посил�тиваемие композиції наносили наступним чином:

- рідкі фибриногенний і тромбиновий компоненти наносили шляхом розпилення однакової кількості фібриногену і тромбіну загальним об'ємом 2 мл. Тромбін наносили в двох різних концентраціях, 100 або 1 000 МО/мл, а фібриноген - у концентрації 70 мг/мл;

- 400 мг кожної ліофілізованої суміші (суміш, що містить 500 або 1 000 МО тромбіну на 70 мг фібриногену, готували, як зазначено в розділі «Матеріали і методи») наносили на трафарет з парафильма розміром 16 см2(на кожну репліку наносили 100 мг). Потім для запобігання висихання тканини на порошок розпилювали ФБР до тих пір, поки порошок не ставав вологим.

Значення сили адгезії для різних випробовуваних композицій представлені на фіг. 1.

Було відзначено, що при формуванні фібрину за допомогою ліофілізованої композиції для поділу двох шарів тканини кишечника потрібно більше зусилля у порівнянні з зусиллям, необхідним у разі застосування рідкої фібринової ущільнювальної композиції (порівняйте зусилля відшаровування при використанні ліофілізованої композиції і при використанні рідкої композиції з однаковою концентрацією 1 000 МО тромбіну на 70 мг фібриногену).

Таким чином, було встановлено, що сила адгезії меЂмечено, твердий фібриноген, отриманий шляхом ліофілізації фібриноген-містить розчину з концентрацією фібриногену 20 мг/мл, відновлювали у водному розчині при кімнатній температурі протягом періоду часу менше 10 хвилин. Більш низька концентрація фібриногену приводить до утворення більш пористого ліофілізованого залишку і більше пористих частинок після помелу цього залишку. Вважається, що висока пористість дозволяє рідини легше проникати в частинки, в результаті чого скорочується час регідратації.

Приклад 2. Ущільнене властивість різних фібринових ущільнювальних композицій.

Попередній приклад продемонстрував, що завдяки застосуванню ліофілізованої композиції підвищується сила адгезії. В ході даного експерименту досліджували ущільнюючі властивості трьох різних ущільнювальних композицій: суміші ліофілізованих фібриногену і тромбіну, рідкої фібринової ущільнювальної композиції та фібринового ущільнювача, отриманого шляхом послідовного нанесення суміші ліофілізованих фібриногену і тромбіну і подальшого нанесення рідкої фібринової ущільнювальної композиції. Руйнівне випробування [по суті як описано у Vilela et al. «What Is Important For Conti�лотнителя забезпечувати герметичне ущільнення і витримувати тиск.

Тиск руйнування в цій моделі вказує на здатність випробовуваної композиції прилипати до тканини і зберігати свою механічну цілісність до досягнення значення тиску, при якому відбувається розрив ущільнення, в результаті чого тиск різко падає і відбувається явне підтікання рідини.

Як згадувалося раніше, спеціально розроблену алюмінієву трубку (довжиною 27 см) з отворами вводили в трубчастий сегмент клубової кишки свині на глибину 25-30 див Трубчастий сегмент ущільнили, притиснувши його з обох кінців до трубці за допомогою пластикових дисків, і затягли за допомогою металевих гвинтів. Алюмінієву трубку під'єднали до джерела води. Після того як в алюмінієву трубку подали воду, вода надійшла в простір між клубовою кишкою і алюмінієвою трубкою через отвори, передбачені по периметру кола трубки, при цьому зворотний струм води в алюмінієву трубку був виключений.

Перед подачею води за допомогою гострого леза виконали 10-міліметровий розріз перпендикулярно довжині кишки. Для більш точної імітації клінічних умов спочатку зашили розріз ниткою по середній лінії (за допомогою однієї нитки 3×0; ETHICON; номер по каталогу ss684), а потім на область рамую фібринову ущільнювальну композицію. Після нанесення випробовуваної композиції (див. нанесення нижче по тексту) фібрин залишили на 10 хвилин для затвердіння, а кишечник заповнили водою для дослідження його здатності витримувати тиск. При надходженні води в простір між клубовою кишкою і ластами тиск води зростає до тих пір, поки не відкриється ущільнення розрізу і не відбудеться різке зниження тиску. Встановлений рівень тиску вимірювали за допомогою манометра D-logmate 590 MRC (Ізраїль), сполученого з лінією подачі рідини, до виявлення різкого зниження кривої тиску. Тиск, виміряний до різкого зниження, зареєстрували і прийняли за тиск руйнування.

Випробовувані композиції наносили наступним чином:

- Рідкий фібрин наносили шляхом розпилення загальним об'ємом 2 мл (співвідношення між двома компонентами 1:1). В ході даного експерименту досліджували тільки одну концентрацію тромбіну: 1 000 МО на 70 мг фібриногену.

- 100 мг ліофілізованої суміші розсіювали через трафарет розміром 6 см2. Зазнавали тільки одну суміш - суміш, що містить 1 000 МО тромбіну на 70 мг (ліофілізовані фибриногенний і тромбиновий компоненти змішували у співвідношенні 3,2:1, як описано в розділі «Матеріали і спо

- Послідовне нанесення виконували шляхом розсіювання 100 мг ліофілізованого фібриногену і тромбіну (1 000 МО тромбіну на 70 мг) з подальшим розпилюванням рідких фибриногенного і тромбінового компонентів (загальним об'ємом 2 мл). Якщо слизова оболонка, навколишнє кишечник, не повністю змочувала ліофілізований порошок, після розсіювання ліофілізованої композиції розпилювали ФБР.

Було встановлено, що ліофілізований фібриновий ущільнювач, що володіє більшою силою адгезії, ніж рідкий фібриновий ущільнювач (див. фіг. 1), виявився неефективним для забезпечення ущільнення (показав низьке значення тиску руйнування; фіг. 2).

Рідкий фібриновий ущільнювач продемонстрував більш високу ущільнене дію, ніж ліофілізований фібриновий ущільнювач. Несподіваним чином послідовне нанесення ліофілізованого фібринового ущільнювача перед розпиленням рідкого фібринового ущільнювача дало більш високий ущільнюючий ефект, ніж при комбінуванні компонентів. Таким чином, було встановлено, що ущільнене властивість при послідовному нанесенні порошкового та рідкого ущільнювачів вище, ніж ущільнюючі властивості кожної композиції за отдрастворяются в слизовій оболонці, покривну тканину кишечника, формуючи таким чином шар фібрину в безпосередній близькості до серозної тканини. При розпиленні рідкого фібринового ущільнювача після нанесення ліофілізованих порошків зазначено взаимоусиливающее ущільнення тканини, як сказано вище (фіг. 2).

Приклад 3. Найбільш висока ущільнене дію фібринової композиції, отриманої шляхом нанесення твердої фібринової ущільнювальної суміші з подальшим нанесенням рідкої фібринової ущільнювальної композиції

У попередніх прикладах показано, що фібриновий ущільнювач, отриманий шляхом послідовного нанесення ліофілізованої суміші фібриногену і тромбіну з наступним розпиленням рідкого фібринового ущільнювача, має найбільш високу ущільнюючу здатність.

У наведеному прикладі за допомогою руйнівного випробування досліджують ущільнюючі характеристики при нанесенні тільки одного з ліофілізованих компонентів окремо (або фібриногену, або тромбіну) з подальшим нанесенням рідкого фібринового ущільнювача. У наступному прикладі також досліджують питання, чи може нанесення на розріз альбуміну, висушують слизову оболонку, яка покриває кишечник, сприяти лучшейля цих цілей проводили описане вище (приклад 2) руйнівне випробування і оцінювали ущільнене властивість наступних фібринових ущільнювачів: фібрину, отриманого шляхом нанесення 25 мг ліофілізованого тромбіну (отриманий з розчину, який містить 1 000 МО/мл тромбіну, де тромбін є рідким компонентомEVICEL; лиофилизировано 625 мкл розчину) з наступним розпиленням 2 мл рідкого фібринового ущільнювача; фібрину, отриманого шляхом нанесення 75 мг ліофілізованого фібриногену (отриманий з розчину, що містить 20 мг/мл фібриногену, як зазначено вище) з наступним розпиленням 2 мл рідкого фібринового ущільнювача; фібрину, отриманого шляхом нанесення 100 мг суміші ліофілізованих фібриногену і тромбіну (у співвідношенні 3,2:1 по вазі, як зазначено вище) з наступним розпиленням 2 мл рідкого фібринового ущільнювача; і фібринової композиції, отриманої шляхом нанесення 100 мг сухого альбуміну (Sigma; номер за каталогом 078k1503) з наступним розпиленням 2 мл рідкого фібринового ущільнювача. Всі порошки (в тому числі сухий альбумін) перед використанням протирали за допомогою шпателя через сито з осередками розміром 200 мкм.

Результати представлені на фіг. 3. Статистичні дані були отримані шляхом однофакторного дисперсійного аналізу з визначенням критерію Тьюки-Крамера. Однаковими літерами позначені середні величини, істотно не отличаин (p≤0,05). Відзначено, що послідовне нанесення твердого фібринового ущільнювача і рідкої фібринової ущільнювальної композиції сприяє формуванню фібринової матриці з перевершує ущільнюючої здатністю порівняно з фібринової матрицею, отриманою шляхом нанесення тільки одного з ліофілізованих компонентів окремо (або фібриногену, або тромбіну) з подальшим нанесенням рідкій композиції. Також було встановлено, що нанесення сухого білка (наприклад, альбуміну), висушують слизову оболонку, не сприяє підвищенню ущільнюючої здатності рідкої фібринової ущільнювальної композиції.

1. Спосіб нанесення фібринової матриці на вологу тканину, що містить:
a) нанесення ефективного кількості твердої фібринової ущільнювальної суміші на вологу тканину, де тверда фібринова ущільнювальна суміш містить твердий компонент, який містить фібриноген, і твердий компонент, який містить тромбін;
b) нанесення ефективного кількості рідкої фібринової ущільнювальної композиції поверх щонайменше частині нанесеного твердої фібринової ущільнювальної суміші, де рідка фібринова ущільнювальна композиція містить щонайменше два окремих рідких �слушну компонент містить тромбін;
причому ефективні кількості твердої фібринової ущільнювальної суміші і рідкої фібринової ущільнювальної композиції достатні для отримання фібринової матриці на вологої тканини, що володіє поліпшеною ущільнюючої здатністю по відношенню до нанесення ефективного кількості або рідкої фібринової ущільнювальної композиції, або твердої фібринової ущільнювальної суміші.

2. Спосіб за п. 1, в якому ущільнююча здатність зростає щонайменше в 1,2 рази по відношенню до нанесення рідкої фібринової ущільнювальної композиції.

3. Спосіб за п. 1, в якому ущільнююча здатність
зростає приблизно в 1,7 рази по відношенню до нанесення рідкої фібринової ущільнювальної композиції.

4. Спосіб за п. 1, в якому нанесення здійснюється на тканину, яка є необогащенной, має невелику кількість, недостатня кількість або не має кровоносних судин, та (або) на тканину, повільно виділяє текуче середовище або некровоточащую.

5. Спосіб за п. 1, в якому фібриноген-містить компонент твердої фібринової ущільнювальної суміші готують на стадії висушування фібриноген-містить розчину з концентрацією фібриногену менше 25 мг/мл

6. Спосіб за п. 5, котЉествляется на тканинний дефект.

8. Спосіб за п. 1, в якому нанесення здійснюється щонайменше на частину скобочного або ниткового шва, наявного на тканини.

9. Спосіб отримання фібринової матриці на вологої тканини, що включає наступні стадії: надання твердого компонента, що містить фібриноген; надання твердого компонента, що містить тромбін; надання рідкої фібринової ущільнювальної композиції, де рідка фібринова ущільнювальна композиція містить щонайменше два окремих рідких компонента, при цьому щонайменше один окремий компонент містить фібриноген і щонайменше другий окремий компонент містить тромбін; нанесення ефективного кількості твердих компонентів щонайменше на частину вологій поверхні; нанесення ефективного кількості рідкої фібринової ущільнювальної композиції поверх щонайменше частини нанесених твердих компонентів.

10. Спосіб за п. 9, в якому волога тканина не містить фібриногену.

11. Спосіб за п. 9, в якому рідку фібринову ущільнювальну композицію надають у твердій формі і відновлюють перед її нанесенням.

12. Спосіб за п. 9, в якому рідку фібринову ущільнювальну композицію надають за�авляют в рідкій формі і висушують перед його нанесенням.

14. Спосіб за п. 9, в якому твердий компонент надають у замороженому вигляді і висушують перед його нанесенням.

15. Спосіб за п. 9, в якому тверді компоненти наносять одночасно або один за одним.

16. Спосіб за п. 9, в якому рідкі компоненти наносять одночасно або один за одним.

17. Спосіб за п. 9, в якому тверді компоненти представлені у вигляді суміші.

18. Спосіб за п. 9, в якому тканина є необогащенной, має невелику кількість, недостатня кількість або не має кровоносних судин та (або) повільно виділяє текуче середовище або не кровоточить.

19. Фібринова матриця, одержувана способом за п. 9.

20. Спосіб обробки або запобігання дефекту на вологій тканині потребує в обробці об'єкта, що включає наступні стадії:
a) надання компонента, що містить твердий фібриноген, надання компонента, що містить твердий тромбін; і надання рідкої фібринової ущільнювальної композиції, де рідка фібринова ущільнювальна композиція містить щонайменше два окремих рідких компонента, при цьому щонайменше один окремий компонент містить фібриноген і щонайменше другий окремий компонент містить тромбін;
b) н�несення ефективного кількості рідкої фібринової ущільнювальної композиції з п. а) поверх щонайменше частини нанесених твердих компонентів.

21. Спосіб за п. 20, в якому волога тканина є необогащенной, має невелику кількість, недостатня кількість або не має кровоносних судин та (або) повільно виділяє текуче середовище або не кровоточить.

22. Спосіб за п. 20, в якому дефект являє собою підтікання в тканини.

23. Спосіб за п. 22, в якому просачивающееся речовина є необогащенним, має невелику кількість, недостатня кількість або не має плазми або компонентів крові.

24. Спосіб за п. 20, в якому рідку фібринову ущільнювальну композицію надають у твердій формі і відновлюють перед її нанесенням.

25. Спосіб за п. 20, в якому рідку фібринову ущільнювальну композицію надають у замороженому вигляді і розморожують перед її нанесенням.

26. Спосіб за п. 20, в якому твердий компонент надають в рідкій формі і висушують перед його нанесенням.

27. Спосіб за п. 20, в якому твердий компонент надають у замороженому вигляді і висушують перед його нанесенням.

28. Спосіб за п. 20, в якому тверді компоненти наносять одночасно або один за одним.

29. Спосіб за п. 20, в якому рідкі компонент�єни у вигляді суміші.

31. Спосіб за п. 20, в якому дефект являє собою скобу або нитку.

32. Набір для нанесення на вологу тканину потребує в обробці об'єкта, що містить: (i) контейнер (- и), що містить(ие) тверді компоненти, що містять (а) фибриногенний компонент і (b) тромбін, причому компоненти (а) і (b) знаходяться в окремих контейнерах або в одному і тому ж контейнері у вигляді суміші; і (ii) принаймні два окремих контейнера, причому щонайменше один окремий контейнер містить рідкий, заморожений або твердий фибриногенний компонент і щонайменше другий окремий контейнер містить рідкий, заморожений або твердий тромбін, причому якщо принаймні два окремих контейнера з п. (ii) містять тверді компоненти, компоненти (а) і (b) знаходяться в одному і тому ж контейнері у вигляді суміші.

33. Набір з п. 32 для нанесення на вологу поверхню.

34. Набір з п. 32 для ущільнення підтікань у тканинах, які є необогащенними, мають невелику кількість, недостатня кількість або не мають кровоносних судин, та (або) тканинах, повільно виділяють текуче середовище або некровоточащих.

35. Спосіб обробки або запобігання дефекту на вологій тканині потребує в обробці об'єкта, соді�

 

Схожі патенти:

Біогель

Біогель // 2503464
Група винаходів відноситься до галузі фармацевтики. Створено агент для формування біогелю, биогели для гемостазу, закриття ран, тканинної інженерії або спрямованої доставки лікарських засобів. Агент містить розчинний носій, на якому иммобилизированно безліч зв'язують фібриноген груп. Біогель, який містить молекули фібриногену і безліч розчинних носіїв, придатних для внутрішньовенного та/або місцевого введення, причому кожен носій містить безліч зв'язують фібриноген груп, іммобілізованих на носії, і кожна молекула фібриногену пов'язана з щонайменше двома зв'язуючими фібриноген групами таким чином, що молекули фібриногену виявляються зв'язаними один з одним через носії за допомогою нековалентних зв'язків між зв'язуючими фібриноген групами і молекулами фібриногену. Біогель, що містить мономери фібрину і безліч розчинних носіїв, придатних для внутрішньовенного та/або місцевого введення, в якому кожен носій містить безліч зв'язують фібриноген груп, іммобілізованих на носії, а мономери фібрину пов'язані один з одним через носії за допомогою нековалентних зв'язків між зв'язуючими фібр�їх для внутрішньовенного та/або місцевого введення, в якому кожен носій містить безліч зв'язують фібриноген груп, іммобілізованих на носії, і при цьому мономери фібрину в фибрине ковалентно пов'язані один з одним пептидними зв'язками, і мономери фібрину в фибрине пов'язані один з одним через носії нековалентними зв'язками між зв'язуючими фібриноген групами і мономерами фібрину. Спосіб формування біогелю, що включає здійснення контакту молекул фібриногену з безліччю розчинних носіїв. Спосіб зупинки кровотечі шляхом топічного введення біогелю в місці кровотечі або рани. Застосування безлічі розчинних носіїв, придатних для внутрішньовенного та/або місцевого введення. Фармацевтичний склад для топічного введення, що містить біогель, агент або безліч розчинних носіїв. Використання заявленого винаходу дозволяє отримати кошти, які не вимагають використання токсичних реагентів, мають мінімальний ризик алергічних реакцій, і які з легкістю можна отримати і використовувати. 11 н. і 3 з.п. ф-ли, 2 табл., 4 іл., 5 пр.
Винахід відноситься до медицини

Склад для моделювання і склеювання кісткових фрагментів на кістяках

Винахід відноситься до медицини ..Для підвищення адгезивних властивостей склад містить, масо%: гіпс медичний 26-32, клей казеиновий12-17, житнє борошно 8-12, яєчний білок 10-14;, і воду - інше

Адгезивні комплексні коацервати і способи їх отримання і застосування

Винахід відноситься до області биоадгезивов і являє собою адгезивний комплексний коацерват або поліелектролітний комплекс утворювався почерговим, що містить, принаймні, один поликатион, який містить позитивно заряджений білок, що продукується P. Californica, або полімер, що містить, принаймні, один фрагмент формули I, щонайменше, один полианион, який містить полифосфатное з'єднання, полифосфосерин або полімер, що містить, принаймні, один фрагмент формули II, і, щонайменше, один многовалентний катіон, при цьому, щонайменше, один поликатион або полианион являє собою синтетичне з'єднання і поликатион містить, щонайменше, одну крос-яка зшивала групу і/або полианион містить, щонайменше, одну крос-яка зшивала групу, де зазначені крос-зшиваючі групи здатні до крос-зшиванню один з одним. Винахід забезпечує отримання адгезивних комплексних коацерватов, що володіють низьким межфазним натягом у воді і підвищеної когезионной міцністю. 13 м. та 28 з.п. ф-ли, 19 іл., 1 табл.
Винахід відноситься до медицини, а саме до хірургії. Перетинають малу грудну м'яз у місця прикріплення до 3-5 ребрах. Отсепаровивают, осушують, по периферії наносять латексний тканинний клей шаром товщиною 0,1 мм. М'язовий клапоть укладають на судини подключично-пахвовій області. Утримують клапоть 5-7 хвилин. Клапоть фіксують трьома вузловими швами рассасивающейся ниткою 3,0. Фіксують край отсепарованной найширшого м'яза спини до передньої зубчастої і малого грудного м'язів окремими швами. Спосіб забезпечує зменшення обсягу і тривалість лімфореі, запобігає утворенню лимфоцеле, профілактику набряку верхньої кінцівки після радикального видалення молочної залози або ізольованого проведення подключично-подмишечно-підлопаткових лимфаденэктомии. 3 пр.
Винахід відноситься до галузі медицини, а саме до розробки хірургічних клеїв нового покоління, і може бути використане для герметизації швів у абдомінальної, торакальної, судинної, щелепно-лицевої та нейрохірургії. Медичний клей «Неосульфакрилат» містить, вага. дол.: етил-α-цианакрилат 76,5-85,0, 3-метакрилкарбоксисульфолан 9,0-12,5, децилметакрилат 6,0-11,0. Клей розширює асортимент складів даного призначення, володіє поліпшеними органолептичними властивостями, підвищеною адгезією і зменшеною нейротоксичністю при склеюванні тканин, а також забезпечує підвищення протизапальної дії при збереженні на рівні прототипу таких фізико-хімічних характеристик як міцність на розрив і еластичність. 2 табл., 6 пр.

Медичний клей для безшовного з'єднання країв рани на основі реакції полімеризації

Винахід відноситься до технології отримання медичних клеїв для склеювання біологічних тканин. Препарат призначений для місцевого застосування на шкірі при проведенні операцій в хірургії та комбустіології. Медичний клей для безшовного з'єднання біологічних тканин, утворює адгезійний шар на основі реакції полімеризації у присутності заліза крові і перекису водню, містить акрилову кислоту і полівінілпіролідон, що є матрицею для прищепної полімеризації при утворенні адгезійного шару. Медичний клей щодо винаходу характеризується високими адгезійними, антисептичні, дезінтоксикаційними властивостями.

Великопористий і добре рассасиваемий апатитовий кальцій-фосфатний цемент

Даний винахід спрямовано на покращений цементний порошок, корисний як кісткового цементу, включає органічний компонент, що складається з одного або декількох біологічно сумісних і биорассасиваемих полімерів, і неорганічний компонент, що складається з одного або декількох кальцій-фосфатних сполук, в якому зазначені кальцій-фосфатні сполуки включають щонайменше близько 70% α-ТСР. Біологічно сумісні і биорассасиваемие полімери обрані з групи, що складається з полісахаридів та їх солей, у формі мікрочастинок. Винахід має відношення до апатитовому кальцій-фосфатному цементу (СРС), одержуваного в результаті змішування зазначеного цементного порошку з рідкою фазою і затвердіння. Винахід відноситься до застосування инъецируемого СРС для виготовлення лікарського засобу для лікування кісткових дефектів, в якості каркасу для інженерії тканин, для виготовлення зубного або кісткового імплантатів, що складаються з виливки з СРС. 6 н. і 13 з.п. ф-ли, 6 табл., 11 пр., 6 іл.
Винахід відноситься до медицини
Винахід відноситься до галузі медицини, зокрема до області хірургічних засобів, і може бути використане для склеювання м'яких тканин, що входять до складу організму

Инъецируемий кальцій-фосфатний цемент у формі апатиту, що вивільняє інгібітор резорбції кісткової тканини

Винахід відноситься до хіміко-фармацевтичної промисловості і являє собою спосіб приготування инъецируемого кальцій-фосфатного кісткового цементу в формі апатиту, висвобождающего гем-бисфосфоновое з'єднання, причому зазначений спосіб включає додавання бисфосфоновой кислоти або її солі або твердого попередника кальцію, модифікованого бисфосфоновой кислотою або її сіллю, в тверду фазу цементу або в рідку фазу цементу, причому зазначений твердий попередник кальцію вибирають з ортофосфатів кальцію і нефосфатних солей кальцію, таких як CaCO3або CaSO4

Дренажний пристрій з біологічно активним покриттям для лікування порожнинних захворювань

Винахід відноситься до галузі медицини і може бути використане в онкології (онкогінекологія, онкопроктология), абдомінальної хірургії, урології, отолярингологии, проктології (геморой, проктит, тріщини заднього проходу), гінекології (ерозії, кольпіти, вульвовагініти), а також для активного дренування в хірургії
Винахід відноситься до медицини і призначене для лікування гострого геморою 2-3 ст. методом локального тромболізису. Вводять интранодулярно в тромбированний вузол тромболітичної препарат. Після розм'якшення вмісту гемороїдального вузла його пунктирують з видаленням лізованому крові і вводять в порожнину вузла протизапальний препарат з групи глюкокортикостероїдів, а потім проводять тугу зовнішню тампонаду перианальной області. Спосіб дозволяє підвищити ефективність лікування гострого геморою. 2 з.п. ф-ли, 1 пр.

Спосіб профілактики кровотеч, викликаних застосуванням стрептокінази, в експерименті

(57) Винахід відноситься до галузі ветеринарії і призначений для профілактики кровотеч, викликаних застосуванням стрептокінази, в експерименті. Кроликів-самців породи шиншила за одну годину до хірургічного втручання внутрішньовенно вводять розчин. Ратсвор готують наступним чином: в ліофільно висушений фібрин-мономер з сечовиною додають стерильну дистильовану води для ін'єкцій, так щоб отриманий розчин містив фібрин-мономер в концентрації 11 мг/мл і сечовину в концентрації 150 мг/мл і перемішують до повного розчинення речовини. При цьому доза фібрин-мономеру становить 0,25 мг/кг високоефективний Спосіб для профілактики кровотеч, викликаних застосуванням стрептокінази, перед хірургічними втручаннями. 1 пр., 2 іл.

Спосіб профілактики кровотеч, викликаних застосуванням дабігатрану етексилату, в експерименті

(57) Винахід відноситься до галузі ветеринарії і призначений для профілактики кровотеч, викликаних застосуванням дабігатрану етексилату, в експерименті. Кроликів-самців породи шиншила за одну годину до хірургічного втручання внутрішньовенно вводять розчин. Розчин готують наступним чином: в ліофільно висушений фібрин-мономер з сечовиною додають стерильну дистильовану воду для ін'єкцій так, щоб отриманий розчин містив фібрин-мономер в концентрації 11 мг/мл і сечовину в концентрації 150 мг/мл і перемішують до повного розчинення речовини. Доза фібрин-мономеру становить 0,25 мг/кг високоефективний Спосіб для профілактики кровотеч, викликаних застосуванням дабігатрану етексилату, в експерименті. 2 іл., 1 пр.

Спосіб профілактики інтраопераційних кровотеч, викликаних введенням гепарину до операції

Винахід відноситься до медицини, зокрема до експериментальної хірургії, і може бути використане для профілактики інтраопераційних кровотеч на фоні введення гепарину до операції. При проведенні експерименту кроликів-самців за одну годину до оперативного втручання здійснюють внутрішньовенне введення розчину, що містить фібрин-мономер в концентрації 11 мг/мл і сечовину в концентрації 150 мг/мл При цьому доза фібрин-мономеру становить 0,25 мг/кг. Спосіб має високу ефективність, оскільки не тільки знижує обсяг крововтрати, але і не викликає важкі гемодинамічні порушення та алергічні реакції. 2 іл.

Способи, композиції та набори для ліофілізації

Винахід відноситься до способу ліофілізації композиції, що містить очищений антитромбін III (AT III) і кристаллизующееся речовина, вибране з аланіну, маніту, гліцину або NaCl. Заявлений спосіб включає заморожування композиції при температурі від -52°C до -60°C протягом 6-15 годин, відпал композиції при -30°C протягом 1 години, повторне заморожування композиції при температурі від -52°C до -60°C протягом 2-15 годин при підтримці температури продукту між -48°C і -52,7°C протягом 4-10 перед лиофилизацией і висушування композиції з отриманням лиофилизованного кека. Винахід відноситься до фармацевтичного набору, що містить зазначений ліофілізований кек і рідкий реагент. Винахід забезпечує отримання ліофілізованої композиції, що містить AT III, який зберігає свою активність і стабільність. 3 н. і 11 з.п. ф-ли, 24 іл., 5 табл., 2 пр.

Модифікований фактор віллебранда з подовженим напівперіодом існування in vivo, його застосування та способи отримання

Винахід відноситься до галузі біотехнології, конкретно до модифікованому фактору Віллебранда (VWF), і може бути використане в медицині. Рекомбінантним шляхом отримують модифікований VWF, злитий в С-кінцевій частині свого первинного продукту трансляції з N-кінцевою частиною альбуміну допомогою лінкера SSGGSGGSGGSGGSGGSGGSGGSGGSGGSGS. Отриманий модифікований VWF використовують у складі фармацевтичної композиції для лікування або профілактики порушення згортання крові. Винахід дозволяє отримати модифікований VWF, який зберігає здатність до N-кінцевий дімерізаціі і С-кінцевої мультимеризации, маючи при цьому подовжений напівперіод функціонального існування в плазмі крові порівняно з напівперіодом функціонального існування VWF. 8 н. і 9 з.п. ф-ли, 5 іл., 4 табл., 11 пр.
Up!