Спосіб моделювання експериментальної амілоїдної кардіопатії у щурів

 

Даний винахід відноситься до медицини, експериментальної біології і може бути використано для моделювання експериментальної амілоїдної кардіопатії у тварин з метою отримання можливості вивчення патогенезу, профілактики і лікування кардіопатії.

Кардіопатія, cardiopathia (від грец. cardia - серце і pathos - страждання, поразка), термін, що застосовується по відношенню до таких змін серця, які являють собою тривале або стійке патологічне стан, що є наслідком попередніх дегенеративних або запальних процесів.

Особливий інтерес викликає проблема амілоїдозу серця, який виявляють у 2,3% померлих у віці до 50 років, у віковій групі 50-70 років його виявляють у 30%, у групі 70-80 років - вже у 41%, а у осіб, померлих у віці старше 90 років, амілоїдоз виявляли у 71%-90% випадків. У зв'язку з цим метою нашого дослідження є спроба змоделювати більш простий спосіб кардиопатического типи амілоїдозу для отримання можливості подальшого вивчення патогенезу, профілактики і лікування амілоїдної кардіопатії.

Амілоїдоз, амілоїдна дистрофія, порушення білкового обміну, що супроводжується утворенням в тканинах специфічного білково-полісахарид�ендотеліальної системи, накопиченням у плазмі крові аномальних білків, службовців аутоантигенами і викликають утворення аутоантитіл. В результаті взаємодії антигену з антитілом відбувається осадження грубодисперсних білків, що беруть участь в утворенні амілоїду. Відкладаючись у тканинах, амілоїд витісняє функціонально спеціалізовані елементи органу, що веде до загибелі цього органу.

Виходячи з вищевказаного гомогенізований міокард щурів застосований з метою запуску специфічної аутоімунної реакції організму, що в поєднанні з амилоидогеном сприяє утворенню і відкладенню амілоїдних мас в міокарді.

Відомий спосіб моделювання експериментального амілоїдозу у щурів, взятий авторами за прототип (патент РФ на винахід 2410761 С1, Габуева А. А., Брін В. Б., Козирєв К. М., зареєстрований 09.10.2009 р., заявка 2009137437/14, 09.10.2009 МПК' G09B 23/28), що полягає у введенні експериментальним тваринам равнодолевой суміші нативного яєчного альбуміну і повного ад'юванта Фрейнда з розрахунку 0,2 мл на 5 точок ін'єкцій.

Недоліками прототипу є низька ефективність для специфічного моделювання амілоїдозу серця.

Також відомий спосіб моделювання експериментального амілоїдозу у тварин,�истрированний 18.04.2006, заявка 2006113109/13, 18.04.2006 МПК' G09B 23/28), що полягає у введенні білкового препарату підшкірно. В якості білкового препарату вводять сирійським хом'якам нативну бичачу плазму через день з розрахунку 0,025 мл/г маси тіла протягом 60 днів експерименту.

Недоліками аналога є необхідність багаторазового введення білкового препарату підшкірно через день протягом 60 днів експерименту, а також відносно малі розміри тварин, що ускладнює проведення функціональних методів дослідження моделі. Крім цього, сирійські хом'яки важкодоступні та економічно невигідні.

Існує спосіб моделювання експериментального амілоїдозу у тварин, взятий авторами за аналог (патент РФ на винахід №2347279 С1, Пухова І. У., Козирєв К. М., Брін В. Б., зареєстрований 27.09.2007, заявка 2007135901/14, 27.09.2007 МПК' G09B 23/28), що включає введення нативної свинячий плазми через день з розрахунку 0,025 мл/г маси тіла протягом 60 днів експерименту.

Недоліками аналога є необхідність багаторазового введення білкового препарату протягом 60 днів через день, і малий розмір тварин, що значною мірою ускладнює дослідження функціонального стану серцево-судинної системи.

Також востей РФ на винахід №2446482 С1, Брін В. Б., Бєлікова А. Т., Козирєв К. М., зареєстрований 13.11.2010, заявка 2010146365/14, 13.11.2010 МПК' G09B 23/28), в якому пропонується одноразове введення сирійським хом'якам нативної людської плазми, змішаної з адъювантом Фрейнда в рівних пропорціях. Ін'єкції здійснюють симетричні пахвові і пахові області, і внутрішньоочеревинно з розрахунку 0,1 мл в кожну точку.

Недоліком даного аналога є низька специфічність безселективного впливу на міокард.

Заявляється винахід спрямовано на вирішення задачі, що полягає в розробці нового способу моделювання експериментальної амілоїдної кардіопатії у тварин, що полягає у веденні суміші, що складається з гомогенизированной тканини міокарда щурів (25%), яєчного альбуміну (25%) і адьюванта Фрейнда (50%), по 0,3 мл у 5 точок ін'єкції: внутрішньочеревно, пахові та пахвові області підшкірно ліворуч і праворуч.

Рішення цієї задачі забезпечує розширення можливостей моделювання експериментальної кардіопатії у тварин.

Запропонований спосіб відрізняється тим, що для моделювання амілоїдної кардіопатії вводять суміш, що складається з гомогенизированной тканини міокарда щурів (25%), яєчного альбуміну (25%) і адьюванта Фрейнда (50%), по 0,�й спосіб є ефективним, економічно вигідним і легко відтворюваним.

За наявними відомостями автора сукупність істотних ознак, що характеризують сутність винаходу, не відома, що дозволяє зробити висновок про відповідність винаходу критерію «новизна».

Експериментальним тваринам (старі щури-самці у віці 18-24 міс, масою тіла 350-400 гр) одноразово вводять суміш, що складається з гомогенизированной тканини міокарда щурів (25%), яєчного альбуміну (25%) і адьюванта Фрейнда (50%), по 0,3 мл у 5 точок ін'єкції: внутрішньочеревно, пахові та пахвові області підшкірно зліва і справа, що забезпечує розширення можливостей моделювання експериментальної кардіопатії у тварин, і дозволяє зробити висновок про відповідність критерію «винахідницький рівень».

Сукупність істотних ознак, що характеризують сутність винаходу, в принципі, може бути багато разів використана в медицині з отриманням результату, що полягає в ефективному і легко відтворений спосіб моделювання експериментальної амілоїдної кардіопатії у тварин, що дозволяє зробити висновок про відповідність винаходу критерію «промислова придатність».

Даний спосіб здійснюється наступним �си-самці лінії «Вістар» масою 350-400 гр у віці 18-24 міс, так як саме стареча брадитрофия тканин дозволяє ставити питання про моделювання кардіопатії. Для моделювання кардіопатії експериментальним тваринам одноразово вводять суміш, що складається з гомогенизированной тканини міокарда щурів (25%), яєчного альбуміну (25%) і адьюванта Фрейнда (50%), по 0,3 мл у 5 точок ін'єкції: внутрішньочеревно, пахові та пахвові області підшкірно ліворуч і праворуч.

У контрольних і дослідних тварин під тиопенталовим наркозом досліджуються гемодинамічні показники інвазивним способом у строки 60 днів експерименту, після чого тварини забиваються. Зразки тканин фіксуються в 10% нейтральному формаліні з подальшим приготуванням парафінових зрізів товщиною 5-6 мкм. Зрізи забарвлюються гематоксилином та еозином, конго-червоним. Вивчення зрізів проводиться у прохідному світлі за допомогою мікроскопа Микмед-1 під збільшенням× 80, × 200, × 600.

Сутність заявляється способу підтверджується функціонально і морфологічно.

При дослідженні основних показників гемодинаміки достовірно відзначалося зниження: серцевого індексу (СІ) та ударного індексу (УІ) і підвищення питомого периферичного судинного опору (УПСС) порівняно з контролем (таб. 1). Отмечалаth="90%" border="1" cellpadding="0" cellspacing="0" frame="all">Таблиця 1Зміни основних показників гемодинаміки при формуванні експериментальної амілоїдної кардіопатіїГрупаПоказникСАДСерцевий індексУдарний індексУПССЧССИнтактнаяM±m109,9±1,644 65±0,730,0020,116±0,0021,954±0,0043385±5,42ДосвідченаM±m107,3±2,0734,944±1,1200915±0,0042,407±0,8384,1±9,72P>0,1<0,001<0001<0,001>0,1

Приклад №1. Проведені серії дослідів з 2-х груп:

я - старим щурам-самцям (вік 18-24 міс, маса тіла 350-380 г) одноразово вводили суміш, що складається з гомогенизированной тканини міокарда щурів (25%), яєчного альбуміну (25%) і адьюванта Фрейнда (50%), по 0,3 мл у 5 точок ін'єкції: внутрішньочеревно, пахові та пахвові області підшкірно ліворуч і праворуч.

Морфологічному дослідженню на предмет виявлення кардіопатії підданий міокард, кровоносні судини.

В результаті проведених досліджень отримані морфологічні докази ефективності застосування нативного яєчного альбуміну в поєднанні з повним адъювантом Фрейнда для моделювання експериментальної кардіопатії у старих щурів-самців.

Гістологічно у 2-ї групи тварин в міокарді (фіг. 1, 2) при фарбуванні зрізів гематоксилином-еозином і конго-червоним виявлені ділянки паренхіматозної білкової дистрофії, місцями переходить в вогнищевий розпад і фрагментації кардіоміоцитів зі зникненням поперечної посмугованості (1). Відзначається виражена периваскулярная лимфогистиоцитарная інфільтрація (2), набряк строми (3), повнокров'я судин мікроциркуляторного русла (4). Крім цього, відзначаються склеротичні зміни строми. Має місце плазматическое просочування стінок судин микроцожение аморфних мас амілоїду в стінках судин і стромі міокарда (6).

Таким чином, результати морфологічного дослідження тканин експериментальних тварин, які отримували в якості амилоидогена равнодолевую суміш, що складається з гомогенизированной тканини міокарда щурів - 25%, яєчного альбуміну - 25% і адьюванта Фрейнда - 50%, по 0,3 мл у 5 точок ін'єкції: внутрішньочеревно, пахові та пахвові області підшкірно ліворуч і праворуч, свідчать про розвиток експериментального амілоїдозу з переважним ураженням міокарда.

Підводячи підсумок, слід зазначити, що одноразове введення суміші, що складається з гомогенизированной тканини міокарда щурів (25%), яєчного альбуміну (25%) і адьюванта Фрейнда (50%), по 0,3 мл у 5 точок ін'єкції: внутрішньочеревно, пахові та пахвові області підшкірно зліва і праворуч є ефективним способом моделювання експериментальної кардіопатії.

Спосіб моделювання експериментальної амілоїдної кардіопатії у щурів, що полягає в одноразовому введенні старим щурам-самцям суміші, що складається з гомогенезированной тканини міокарда щурів - 25%, яєчного альбуміну - 25% і ад'юванта Фрейнда - 50%, по 0,3 мл у 5 точок ін'єкції: внутрішньочеревно, пахові та пахвові області підшкірно зліва і справа.



 

Схожі патенти:

Тест-фантом

Винахід відноситься до рентгеноскопії, а саме до елементів медичної рентгенодіагностики. Тест-фантом складається з двох частин, що утворюють єдине ціле. Одна частина має постійну висоту в поздовжньому напрямку, а інша частина має безперервно мінливу висоту в цьому ж напрямку, утворюючи клин. На бічній стороні клиновий частини виконані калібровані вирізи. Використання винаходу забезпечує підвищення точності визначення мінеральної щільності кісткової тканини за рентгенівським знімкам, отриманим за допомогою рентгенівських апаратів загального застосування, і спрощення конструкції. 7 іл.

Спосіб створення експериментальної моделі гострого панкреатиту у тварини

Винахід відноситься до медицини, зокрема до гастроентерології, патофізіології, і стосується моделювання гострого панкреатиту. Для цього спосіб включає лігування основного стовбура вивідної протоки підшлункової залози, введення в систему проток підшлункової залози агресивного розчину для прояви панкреатиту, видалення лігатури. При цьому в якості агресивного розчину використовують 1% розчин хенодеоксихолевой кислоти з 5% розчином натрію гідрокарбонату в рівних співвідношеннях та в обсязі 0,3-0,5 мл з розрахунку 10-15 мг/кг маси тіла тварини. Спосіб забезпечує створення моделі гострого жирового, геморагічного або змішаного панкреатиту у тварини, що дозволяє використовувати його для удосконалення відомих способів консервативних і оперативних методів лікування. 15 іл.

Спосіб експериментального моделювання коркового виду катаракти in vivo

Винахід відноситься до медицини, зокрема до офтальмології, і стосується моделювання коркового виду катаракти in vivo. Для цього у експериментальної тварини проводять хірургічну двосторонню десимпатизацию шляхом видалення верхнього шийного симпатичного ганглія. При простоті і економічності моделювання спосіб забезпечує формування коркового помутніння кришталика, яке за клінічними, морфологічними та імуногістохімічним характеристиками ідентично змін клітин кришталика при віковому його помутнінні у людини. 6 іл., 2 табл.
Винахід відноситься до медицини, а саме до фармакології, і може бути використано для моделювання стану інгібування функціональної активності глікопротеїну-Р линестренолом в організмі. Для цього при проведенні експерименту in vivo вводять препарат-інгібітор линестренол кроликам внутрішньошлунково у добовій дозі 110 мкг/кг маси тіла тварини курсом 14, 21 або 28 днів. Винахід дозволяє використовувати линестренол в якості позитивного контролю зниженої активності глікопротеїну-Р для прогнозування приналежності досліджуваних лікарських речовин до субстратів білка-транспортера. 1 табл.
Винахід відноситься до медицини, зокрема до експериментальної онкології, і може бути використане для вивчення механізмів лімфатичного канцерогенезу та розробки нових методів лікування лімфом. Для цього моделюють лімфому сліпої кишки введенням щура 2,4,6,-тринитробензолсульфоновой кислоти в дозі 0,1-0,15 мл, розведеної в 0,1-0,15 мл 50% розчину етанолу. Введення здійснюють в підслизовий шар купола сліпої кишки на 2-3-кратне щотижня протягом 2-3 тижнів. Спосіб забезпечує створення адекватної моделі лімфоми сліпої кишки. 2 пр.

Засіб для корекції патологічних змін у життєздатного потомства, викликаних цитостатичних дією на організм матері

Винахід відноситься до медицини, зокрема до фармакології, і стосується розширення арсеналу засобів для корекції патологічних змін стану життєздатного потомства при цитостатичному впливі. Для цього препарат глутоксим вводять щурів-самок у дозі 50 мкг/кг за 5 днів до і через 5 днів після введення цитостатичного препарату вепезид. Останній вводять одноразово внутрішньовенно в максимально переносимої дози, що дорівнює 30 мг/кг. Встановлено, що глутоксим може бути використаний в якості засобу для корекції патологічних змін у життєздатного потомства щурів, отриманого від спарювання через 3 місяці після цитостатичного впливу. Застосування глутоксима в якості засобу коригувальної терапії дозволяє підвищити ефективність і скоротити її побічні ефекти. 6 іл.
Винахід відноситься до експериментальної медицини, зокрема розробці способів лікування променевої хвороби. Спосіб здійснюють шляхом проведення лабораторним мишам через годину після опромінення внутрішньовенної алогенної трансплантації мультипотентних мезенхиальних стромальних клітин (ММСК) і гемопоетичних стовбурових клітин (ГСК). Останні отримують з плаценти самок мишей при терміні гестації 14 днів. При цьому ММСК вводять в дозі 6,5 млн клітин/кг, а ДСК - у дозі 400 тис. клітин/кг Винахід дозволяє розширити арсенал засобів, здатних забезпечити регенераторний потенціал тканин селезінки, а також підвищити регенерацію основних морфометричних показників селезінки після впливу променевого навантаження. 2 табл.

Спосіб профілактики та лікування гострої променевої хвороби в експерименті

Винахід відноситься до медицини, ветеринарії і призначений для профілактики та лікування гострої променевої хвороби. Тваринам після опромінення у дозах, що викликають кісткомозкові форму радіаційного ураження, перорально вводять меланін з водорастворимостью не менше 80% та концентрацією парамагнітних центрів не менше 8·1017 спін/м, в розчиненому вигляді в дистильованій воді в ефективній концентрації. Воду з меланіном використовують у мишей в якості питної після одноразового та фракціонованого гострого опромінення, здатного викликати гостру променеву хворобу. Воду з меланіном вживають з 1-ої по 30-ту добу після одноразового опромінення, а в ході фракціонованого опромінення - з 1-ї доби від початку опромінення і по 30-е добу після закінчення опромінення. Спосіб забезпечує підвищення виживаності, прискорення відновлення гемопоезу, маси тіла та орієнтовно-рухової активності. 7 табл., 5 пр.

Спосіб оцінки просторової орієнтування і когнітивних порушень у експериментальних тварин

Винахід відноситься до галузі медицини, а саме до фізіології поведінки тварин. Орієнтовно-дослідницька і рухове поведінку щурів досліджують на тлі вироблення пищедобивательного навички допомогою диференціації траєкторії руху тварин в Ж-подібному лабіринті. Оцінку здійснюють за такими формами рухових дій: руху до локусами лабіринту без харчового підкріплення; цілеспрямовані руху до локусу з харчовим підкріпленням; дослідницькі обходи усіх майданчиків лабіринту; руху до локусу, дзеркально протилежній локусу з харчовим підкріпленням; багаторазово повторювані рухи між двома локусами лабіринту; завмирання на стартовому майданчику. Спосіб дозволяє підвищити достовірність дослідження, що досягається за рахунок багатофакторної оцінки функцій центральної нервової системи. 1 з.п. ф-ли, 1 табл., 1 пр., 6 іл.

Спосіб оцінки остеоінтеграції пористих дротяних матеріалів в експерименті

Винахід відноситься до медицини, а саме до експериментальної хірургії, патологічної анатомії, патологічної фізіології і може бути використане для оцінки остеоінтеграції пористих дротяних матеріалів в експерименті. Спосіб включає забір кісткових блоків з досліджуваним пористим дротяним матеріалом, фіксацію кісткової тканини з пористим дротяним матеріалом, декальцинирование, знежирення, зневоднення, заливку цієї тканини, виготовлення зрізів, фарбування і гистоморфометрию. При цьому до або після фіксації кісткової тканини з досліджуваним пористим дротяним матеріалом і до або після декальцинації проводять пошук і фіксацію крайового дротяного елемента пористого дротяного матеріалу в кістковому блоці. Виробляють расплетание пористого дротяного матеріалу з кісткового блоку методом витягування крайового дротяного елемента. Аналіз макропрепаратов виробляють при звільненні порових просторів пористого дротяного матеріалу. Далі роблять забір тканин з вивільнюваних порових просторів, у т. ч. роблять забір і аналіз внутрипорових фрагментів. Спосіб забезпечує можливість якісної і кількісної оцінки гистоморфометрических параметрів�ой архітектоніки. 3 пр., 1 іл.
Up!