Пептид, що має здатність регенерувати кісткову тканину і зв'язуватися з апатитом

 

Область техніки

Даний винахід має відношення до пептиду, що володіє здатність регенерувати кісткову тканину і специфічно связивающемуся з поверхнею мінералу апатит, і конкретніше до пептиду, що володіє здатність регенерувати кісткову тканину і специфічно связивающемуся з поверхнею мінералу апатит, здатному, будучи стабільно іммобілізованих на поверхні апатиту, зберігати корисну активність і чинити вплив на регенерацію кістки протягом тривалого часу, завдяки зшитими один з одним амінокислотною послідовністю, що має здатність регенерувати кісткову тканину, і амінокислотною послідовністю, що володіє здатністю зв'язуватися з апатитом, щоб таким чином отриманий пептид, мав костеобразующим дією, а також здатністю зв'язуватися з поверхнею мінералу апатит, і композиції для регенерації кісткової тканини, що містить даний пептид.

Попередній рівень техніки

Кістки і зуби називаються твердою тканиною організму. Кістки складаються приблизно на 45% неорганічних речовин, на 35% з органічних речовин і на 20% з води. Що стосується зубів, емаль приблизно на 97% складається з неорких речовин. Зміст неорганічної речовини дещо відрізняється в залежності від виду тварини, частини тіла, віку і тому подібного.

Щодо складових кістка речовин, більша частина органічних речовин являє собою колаген, який бере участь в утворенні кісток і підтримці твердості і гнучкості кісток, і присутній в якості матриксу, що викликає виборчу адгезію клітин кісток, щоб за допомогою цього орієнтувати кісткові неорганічні частинки. Мінерал апатит є головним компонентом кістки в природних умовах, тобто, неорганічним речовиною кісток хребетних, і відомий як гідроксиапатит (Ca10(PO4)6(ВІН)2), гідроксилапатит, карбонатгидроксиапатит (Снарядів, А-тип: Ca10(PO4)6[(ВІН)2-2x3)x], B-тип: Са10-х[(PO4)6-2х3)](ВІН)2). Відомо, що замість Са2+містяться дуже маленькі кількості Mg2+, Na+або K+і ВІН замість-містяться дуже маленькі кількості Cl-або F-. Тому були проведені дослідження дентальних матеріалів кісткових трансплантатів, призначених для загоєння дефектів кістки, изготовленявляется відновлення морфологічних і фізіологічних функцій кістки для того, щоб таким чином зберегти біомеханічні функції. Отже, використовуваний тут апатит-містить матеріал кісткових трансплантатів повинен відповідати основним умовам, таким як негайне використання, відсутність імунної відповіді, сприяння швидкому утворенню кістки і реваскуляризації, збереження підтримки кістковою тканиною і цілісності й т. п. Однак апатит як такий може служити в якості посередника, який має кістковою провідністю, але не володіє здатністю індукувати первинний морфогенезу кістки, необхідний для скорочення тривалості лікування. Для виправлення цього недоліку були проведені дослідження, в яких біологічно активна субстанція, що містить хемотакин (chemotactin), така як білок позаклітинного матриксу, тканинний фактор росту, або кістковий морфогенетичні білок, використовується разом з апатитом, і були розроблені такі продукти як INFUSE (містить BMP-2), GEM21S (містить PDGF) тощо. Однак ці білки не є стабільно іммобілізованими на поверхні апатиту і вивільняються з апатиту, потім виходять в системний кровотік і таким чином руйнуються, і, тому складно підтримувати активність цих ить ефект регенерації кістки, необхідний матеріал, стабільно іммобілізований на поверхні апатиту і таким чином зберігає корисну активність.

Справжні винахідники зробили спробу подолати проблеми попереднього рівня техніки, як описано вище. В результаті цього, винахідники цього винаходу підтвердили, що пептид, що володіє одночасно і кісткоутворювальної здатністю і здатністю зв'язуватися з апатитом, може перебувати в стійкому стані при зв'язуванні з поверхнею апатиту, і при цьому надавати сприяння переміщенню, проліферації і диференціювання клітин, пов'язаних з регенерацією, і в підсумку максимально збільшувати здатність до регенерації кісткової тканини і демонструвати сильний терапевтичний ефект при регенерації кісткової тканини, і таким чином, здійснили даний винахід.

Розкриття винаходу

Мета цього винаходу - надати пептид, який володіє здатністю відновлювати кісткову тканину і зв'язуватися з апатитом, причому даний пептид стабільно мобілізують на поверхні мінералу апатит і зберігає свою активність.

Інша мета цього винаходу - надати матеріал кісткового трансплантата і біоматеріал для цілей даний винахід надає пептид, має здатність регенерувати кісткову тканину і зв'язується з апатитом, при цьому пептид, що має здатність регенерувати кістка, і пептид, що володіє здатністю зв'язуватися з апатитом, зв'язуються між собою.

Справжній винахід також надає матеріал кісткового трансплантата і біоматеріал для регенерації кістки, в якому на поверхні апатиту іммобілізований пептид.

Короткий опис креслень

Фіг.1 - отримані за допомогою конфокального мікроскопа зображення тканини, взятої через 4 тижні після трансплантації FITC-міченого кісткового мінералу в область дефекту в підставі черепа кролика (фіг.1А - кістковий мінерал без пов'язаного пептиду, і фіг.1B - кістковий мінерал пов'язаним з пептидом, мають послідовність SEQ ID NO:40, мічений FITC).

Фіг.2 показує результати дослідження зразків крові, взятих за один день до і через 1 день, 3 дні, 7 днів, 14 днів, 21 день і 28 днів після трансплантації FITC-міченого кісткового мінералу в область дефекту в підставі черепа кролика, після чого вивільнені в кров пептиди були виміряні з допомогою флюориметра (RFI - відносний індекс флуоресценції, синя лінія - негативний контроль, що показує результати вимірювання в тижні після трансплантації кісткового мінералу зі зв'язаним пептидом в область дефекту в підставі черепа кролика (фіг.3а - матеріал для кісткового трансплантата зі зв'язаним пептидом SEQ ID NO:36, фіг.3b - матеріал для кісткового трансплантата зі зв'язаним пептидом SEQ ID NO:35, і фіг.3с - матеріал для кісткового трансплантата зі зв'язаним пептидом SEQ ID NO:40).

Детальний опис переважних варіантів здійснення

Якщо не вказано інше, всі використані в описі технічні і наукові терміни мають ті ж самі значення, які в більшості випадків зрозумілі для фахівців у галузі техніки, до якої належить даний винахід. В цілому, використовувана в описі номенклатура добре відома і зазвичай застосовується в даній області техніки.

Для виявлення пептиду у відповідності з цим винаходом отримані амінокислотні послідовності активних центрів кісткового морфогенетичного білка і білка позаклітинного матриксу і потім піддані хімічній модифікації, щоб тим самим зберегти їх активну структуру.

Один аспект цього винаходу має відношення до пептиду, що володіє здатність регенерувати кісткову тканину і связивающемуся з апатитом, в якому, щонайменше, один пептид, обраний із групи, що складається з амінокислотних послідовностей з SEQ ID NO:1 до SEQ ID NO:35, �про SEQ ID NO:39, зв'язуються один з одним.

У цьому винаході пептид, що зв'язується з мінералом апатит, може бути обраний із групи, що складається з амінокислотних послідовностей SEQ ID NO:36 (STLPIPHEFSRE), SEQ ID NO:37 (VTKHLNQISQSY), SEQ ID NO:38 (SVSVGMKPSPRP) і SEQ ID NO:39 (NRVFEVLRCVFD). Пептид хімічно приєднується до N-кінці пептиду, що володіє здатністю відновити кісткову тканину, для збільшення здатності зв'язуватися з апатитом, який є складовою частиною кістки, і таким чином стабільно зв'язується з матеріалом кісткового трансплантата або імплантатом, покритим апатитом.

У цьому винаході пептид, що має здатність регенерувати кісткову тканину, може бути обраний із групи, що складається з амінокислотних послідовностей з SEQ ID NO:1 до SEQ ID NO:35.

Зокрема, пептид, що має здатність регенерувати кісткову тканину, може бути, щонайменше, одним пептидом, вибраним з групи, що складається з:

а) амінокислотної послідовності в положеннях 2-18 кожного з кісткових морфогенетичних білків (ВМР)-2, 4 і 6 [SEQ ID NO:1 для BMP-2, SEQ ID NO:2 для BMP-4 і SEQ ID NO:3 BMP-6]; амінокислотної послідовності в положеннях 16-34 (SEQ ID NO:4), амінокислотної послідовності в положеннях 47-71 (SEQ ID NO:5), амінокислотної посислотной послідовності в положеннях 83-302 (SEQ ID NO:8), амінокислотної послідовності в положеннях 335-353 (SEQ ID NO:9) і амінокислотної послідовності в положеннях 370-396 (SEQ ID NO:10) BMP-2; амінокислотної послідовності в положеннях 74-93 (SEQ ID NO:11), амінокислотної послідовності в положеннях 293-313 (SEQ ID NO:12), амінокислотної послідовності в положеннях 360-379 (SEQ ID NO:13) і амінокислотної послідовності в положеннях 382-402 (SEQ ID NO:14) BMP-4; амінокислотної послідовності в положеннях 91-110 (SEQ ID NO:15), амінокислотної послідовності в положеннях 407-418 (SEQ ID NO:16), амінокислотної послідовності в положеннях 472-490 (SEQ ID NO:17) і амінокислотної послідовності в положеннях 487-510 (SEQ ID NO:18) BMP-6; і амінокислотної послідовності в положеннях 98-117 (SEQ ID NO:19), амінокислотної послідовності в положеннях 320-340 (SEQ ID NO:20), амінокислотної послідовності в положеннях 400-409 (SEQ ID NO:21) і амінокислотної послідовності в положеннях 405-423 (SEQ ID NO:22) BMP-7;

(b) амінокислотної послідовності в положеннях 62-69 (SEQ ID NO:23), амінокислотної послідовності в положеннях 140-148 (SEQ ID NO:24), амінокислотної послідовності в положеннях 259-277 (SEQ ID NO:25), амінокислотної послідовності в положеннях 199-204 (SEQ ID NO:26), амінокислотної послідовності в положеннях 151-158 (SEQ ID NO�ниях 20-28 (SEQ ID NO:29), амінокислотної послідовності в положеннях 65-90 (SEQ ID NO:30), амінокислотної послідовності в положеннях 150-170 (SEQ ID NO:31) і амінокислотної послідовності в положеннях 280-290 (SEQ ID NO:32) кісткового сиалопротеина II (BSP II);

(c) амінокислотної послідовності в положеннях 149-169, YGLRSKS (SEQ ID NO:33), KKFRRPDIQYPDAT (SEQ ID NO:34), і YGLRSKSKKFRRPDIQYPDAT (SEQ ID NO:35) кісткового сиалопротеина I (BSP I, остеопонтин).

Інший аспект цього винаходу має відношення до матеріалу кісткового трансплантата і биоматериалу для регенерації кістки, в якому пептид, що має здатність регенерувати кісткову тканину, іммобілізований на поверхні апатиту.

У цьому винаході біоматеріал для регенерації кістки може відрізнятися тим, що його вибирають із групи, що складається з металів, природних полімерів і синтетичних полімерів.

У цьому винаході для того, щоб забезпечити можливість зв'язування пептиду, що володіє здатністю відновити кісткову тканину і зв'язується з апатитом, з поверхнею апатиту матеріалу кісткового трансплантата або біоматеріалу для регенерації кістки, матеріал кісткового трансплантата, що складається з апатиту або біоматеріалу, такого як метал, природний полімер або синтетичесЅимический перекрестносшивающий агент для зв'язування не потрібно.

Пептид, що має здатність регенерувати кісткову тканину і зв'язується з апатитом, згідно з цим винаходу стабільно іммобілізований на поверхні апатиту, щоб за допомогою цього підвищити його стабільність і зберегти його активність протягом тривалого часу. Таким чином, при пересадці пептиду в організм, пептид стабільно утримується в локальному ділянці трансплантації, і тим самим зберігається його вплив на регенерацію кістки, що відповідає вимогам, що пред'являються до способів лікування, призначеним для регенерації кісткової тканини і періодонту.

Пептид, що має здатність регенерувати кісткову тканину і зв'язується з апатитом, у відповідності з цим винаходом може зв'язуватися з апатитом, вибраним з групи, що складається з одержаних з організму кісткових мінералів гідроксилапатиту, синтетичного гідроксиапатиту, карбонатапатита, трикальційфосфату і монокальцийфосфата.

У цьому винаході вміст пептиду, що володіє здатністю відновити кісткову тканину і зв'язується з апатитом, переважно становить 1~100 мг на одиницю ваги (1 г) матеріалу кісткового трансплантата, і більш переважно становить 20~тенією, пептид SEQ ID NO:36, володіє здатністю зв'язуватися з апатитом, і пептид SEQ ID NO:35, має здатність регенерувати кісткову тканину, були пов'язані між собою, для того, щоб отримати пептид SEQ ID NO:40, має здатність регенерувати кісткову тканину і зв'язується з апатитом. Потім, було перевірено, чи відбувається стабільне зв'язування отриманого пептиду з матеріалом кісткового трансплантата. Крім того, здатність регенерувати кісткову тканину перевіряли шляхом пересадки матеріалу кісткового трансплантата, в якому пептид був стабільно іммобілізований на поверхні апатиту, в область дефекту в підставі черепа.

Приклади

Далі даний винахід буде докладно описано з допомогою прикладів. Дані приклади наводяться тільки для пояснення цього винаходу, і фахівцям в даній області техніки зрозуміло, що обсяг цього винаходу не обмежуються цими прикладами.

Приклад 1. Приготування «розумного» пептиду, що володіє здатністю відновити кісткову тканину і специфічно зв'язується з поверхнею мінералу апатит

Методом F-moc твердофазного хімічного синтезу за допомогою синтезатора пептидів був послідовно з N-кінця синтезований пепѽь, отриману з остеопонтина, і пептид STLPIPHEFSRE (SEQ ID NO:36), що має здатність зв'язуватися з апатитом. Іншими словами, синтез був проведений з використанням смоли Rink (0,075 ммоль/г, 100~200 меш, зшивання 1% DVB) з якої Fmoc-(9-фторенилметоксикарбонил) зв'язується як блокуюча група. 50 мг смоли Rink поміщали в синтезатор, і потім піддавали набухання з DMF. Після цього 20% розчин пиперидин/DMF використовували для видалення Fmoc-групи. 0,5 М розчин амінокислот (розчинник: DMF), 1,0 М розчин DIPEA (розчинник: DMF&NMP) і 0,5 М розчин HBTU (розчинник: DMF) послідовно вводили в 5, 10, і 5 еквівалентних кількостях, відповідно, з С-кінця пептиду, і потім проводили реакцію протягом 1~2 годин в атмосфері азоту. Коли зняття захисних груп і зв'язування завершувалося, двічі промивали DMF і NMP. Навіть після приєднання останньої амінокислоти проводили зняття захисних груп для видалення Fmoc-групи.

Для підтвердження синтезу використовували нингидриновую реакцію. Протестовану і повністю синтезовану смолу висушували над THF або DCM. Потім вводили TFA суміш для розщеплення у співвідношенні 20 мл на 1 г смоли, і потім перемішували протягом 3 годин, з подальшим фільтруванням для поділу суміші смоли і з розчиненим одний ефір або велика кількість холодного ефіру вводили безпосередньо в TFA суміш для кристалізації пептиду в тверду фазу, яку потім виділяли центрифугуванням. У цей момент TFA суміш повністю видаляли за допомогою декількох промивок ефіром і центрифугування. Отриманий таким чином пептид розчиняли в дистильованій воді, а потім висушували сублімацією.

NH2-STLPIPHEFSRE-YGLRSKSKKFRRPDIQYPDAT-COONH2□ (SEQ ID NO:40)

Синтезований пептид відщеплювали від смоли, промивали і висушували сублімацією, а після цього виділяли і очищали методом рідинної хроматографії. Очищений пептид піддавали MALDI-аналізу для підтвердження його молекулярної маси.

Для тестування стабільності in vivo, проводили зв'язування 10 еквівалентних кількостей флуоресцеинизотиоцианата (FITC) з N-кінцем з використанням триэтиламина (1 мл на 1 г смоли) під час приготування пептиду SEQ ID NO:40. Синтез пептиду було підтверджено визначенням його молекулярної маси за допомогою MALDI-TOF.

Приклад 2. Підтвердження in vitro стабільності «розумного» пептиду, що володіє здатністю відновити кісткову тканину і специфічно зв'язується з поверхнею мінералу апатит

1200 мг пептиду, приготованого в прикладі 1, розчинили в 1 мл тридистиллированной води, а потім додали 4 м бичачого кісткового матеріалу (OCS-B, NIBEC), залишили для випадання осаду на 24 год 20 мл PBS, після чого був проведений тест на вивільнення пептиду при 37°С. Через 7 днів, 20 мл розчинника для элюирования (який був спочатку введений) повністю видалили, а потім знову додали 20 мл нового розчинника для элюирования, щоб продовжити элюирование при 37°С. У вищевказаному порядку, тест элюирования пептиду проводили протягом 14 днів, 28 днів, 56 днів, 84 дні і 100 днів. Після завершення элюирования матеріал кісткового трансплантата збирали і вимірювали вміст пептиду.

Спосіб отримання дослідної рідини

Точно зважували 3 р матеріалу кісткового трансплантата зі зв'язаним пептидом і потім подрібнювали в порошок. Точно отвешивали близько 2 г порошку, відповідні 160 мг пептиду, поміщали в 40 мл розчину А (рухома фаза), а потім обробляли ультразвуком протягом 1 години. Після цього при перемішуванні проводили екстракцію при 37±2°С протягом 24 годин, а потім верхній шар екстрагованого розчинника відокремлювали центрифугуванням при 3000 об/хв протягом 10 хвилин, а потім фільтрували через миллипоровий фільтр 0,22 мкм. Звідти брали 1 мл і змішували з 3 мл розчину А, який потім фільтрували через миллипоровий фільтр 0,22 мкм, потім відфільтрований розчин використовували в якості ісс в сушильній печі (силікагель) протягом 5 годин, потім точно отвешивали 10 мг і розчиняли, додавши розчин А в якості рухомої фази, і точно 10 мл використовували в якості стандартної рідини.

Метод тестування

Для отримання площ піку досліджуваної рідини і стандартної рідини, ATі AS, 10 мл кожної з рідин досліджували за допомогою рідинної хроматографії при наступних умовах.

Кількість пептиду (мг) = кількість стандартного пептидного продукту (мг)

Режим роботи

Вимірювальний прилад: аналітичний ВЕРХ (Shimadzu, Японія)

Колонка: наповнена С18-пов'язаним силікагелем з розміром 5 мкм (довжина: 250 нм, внутрішній діаметр: 4,6 мм)

Рухома фаза: 0,1% трифторуксусная кислота/DDW (розчин А), 0,098% трифторуксусная кислота /ацетонітрил (розчин)

Детектор: UV абсорбційний спектрометр (вимірювання довжини хвилі: 230 нм)

Швидкість потоку: 1 мл/хв

Температура колонки: постійна приблизно 40°С

Таблиця 1
Умови градієнта:
Час (хв)Склад розчину В (%)
1100
505
605

Тестування элюирования проводили протягом 100 днів, щоб виміряти пік пептиду в элюирующей рідини. В результаті (фіг.2), пік пептиду спостерігався в Лотах №1, 2 і 3 з часом утримування 14.196 хв. Після завершення элюирования були виміряні кількості пептиду для Лотів №1, 2 і 3, які склали 9,2 мг; 9,18 мг і 9,78 мг, відповідно (фіг.3). Це свідчить про те, що пептид, пов'язаний з матеріалом кісткового трансплантата, не вивільняється в элюирующую рідина, і отже, пептид був стабільно іммобілізований на матеріалі кісткового трансплантата.

Таблиця 2
Результати вивільнення пептиду SEQ ID NO:40 з кісткового мінералу
Лот №.деньНазваЧас утримуванняПлощаВисотамг
100
14RT14.1960.000000
28RT14.1960.000000
56RT14.1960.000000
84RT14.1960.000000
100RT14.1960.000000
27RT14.1960.000000
1400
28RT14.1960.000000
56RT14.1960.000000
84RT14.1960.000000
100RT14.1960.000000
37RT14.1960.000000
14RT14.1960.000000
280
56RT14.1960.000000
84RT14.1960.000000
100RT14.1960.000000

Таблиця 3
Зміст пептиду SEQ ID NO:40, залишився в кістковому мінералі
Lot No.НазваЧас утримуванняПлощависотамг
1RT14.19614.2441176751511329.2
29.19
3RT14.19614.229124963560189.78

Приклад 3. Підтвердження стабільності in vivo «розумного» пептиду, що володіє здатністю відновити кісткову тканину і специфічно зв'язується з поверхнею мінералу апатит

Пептид SEQ ID NO:40, мічений FITC, був обложений в бичачому кістковому мінералі (OCS-B, NIBEC). Отриманий кістковий мінерал пересаджували кролику в область дефекту в склепінні черепа, а потім скарифицировали через 4 тижні. Після цього, кістковий мінерал, пересаджений в область дефекту в склепінні черепа, досліджували за допомогою конфокального мікроскопа (Olympus, Японія). Кістковий мінерал пов'язаним з пептидом SEQ ID NO:40, меченним FITC, в кількості 10 мг і 20 мг пересаджували в область дефекту в склепінні черепа. Кров відбирали до пересадки і через 1 день, 3 дні, 7 днів, 14 днів, 21 день і 28 днів після пересадки, потім за допомогою флюориметра визначали, висвобождался пептид чи немає в систему кровообігу.

В результаті було підтверджено, що пептид був повністю іммобілізований на поверхні матеріалу кісткового трансплантата, пере відмінності порівняно зі значеннями до пересадки, що підтверджувало, що пептид, який містився в кістковому мінералі, не висвобождался в кров, і цей факт доводив, що пептид був дійсно іммобілізований на поверхні кісткового мінералу (фіг.2).

Приклад 4. Підтвердження здатності регенерувати кісткову тканину in vivo «розумного» пептиду, що володіє здатністю відновити кісткову тканину і специфічно зв'язується з поверхнею апатиту

Кожному з пептидів SEQ ID NO:35, SEQ ID NO:36 SEQ ID NO:40, отриманому в прикладі, надали можливість зв'язатися з матеріалом кісткового трансплантата тим же способом, як у прикладі 2, потім його трансплантували в область дефекту в склепінні черепа кролика. Здатність пептидів регенерувати кісткову тканину була підтверджена. В області склепіння черепа кролика під анестезією був створений цілий дефект кістки діаметром 8 мм (новозеландський білий кролик, видова назва: cuniculus). Матеріал кісткового трансплантата і пептид-містить матеріал кісткового трансплантата були пересаджені в область кісткового дефекту (50 мг для кожного дефекту), потім були накладені шви і на окістя і на шкіру. Тварина вбивали через 2 тижні після пересадки, а взятий зразок фіксували в розчині формаліну. Тканина піддавали заливковим синім для отримання недеминерализованного зразка. Виготовлений таким чином зразок вивчали за допомогою оптичного мікроскопа і фотографували.

Фіг.3 показує результат регенерації кістки за допомогою матеріалу кісткового трансплантата, що містить «розумний» пептид, який має здатність регенерувати кісткову тканину і специфічно зв'язується з поверхнею апатиту. Найменший результат регенерації кістки спостерігався при застосуванні матеріалу кісткового трансплантата зі зв'язаним пептидом SEQ ID NO:36 (а, пептид, пов'язаний з апатитом). Було помічено, що матеріал кісткового трансплантата зі зв'язаним пептидом SEQ ID NO:35 (b, пептид, що володіє дією на регенерацію кістки) володів підвищеним дію на регенерацію кістки у порівнянні з a), а матеріал кісткового трансплантата зі зв'язаним пептидом SEQ ID NO:40 (c, «розумний» пептид, що має здатність регенерувати кістку і специфічно зв'язується з поверхнею мінералу апатит) мав істотно підвищеним дію на регенерацію кістки у порівнянні і з a) та b). З вищесказаного випливає, що як такої пептид, пов'язаний з апатитом, не був ефективний для регенерації кістки, і є підстави вважати, що цей пептид не є стабільно пов'язаних з матеріалом кісткового транспла�го є обидві ці здібності. Таким чином, як очікується великий ефект на регенерацію кістки при використанні «розумного» пептиду, що володіє здатністю регенерувати кістку і специфічно зв'язується з поверхнею апатиту, в матеріалі кісткового трансплантата, виготовленому з апатиту, або в імплантаті, вкритому апатитом.

Даний винахід докладно описано, спираючись на його окремі ознаки, при цьому фахівцям в даній області техніки очевидно, що ці специфічні технології є тільки кращими варіантами здійснення, і таким чином обсяг цього винаходу не обмежуються цими варіантами здійснення. Таким чином, дійсний обсяг цього винаходу визначаються супутньої формулою винаходу та її еквівалентом. Всі модифікації і зміни цього винаходу легко можуть використовуватися фахівцем у даній області техніки, і ці модифікації або зміни включаються в обсяг цього винаходу.

Пептид, що володіє здатністю зв'язуватися з мінералом апатит і здатність регенерувати кісткову тканину, у відповідності з цим винаходом зв'язується з поверхнею апатиту, завдяки чому знаходиться в стабільному стані�тетических полімерах, покритих апатитом, для застосування в стоматології або ортопедії; може сприяти переміщенню, проліферації і диференціювання клітин, пов'язаних з регенерацією, і в результаті, максимального збільшення регенерації кісткової тканини; може стабільно присутній, зберігаючи активність пептиду, будучи імплантованого в організм, і, таким чином, є придатним для розвитку терапевтичних технологій регенерації кісткової тканини з використанням пептиду.

1. Пептид, що має здатність регенерувати кісткову тканину і зв'язується з апатитом, в якому пептид, що складається з амінокислотної послідовності SEQ ID NO:35, і пептид, що складається з амінокислотної послідовності SEQ ID NO:36, пов'язані між собою.

2. Пептид, що має здатність регенерувати кісткову тканину і зв'язується з апатитом, в якому пептид представлений амінокислотною послідовністю SEQ ID NO:40.

3. Пептид за п. 1 або 2, що має здатність регенерувати кісткову тканину і зв'язується з апатитом, де пептид іммобілізований на поверхні апатиту.

4. Пептид за п. 3, що має здатність регенерувати кісткову тканину і зв'язується з апатитом, в якому апатит обраний із групи, що складаються-апатиту, трикальційфосфату і монокальцийфосфата.

5. Пептид за п. 3, в якому вміст пептиду становить 1-100 мг на одиницю ваги (1 г) матеріалу кісткового трансплантата.

6. Пептид за п. 1 або 2, що має здатність регенерувати кісткову тканину і зв'язується з апатитом, де пептид іммобілізований на поверхні біосумісного матеріалу, покритого апатитом.

7. Пептид за п. 6, характеризується тим, що біосумісний матеріал вибирають із групи, що складається з металів, природних полімерів і синтетичних полімерів.

8. Пептид за п. 6, що має здатність регенерувати кісткову тканину і зв'язується з апатитом, в якому апатит вибирають із групи, що складається з одержаних з організму кісткових мінералів гідроксилапатиту, синтетичного гідроксиапатиту, карбонат-апатиту, трикальційфосфату і монокальцийфосфата.

9. Пептид за п. 6, в якому вміст пептиду становить 1-100 мг на одиницю ваги (1 г) матеріалу кісткового трансплантата для регенерації кістки.



 

Схожі патенти:

Анти-cd79b антитіла і иммуноконъюгати і способи їх застосування

Даний винахід відноситься до галузі біотехнології. Запропоновані варіанти гуманизированного анти-CD79b антитіла, кожен з яких характеризується наявністю легкої і важкої ланцюга і набором 6 CDR з встановленою амінокислотною послідовністю і щонайменше одним вільним цистеиновим амінокислотним залишком, вибраним з А118С (за Європейською нумерації) важкої ланцюга і V205C (по нумерації Кэбат) в легкій ланцюга. Розглянуто: варіанти з'єднання-кон'югату антитіла з лікарським засобом, де антитіло пов'язано з лікарським засобом через вільний цистеїн; фармацевтичний препарат для лікування раку на основі антитіла; способи детекції CD79b або ракових клітин, а також спосіб інгібірування клітинної проліферації, що використовують з'єднання-кон'югат. Описаний спосіб одержання сполуки-кон'югату. Цей винахід може знайти подальше застосування в терапії ракових захворювань, асоційованих з CD79b, в тому числі при лікуванні гемопоетичних пухлин у ссавців. 8 н. і 62 з.п. ф-ли, 20 табл., 9 пр., 51 іл.

Нові il-17-зв'язуючі сполуки та їх медичне застосування

Винахід відноситься до біотехнології, а саме до нових IL-17-інгібуючим поліпептидів, відповідним злитим білків, до композицій і застосування їх у медичних цілях. Поліпептид містить аминокислотную послідовність, яку вибирають із групи, що складається з GVTLFVALYD YKAFWPGDLS FHKGEKFQIL RTSDGDWWEA RSLTTGETGY IPSNYVAPVD SIQ (SEQ ID NO: 39), GVTLFVALYD YKAFWPGDIS FHKGEKFQIL RTSDGEWWVA RSLTTGEEGY IPSNYVAPVD SIQ (SEQ ID NO:57) або GVTLFVALYD YKAFWPGDIS FHKGEKFQIL RTSDGEWWIA RSLTTGEEGY IPSNYVAPVD SIQ (SEQ ID NO: 107); амінокислотної послідовності, що має, щонайменше, 80%, переважно, щонайменше, 90%, більш переважно, щонайменше, 95% ідентичність амінокислотної послідовності з SEQ ID NO: 39, SEQ ID NO:57 або SEQ ID NO: 107; фрагмента або похідного функціонального SEQ ID NO: 39, SEQ ID NO:57 або SEQ ID NO: 107, одержуваного за рахунок заміщення, додавання і видалення не більше ніж 5 амінокислот. Запропоноване винахід дозволяє з високою специфічністю і аффинностью пов'язувати IL-17. 12 н. і 21 з.п. ф-ли, 17 іл., 3 табл., 12 пр.

Химерний білок боррелії, нуклеїнова кислота, що кодує такий білок, экспрессирующая касета, вектор, спосіб і набір для діагностики лайм-бореліозу, вакцина для профілактики бореліозу

Представлена група винаходів стосується злитих білків, нуклеїнових кислот, що кодують такі білки, экспрессирующей касети, забезпечує експресію нуклеїнової кислоти, вектора, що включає таку касету, способу діагностики in vitro-бореліозу, набору для такої діагностики, в яких використовують згадані білки, а також вакцини композиції для профілактики бореліозу, що включає такі білки. Охарактеризовані злиті білки включають в себе (i) принаймні одну послідовність білка DbpA виду боррелії, вибраного з B. afzelii, B. burgdorferi sensu stricto і B. garinii, і (ii) принаймні одну послідовність білка OspC виду боррелії, вибраного з B. afzelii, B. burgdorferi sensu stricto і B. garinii. Представлена група винаходів дозволяє проводити більш чутливі і специфічні аналізи, пов'язані з присутністю кількох патогенних видів Borrelia. 7 н. і 4 з.п. ф-ли, 8 табл., 7 пр.

Поліпептиди, селективні щодо интегрина αvβ3, кон'юговані з варіантом челевеческого сироваткового альбуміну (hsa), і їх фармацевтичні застосування

Винахід відноситься до галузі біотехнології, конкретно до злитим білків, містить варіант родостомина, і може бути використане в медицині. Отримують поліпептид, селективний щодо интегрина αvβ3, що складається з амінокислотної послідовності SEQ ID NO:1, кон'югованих на N-кінці допомогою линкерной амінокислотної послідовності, що містить комбінацію амінокислот гліцину і серину, з варіантом людського сироваткового альбуміну (HSA) із SEQ ID NO:4. Винахід дозволяє підвищити ефективність терапії захворювань, пов'язаних з интегрином αvβ3. 8 н. і 4 з.п. ф-ли, 14 іл., 2 табл., 7 пр.

Химерний білок, який використовується для діагностики лайм-бореліозу.

Винаходи належать до химерним білків, нуклеїнової кислоти, кодує такий білок, экспрессирующей касеті, забезпечує експресію нуклеїнової кислоти, вектора, що включає экспрессирующую касету, способу діагностики та набору для діагностики. Охарактеризований химерний білок боррелії включає щонайменше одну послідовність позаклітинного домену білка VlsE боррелії першого виду, відповідного певного штаму, і щонайменше одну послідовність області IR6 білка VlsE боррелії другого виду або боррелії першого виду, але відповідного штаму, що відрізняється від штаму першого виду, причому боррелії обрані з Borrelia stricto-sensu, Borrelia afzelii і Borrelia garinii. Представлені винаходи дозволяють проводити діагностику Лайм-бореліозу з підвищеною специфічністю і чутливістю. 6 н. і 8 з.п. ф-ли, 8 табл., 7 пр.

Мутанти стрептокінази і їх ковалентно модифіковані форми

Винахід відноситься до біохімії, зокрема, до нових мутантів стрептокінази. Запропоновані як мутантні поліпептиди стрептокінази, так і злиті білки, що володіють активністю стрептокінази. Заявлені стрептокінази входять до складу фармацевтичних композицій, придатних для лікування захворювань кровообігу, зокрема тромбозів. Винахід дозволяє отримати більш ефективні мутантні поліпептиди з стрептокиназной активністю при лікуванні захворювань кровообігу. 15 н. і 5 з.п. ф-ли, 37 табл., 10 пр.

Поліпшені амінокислотні послідовності проти іl-6r і містять їх поліпептиди для лікування пов'язаних з іl-6r захворювань і порушень

Винахід відноситься до галузі біохімії, зокрема до одиночного вариабельному домену, спрямованому проти ІL-6R, до поліпептиду і конструкції, спрямованим проти ІL-6R, що містять зазначений одиночний варіабельний домен, а також до способам їх отримання. Розкрито нуклеїнові кислоти, що кодують вищевказаний одиночний варіабельний домен, поліпептид і конструкцію, а також генетичні конструкції, що містять вищевказані нуклеїнові кислоти. Описані клітини-господарі і організми господарі, що містять вищевказані нуклеїнові кислоти. Винахід також охоплює композицію для блокування взаємодії IL-6/IL-6R, містить ефективний кількість описаного одиночного вариабельного домену, поліпептиду, конструкції, нуклеїнової кислоти або генетичної конструкції. Також розкрито спосіб профілактики та/або лікування принаймні одного із захворювань або розладів, пов'язаних з IL-6, IL-6R, комплексом IL-6/IL-6R та/або сигнальними шляхами, у які залучений IL-6, IL-6R або комплекс IL-6/IL-6R та/або біологічними функціями і реакціями, в яких бере участь IL-6, IL-6R або комплекс IL-6/IL-6R з використанням описаного одиночного вариабельного домену, поліпептиду, конструкції або композиції. Винахід по14 н. і 11 з.п. ф-ли, 70 іл., 56 табл., 61 пр.

Злитий білок, специфічно довідується меланомние клітини

Винахід відноситься до біотехнології і генної інженерії і являє собою рекомбінантний злитий білок формули S-L-R, в тому числі SR10, SR13, SR15, SdR10, SdR13 або SdR15, специфічно довідується меланомние клітини, у якому S - мономер стрептавидина, L - лінкер, який має аминокислотную послідовність Ser-Arg-Asp Asp Asp Asp-Lys, містить сайт розщеплення энтеропептидазой і обозначаемую як «d», або аминокислотную послідовність Ser-Arg-Ala-Gly-Ala,R - меланома-адресующий олигопептид, представляє собою R10, має аминокислотную послідовність Asp-Gly-Ala-Arg-Tyr-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Asp-Gly, або R13, має аминокислотную послідовність Leu-Ser-Gly-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Glu-Glu, або R15, має аминокислотную послідовність Asp-Gly-Phe-Pro-Gly-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Ser-Gln-Glu. Справжній винахід також розкриває рекомбінантні плазмідні ДНК pSR і pSdR для експресії зазначених злитих білків, бактеріальні штами Escherichia coli MG1655/pSR і MG1655/pSdR, продуценти зазначених злитих білків і спосіб отримання меланома-адресующего олігопептиду R з рекомбінантних злитих білків SdR10, SdR13 або SdR15. Даний винахід дозволяє отримати злиті білки, які забезпечують селективне і ефективне зв'язування з рецепторами на поверхні меланомних клітин, і може бути вико�

Злитий білок dlk1-fc і його застосування для інгібування метастазів раку, полинуклеотид, що кодує білок, вектор, клітина-господар, спосіб отримання злитого білка, композиція та спосіб інгібування метастазів раку

Представлена група винаходів відноситься до галузі біотехнології і стосується злитого білка DLK1-Fc і його застосування для інгібування метастазів раку, полинуклеотида, що кодує такий білок, экспрессионного вектора, що містить полинуклеотид, клітини-господаря, продукуючої зазначений злитий білок, способу отримання злитого білка шляхом культивування зазначеної клітини-господаря, композиції, що містить зазначений злитий білок, і способу інгібування метастазів раку. Охарактеризований злитий білок містить позаклітинний розчинний домен DLK1, що складається з амінокислотної послідовності SEQ ID NO:4 і Fc-домену людського антитіла. Представлена група винаходів може бути використана для одержання лікарського засобу для зниження міграції ракових клітин і інгібування метастазів раку. 8 н. і 3 з.п. ф-ли, 36 іл., 3 пр.

Полівалентна вакцина проти грипу на основі гібридного білка

Винахід відноситься до галузі біотехнології та медицини і стосується вакцини проти грипу, що викликається відомими штамами вірусів грипу А і В, а також можливими реассортантами. Запропонована полівалентна вакцина проти грипу отримана на основі гібридного білка, що включає фрагменти білків Н1, Н3 і Н5 вірусу грипу А, фрагмент гемаглютиніну вірусу грипу В і компоненти флагеллина - FliC1 і FliC2 (SEQ ID NO:1), сполучені гнучкими містками. Кодує білок нуклеотидна послідовність (SEQ ID NO:2) оптимізована для високоефективної експресії в клітинах Escherichia coli. Використання охарактеризованной вакцини дозволить забезпечити універсальну захист від грипу. 2 з.п. ф-ли, 4 іл., 1 табл., 13 пр.

Спосіб друку біологічних лігандів в процесі виготовлення біочіпів

Винахід відноситься до біотехнології. Запропоновано спосіб друку біологічних лігандів, що представляють собою олігосахариди, та/або полісахариди, та/або пептиди, та/або глікопептиди, та/або біотин. Попередньо на підкладку наносять шар гідрофобної нелетучей рідини, не смешивающейся з розчинником біологічних лігандів і має питому масу менше, ніж питома маса розчину біологічних лігандів. Потім безконтактним методом здійснюють друк біологічних лігандів. Як гідрофобної нелетучей рідини використовують вазелін, мінеральне масло або вищі граничні вуглеводні або їх суміш. Товщина шару гідрофобної нелетучей рідини переважно становить 50-200 мкм. Технічним результатом винаходу є підвищення рівномірності висихання крапель розчину біологічних лігандів на підкладці при одночасному забезпеченні захисту біологічних лігандів від передчасного гідролізу і поліпшення морфології спотів. 2 з.п. ф-ли, 2 іл., 3 пр.

Спосіб іммобілізації біомолекул на поверхні магнітокерованих наночастинок заліза покритих вуглецевої оболонкою

Винахід відноситься до способу іммобілізації білкових молекул на поверхні магнітокерованих наночастинок заліза, покритих вуглецевої оболонкою. Спосіб включає взаємодію порошку з розчиненим у воді 4-карбоксибензолдиазоний тозилатом для формування ковалентного зв'язку органічних функціональних груп з поверхнею порошку наночастинок заліза, покритих вуглецевої оболонкою. Додатково проводять карбодиимидную активацію з використанням систем: дициклогексилкарбодиимида з N-гидроксисукцинимидом в диметилсульфоксиді (DCC/NHS в ДМСО) або 1-(3-диметиламінопропіл)-3-этилкарбодиимид гидрохлориде з N-гидроксисукцинимидом у воді (EDC/NHS H2O) або фосфатному буферному розчині. Здійснюють ковалентную «зшивання» білкових молекул з активованою COOH-групою у водному або буферної середовищі. Винахід дозволяє здійснити іммобілізацію біомолекул на поверхні магнітокерованих наночастинок заліза, покритих вуглецевої оболонкою. 3 іл., 8 пр.

Спосіб дослідження клітин з допомогою биочипа

Винахід відноситься до галузі медицини, біології та ветеринарії
Винахід відноситься до галузі біотехнології ферментних препаратів, може бути використано для очищення і фракціонування целлюлолітіческіх ферментів і стосується способів отримання афінного адсорбенту

Спосіб отримання афинного сорбенту для очищення ферментних препаратів

Винахід відноситься до біотехнології, зокрема до способу отримання афинного сорбенту для очищення коллагеназ, і може бути використане для виділення високоочищених та високоактивних ферментних препаратів, які використовуються в медицині, біохімії, харчової промисловості, у ферментативному синтезі пептидів, а також для дослідницьких цілей
Винахід відноситься до медицини, зокрема до травматології, ортопедії, щелепно-лицевої хірургії, стоматології та нейрохірургії. Біодеградуємий матеріал для заміщення кісткової тканини містить 50-52% мас. біологічного гідроксиапатиту, 30-32% мас. фосфату магнію, 8-10% мас. гідрофосфату кальцію, 4,8-5,3% мас. гідроокису кальцію, решта - альгінат натрію. Матеріал містить в якості сполучного казеїн у вигляді аміачного розчину при співвідношенні порошкової маси биодеградируемого матеріалу до аммиачному розчину казеїну 1:1÷1,5. Технічним результатом є розширення арсеналу біодеградуючих матеріалів для заміщення кісткової тканини.

Биорезорбируемая гідрогелева полімерна композиція з біологічно активними речовинами (варіанти)

Винахід відноситься до галузі медицини. Описана биорезорбируемая гідрогелева полімерна композиція для серцево-судинної хірургії у вигляді плівки, отримана взаємодією природних полімерів, біологічно активних речовин, розчинника і пластифікатора, де в якості полімерів використовують зшиті биорезорбируемие полімери - желатин, хітозан, або суміші хітозан і желатин, хітозан і полигидроксибутират, в якості біологічно активних речовин або їх сумішей використовують антиоксидант - L-карнозин, антикоагулянт - гепарин, антиагрегант - дипіридамол, ацетилсаліцилову кислоту, нестероїдний протизапальний речовина - ацетилсаліцилову кислоту, антимікробні препарати - ципрофлоксацин, метронідазол, при цьому механічна міцність плівки не менше 1,2 МПа, відносне подовження - не більш 160%, модуль пружності - 0,4-5 МПа. Використовуються гідрогелеві полімерні композиції з регульованими термінами биорезорбции, пролонгованими термінами виділення біологічно активних речовин, з біосумісними і тромборезистентними властивостями, підвищеною антимикробностью, поліпшеними механічними характеристиками - підвищеною м'якістю і еластичністю. 6 з.п. ф-ли, 12 іл., 2 табл. 4 пр.

Органоспецифический регенерант gi

Винахід відноситься до медицини, а саме до трансплантології, травматології, загальної хірургії, стоматології, комбустіології, пластичної хірургії, косметології
Up!