Протимікробний засіб

 

Винахід відноситься до галузі медицини і може бути використане в медичній практиці як засіб, що володіє протимікробною дією для лікування інфекційних процесів, спричинених чутливими мікроорганізмами. Суть винаходу - застосування терпенсульфида формули (I) 2-(1'-гідрокси-4'-изопропенил-1'-метилциклогексил-2'-тіо)-метилэтаноата, що володіє противо-мікробної активністю.

Сучасний фармацевтичний ринок пропонує широкий спектр протимікробних, антисептичних, дезінфікуючих засобів і препаратів як синтетичного, так і природного походження.

Препарати рослинного походження, як правило, являють собою комбінацію біологічно активних сполук і можуть надавати комплексне многонаправленное дію.

До теперішнього часу накопичено значний обсяг інформації про лікувальні властивості природних терпеноїдів, синтезованих різними рослинами (Павлов І. Н. Зниження стійкості хвойних лісів Сибіру до кореневих патогенів в результаті сучасного збільшення температури приземного шару повітря і грунту / І. Н. Павлов. О. А. Барабанова, С. с. Кулаков, В. о. Єрьомін та співавт. // Хвойні �ктурой терпеноїди перевершують всі інші класи природних сполук. У цього класу природних речовин виявлено широкий спектр біологічної активності (Старцева Ст. А. Синтез і біологічна активність монотерпеноідів ментанового ряду / В. А. Старцева, К. Е. Нікітіна, Е. В. Сиразиева і співавт. // Хімія в інтересах сталого розвитку. - 2009. - Том 17. - Вип. 5. - С. 539-545; Хасанов Ст. Ст. Вивчення складу і антиокиснювальної активності продуктів водно-парової дистиляції ялиці сибірської / Ст. Ст. Хасанов, Г. Л. Рижова, Т. Т. Куряева, К. А. Дичко // Хімія рослинної сировини. - 2009. - №4. - С. 83-88; Мозуль в. І. Дослідження ефірної олії MyrtuscommunisL. / В. І. Мозуль, В. С. Частка, К. І. Слобожан // Актуальні питання фармацевтичної та медичної науки на практиці. - 2011. - Вип. XXIV. - №2. - С. 30-32; Степаненко В. С. Вивчення антимікробної активності деяких природних терпеноїдів / В. С. Степаненко, С. В. Сяткин, В. В. Килина, Ст. Н. Каргаев, К. Е. Нікітіна // Матеріали Всеросійської науково-практичної конференції «Актуальні проблеми медико-біологічних дисциплін». - Саранськ, 2012. - С. 147-150; Килина В. В. Фармакологічні властивості терпенсульфида ментанового ряду / В. В. Килина, Р. С. Гараєв, К. Е. Нікітіна, Н.П. Артемова, В. С. Степаненко // Міжнародний журнал прикладних і фундаментальних досліджень. - 2012. - №2. - С. 83). Ефірні олії та жи біологічно активних речовин (Хасанов Ст. Ст. Вивчення складу і антиокиснювальної активності продуктів водно-парової дистиляції ялиці сибірської / Ст. Ст. Хасанов, Г. Л. Рижова, Т. Т. Куряева, К. А. Дичко // Хімія рослинної сировини. - 2009. - №4. - С. 83-88; Павлов І. Н. Зниження стійкості хвойних лісів Сибіру до кореневих патогенів в результаті сучасного збільшення температури приземного шару повітря і грунту / І. Н. Павлов, О. А. Барабанова, С. с. Кулаков, В. о. Єрьомін та співавт. // Хвойні бореальної зони. - 2011. - Т. 28. - Вип. 1-2. - С. 47-54; Мозуль в. І. Дослідження ефірної олії MyrtuscommunisL. / В. І. Мозуль, В. С. Частка, К. І. Слобожан // Актуальні питання фармацевтичної та медичної науки на практиці. - 2011. - Вип. XXIV. - №2. - С. 30-32).

В останні два десятиліття в результаті підвищеної уваги до природних терпеноїди список лікарських речовин поповнився за рахунок появи лікарських засобів на їх основі (пат. 2197994 РФ, МПК7A61L 2/16. Дезінфікуючий засіб «Лесептик» / Слинина К. Н. [та ін]; заявник і патентовласник Наук.-дослідж. вет. ін-т Нечорноземної зони РФ, ТОВ Наук.-вир. фірма «Левес-НН», ГУП Центр. Навч.-дослідж. і проектний ін-т ліс-хім. пром. - №2000113057/13; заявл. 25.05.2000; опубл. 10.02.2003; пат. 2054945 РФ, МПК6A61K 35/78. Засіб «Абисил-1», що володіє противовоспалит�Пинигина Н. М. - №95109894/14; заявл. 28.06.1995; опубл. 27.02.1996; Pharmacological activity of the essential oil of Bupleurum gibraltaricum: Anti-inflammatory activity and effects on isolated rat uteri / M. A. Ocete [et al.] // J. of Ethnopharmacology. - 1989. - Vol. 25, Iss. 3. - P. 305-313; Бальзамическое засіб для місцевого застосування, що має антимікробну, протизапальну і болезаспокійливу дію / Гармашова А. П. [та ін]; заявник і патентовласник ТОВ НПФ "Левес-А", Ін-т гігієни праці і профзахворювань ВСНЦ СО РАМН. - №94025798/14; заявл. 12.07.1994; опубл. 27.08.1997; пат. 2054945 РФ, МПК6A61K 35/78. Засіб «Абисил-1», що володіє протизапальною, антибактеріальною і ранозагоювальною активністю / Пинигина Н.М. [та ін]; заявник і патентовласник Пинигина Н.М. - №95109894/14; заявл. 28.06.1995; опубл. 27.02.1996).

Відомо, що терпенсульфид - 2-(1'-гідрокси-4'-изопропенил-1'-метилциклогексил-2'-тіо)-метилэтаноат - має фунгіцидну та протизапальну дію (пат. 2431479 РФ, МПК С07С 321/24, С07С 319/08, A61L 2/16, А61К 35/78. 2-(1'-Гідрокси-4'-изопропенил-1'-метилциклогексил-2'-тіо)-метилэтаноат, що має фунгіцидну та протизапальною дією / Нікітіна К. Е. та ін; заявник і патентовласник Казанський державний медичний університет - №2010130104/15, заявл. 19.07.2010, опубл. 20.10.11).

Протимікробні властивості заявляени.

Мета винаходу - ефективне з'єднання, що володіє протимікробною активністю.

Поставлена мета досягається пропонованим винаходом, а саме, 2-(1'-гідрокси-4'-изопропенил-1'-метилциклогексил-2'-тіо)-метилэтаноатом (формули I).

Дослідження протимікробної активності 2-(1'-гідрокси-4'-изопропенил-1'-метилциклогексил-2'-тіо)-метилэтаноата

Дослідження терпенсульфида (I) 2-(1'-гідрокси-4'-изопропенил-1'-метилциклогексил-2'-тіо)-метилэтаноата, вихідного (+)-1,2-оксиду лімонену, а також його структурного аналога (+)-лімонену проведено у відношенні 14 музейних тест-штамів мікроорганізмів і 610 досвідчених штамів мікроорганізмів, ізольованих з матеріалу, взятого від хворих з неспецифічними і специфічними захворюваннями органів дихання та сечовивідних шляхів, шлунково-кишкового тракту.

Характеристика досліджуваних мікроорганізмів. В якості тест-мікроорганізмів використовували музейні штами: Salmonella enteritidis 5765 АТСС, Shigella sonnei S-форма 20, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Pseudomonas aeruginosa 453, Escherichia coli М17 штам, Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus 29213 ATCC, Staphylococcus aureus 906, Enterococcus faecalis 2919 ATCC, Citrobacter freundii 101/57, Proteus vulgaris 222, Klebsiella pneumoniae 9172, Bacillus cereus 96, Streptococcus pyogenes 1238 ATCC. Музейні штами, що використовуються в роботі, �ри ріст на щільному живильному середовищі: умови для вирощування - середовища №1, 2; t=36±1°C, 18-20 годин. Колонії гладенькі, з рівними краями, з рівномірно золотистої пігментацією. При зростанні на рідкому поживному середовищі: умови для вирощування - середовище №3, pH 7,2-7,4, 18-20 годин. Виникає рівномірне помутніння бульйону без плівки і слизового осаду на дні. При мікроскопії: однорідні за величиною розташовані у вигляді грон коки з добре вираженою грампозитивної забарвленням.

Escherichia coli АТСС25922, Escherichia coli М17 штам при зростанні на щільному живильному середовищі: умови для вирощування - середовища №1, 2; t=36±1°C, 18-20 годин. Колонії плосковипуклі опалово-каламутні 0,3-0,5 см в діаметрі з рівними або злегка хвилястими краями, можуть бути слизові колонії. При зростанні на лактозовмісних диференціальних поживних середовищах - середовища №4, 5; t=36±1°C, 18-20 годин - колонії з зеленуватим металічним блиском (фуксиновий глянець). При зростанні на рідкому поживному середовищі: умови для вирощування - середовище №3, pH 7,2-7,4, 18-20 годин. Виникає дифузне помутніння і утворення осаду або плівки. При мікроскопії: грамнегативна дрібна паличка зі злегка закругленими кінцями і перитрихиально розташованими джгутиками.

Bacillus cereus 96 при зростанні на щільному живильному середовищі: умови для вирощування - середовища №1, 2; t=36±1°�ельной середовищі: умови для вирощування - середовище №3, pH 7,8-8,0, 18-20 годин. Зростання у вигляді зморшкуватою плівки, вся середа прозора, без осаду. При мікроскопії: тонкі із закругленими кінцями палички, розташовані окремо або короткими ланцюжками, з добре вираженою грампозитивної забарвленням.

Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Pseudomonas aeruginosa 453, при зростанні на щільному живильному середовищі: умови для вирощування - середовища №1, 2; pH 7,2-7,-4, t=36±1°C, 18-20 годин. Колонії широкі, розпливчасті, прозорі, з нерівним краєм. При зростанні на рідкому поживному середовищі: умови для вирощування - середовище №3, pH 7,2-7,4, 18-20 годин. Зростання у вигляді рівномірного помутніння, товстої плівки; середовище може набувати жовтувато-зелене забарвлення. При мікроскопії: поодинокі палички або короткі ланцюжки з добре вираженою грамнегативної забарвленням.

Streptococcus pyogenes 1238 АТСС, коки неправильної округлої форми, що розташовуються у вигляді ланцюжків або попарно, розміри 0,5-2,0 мкм. За біохімічними властивостями поділяються S. bovis, S. agalactia, S. mutans та ін. При зростанні на щільному живильному середовищі: умови для вирощування середовища 6, 7; №, t=36±1°C, 18-20 годин. Колонії дрібні блискучі.

Klebsiella pneumoniae 9172, умовно-патогенні бактерії, прямі грамнегативні палички (0,3-1,0 і 0,6-6 мкм), що розташовуються поодиноко, парами або короткими ц�рупниє, опуклі, вологі, слизові оболонки, нерідко зливаються один з одним.

Proteus vulgaris 222, умовно-патогенні бактерії, прямі грамнегативні палички з закругленими кінцями (0,4-0,8 і 1,0-3,0 мкм). Умови росту для вирощування - середовища №1, 2 та ін; t=36±1°C, 18-20 годин. Утворює повзучі колонії з відростками. При зростанні на лактозовмісних диференціальних поживних середовищах №4, 5; t=36±1°C, 18-20 годин - прозорі, злегка рожеві колонії, виявляють здатність до роїння і дають зливний ріст.

В якості досвідчених досліджувалися штами мікроорганізмів (№610), ізольованих з матеріалу, взятого від хворих Державного бюджетного установи охорони здоров'я Республіки Мордовія «Республіканська інфекційна клінічна лікарня» р. Саранська з захворюваннями органів дихання, сечових шляхів та шлунково-кишкового тракту. Джерелом виділення патогенів служила сеча, харкотиння, слиз із зіву, носа і носоглотки, фекалії, секційний матеріал.

Сеча, фекалії, секційний матеріалPseudomonas aeruginosa
Таблиця 1
Характеристика досліджуваних клінічних штамів мікроорганізмів
№ п/п
1234
1Staphylococcus aureus92Слиз із зіву, носа, носоглотки, сеча, фекалії, секційний матеріал
2Staphylococcus epidermidis36Слиз із зіву, носа, носоглотки, сеча, фекалії, секційний матеріал
3Streptococcus pyogenes20Слиз із зіву, носа, носоглотки, секційний матеріал
4Streptococcus pneumoniae18Слиз із зіву, носа, носоглотки, секційний матеріал
5Streptococcus salivarius20Слиз із зіву, носа, носоглотки, секційний матеріал
6Streptococcus uberis21Слиз із зіву, носа, носоглоткап="1">20Слиз із зіву, носа, носоглотки, секційний матеріал
8Streptococcus agalactia23Слиз із зіву, носа, носоглотки, секційний матеріал
9Streptococcus sanguinis24Слиз із зіву, носа, носоглотки, секційний матеріал
10Streptococcus mutans23Слиз із зіву, носа, носоглотки, секційний матеріал
11Escherichia coli64Слиз із зіву, носа, носоглотки, сеча, фекалії, секційний матеріал
12Klebsiella pneumoniae32Слиз із зіву, носа, носоглотки, сеча, фекалії, секційний матеріал
13Klebsiella oxytoca19Слиз із зіву, носа, носоглотки, сеча, фекалії, секційний матеріал
15Enterococcus faecium18Сеча, фекалії, секційний матеріал
16Salmonella enteritidis24Фекалії
17Shigella sonnei12Фекалії
18Enterobacter cloaceae19Фекалії, секційний матеріал
19Enterobacter aerogenes18Фекалії, секційний матеріал
20Proteusvulgaris24Сеча, фекалії, секційний матеріал
21Proteus mirabilis18Сеча, фекалії, секційний матеріал
22Citrobacter freundii1849Слиз із зіву, носа, носоглотки, сеча, фекалії, секційний матеріал

Характеристика поживних середовищ. Поживні середовища для культивування та визначення протимікробної активності досліджуваних сполук повинні відповідати наступним вимогам:

- утримувати в оптимальних концентраціях всі елементи, необхідні мікробної клітці для забезпечення процесів життєдіяльності і розмноження: макро - і мікроелементи, органічні джерела вуглецю, азоту, неорганічні солі, вітаміни та інші ростові фактори;

- володіти певною вологістю (не менше 20%), так як вода необхідна для здійснення всіх метаболічних процесів, крім цього, вона служить джерелом водню і кисню для мікробної клітини;

- повинна бути изотоничной, тобто концентрація солей у середовищі повинна відповідати такої в мікробній клітині (для більшості мікроорганізмів - 0,5%, для галофільних - 3%);

- концентрація іонів водню (рн) в середовищі повинна бути оптимальною і відповідати даному виду мікроба (в діапазоні 4,5-8,5);

- окислювально-відновлювальний потенціал середовища (Eh) повинен відповідати потребност�льної.

Середовище №1. М'ясо-пептонний агар (МПА) ЗАТ «НИЦФ»

Складг/л
Пептон10,0
Натрію хлорид5,0
Вода м'ясна1000,0 мл
Агар-агар2,0-20,0

Кінцеве значення pH (при 25°C) 7,3±0,2

Використовується для вирощування невибагливих мікроорганізмів, для приготування спеціальних середовищ.

Середовище №2. Поживний агар (М001) HiMedia Laboratories Pvt. Limited

Складг/л
Пептон5,0
Натрію хлорид5,0
Екстракт яловичий1,5
Дріжджовий екстракт1,5
Агар-агар15,0
Дистильована вода

Середовище №3. М'ясо-пептонний бульйон (МПБ) ЗАТ «НИЦФ»

Складг/л
Пептон10,0
Натрію хлорид5,0
Вода м'ясна1000,0 мл

Кінцеве значення pH (при 25°C) 7,3±0,2

Використовується для вирощування невибагливих мікроорганізмів, для приготування спеціальних середовищ.

Середа №4. Середовище Ендо (комерційна) ФС 42-350498 ЗАТ «НИЦФ»

�історія
Складг/л
Панкреатичний гідролізат кільки11,5
Екстракт кормових дріжджів0,86
Лактоза12,9
Фуксин основний0,22
Сульфат натрію двузамещенний0,48
Сульфіт натрію0,83
0,01
Агар-агар9,6
Дистильована вода1000,0 мл

Кінцеве значення pH (при 25°C) 7,3±0,2

Мікроорганізми, здатні розщеплювати лактозу (лактозопозитивні) утворюють колонії яскраво-рожевого або червоно-малинового кольору, нерідко з металевим блиском. Лактозонегативние мікроби дають зростання у вигляді безбарвних або слабо рожевих колоній.

Середа №5. Середовище Ендо (M029R) Hi Media Laboratories Pvt. Limited

Складг/л
Пептичний перевар тваринної тканини10,0
Лактоза10,0
Калію гідрофосфат3,5
Натрію сульфіт2,5
Фуксин основний0,5
Агар-агар0,5
Дистильована вода1000,0 мл
<грампозитивні мікроорганізми. Лактоза розкладається мікроорганізмами до альдегіду і кислоти. Альдегід в свою чергу звільняє фуксин з фуксин-сульфітного комплексу, посилюючи червоне забарвлення колоній. У кишкових паличок ця реакція дуже виражена і супроводжується кристалізацією фуксину, що проявляється зеленуватим металічним блиском (фуксиновий глянець) колоній.

Середа №6. Основа колумбійського кров'яного агару (M144) Hi Media Laboratories Pvt. Limited

Складг/л
Пептон (спеціальний)23,0
Крохмаль кукурудзяний1,0
Натрію хлорид5,0
Агар-агар10,0
Дистильована вода1000,0 мл

Кінцеве значення pH (при 25°) 7,3±0,2

Для приготування кров'яного агару асептично вносять стерильну дефибринированую кров барана (до 5% про.). Ретельно перемішати.

Присутність спеціального пептона забезпечує швидкий і рясний ріст вибагливих микроор�Бараняча кров дозволяє оцінити здатність мікробів до гемолізу та забезпечує їх гемином (Х-фактором), який необхідний для росту багатьох бактерій.

Середа №7. Сироватковий агар

В якості основи використовують 1,2-1,5% агар (pH 7,4), приготовлений на бульйоні з рибного гідролізату, бульйоні з перевара Хоттингера (амінні азот в бульйоні 150-180 мг/мл) або сухому поживному агарі спеціального призначення. До 80 мл розплавленого і охолодженого до температури 50°C агару додають 20 мл інактивованої при температурі 56°C протягом 30 хвилин сироватки.

Середа №8. Агар Мюллера-Хінтона (МОХУ) (М173) Hi Media Laboratories Pvt. Limited

Складг/л
Витяжка яловичини300,0
Кислотний гідролізат казеїну17,0
Крохмаль1,5
Агар-агар17,0
Дистильована вода1000,0 мл

Кінцеве значення pH (при 25°) 7,3±0,2

Для приготування кров'яного агару асептично вносять стерильну дефибринированую кров барана (до 5% про.). Ретельно перемішати.

Підтримай�мих в процесі росту.

Середа №9. Бульйон Мюллера-Хінтона (МХБ) (М391) Hi Media Laboratories Pvt. Limited

Складг/л
Витяжка яловичини300,0
Кислотний гідролізат казеїну17,0
Крохмаль1,5
Дистильована вода1000,0 мл

Кінцеве значення pH (при 25°) 7,4±0,2

Для приготування кров'яного бульйону асептично вносять стерильну дефибринированую кров барана (до 5% про.). Ретельно перемішати.

Підтримує ріст багатьох мікроорганізмів. Крохмаль служить захисним колоїдом» проти токсичних речовин, вироблюваних у процесі зростання.

Характеристика методів дослідження. В ході дослідження чутливості мікроорганізмів до лимонену, 1,2-оксиду лімонену і терпенсульфиду (I), незалежно від конкретного методу, проводилося послідовне виконання декількох етапів (Визначення чутливості мікроорганізмів до антибактеріальних препаратів (Методичні вказівки МУК 4.2.1890-04) // Клінічна микроиготовление суспензії досліджуваних мікроорганізмів (инокулюма);

- інокуляція;

- інкубація;

- облік та інтерпретація результатів.

Диско-дифузійний метод включав також етап накладення дисків на щільне живильне середовище.

Для оцінки чутливості використовували спеціально призначені для цієї мети середовища (середовища №8, 9), дозволені до застосування в Російській Федерації в установленому порядку і за своїми характеристиками задовольняють вимогам. Внутрішньолабораторний контроль якості середовища проводили при використанні всіх середовищ, дозволених до застосування в Російській Федерації в установленому порядку.

Вид поживного середовища для оцінки чутливості визначали обраним методом проведення дослідження (агар або бульйон), а також видом досліджуваного мікроорганізму.

Обрану поживне середовище для визначення чутливості готували з сухого середовища промислового виробництва у відповідності з інструкцією виробника. Після автоклавування живильне середовище відразу ж розливали в стерильні пробірки або чашки Петрі. Агар розливали по чашках шаром товщиною 4 мм (на чашку діаметром 100 мм потрібно 25 мл агару, на чашку діаметром 90 мм - 20 мл). Чашки залишали при кімнатній температурі для застигання. Приготовлені укаа становила 1,5×108КУО/мл Оптична щільність бактеріальної суспензії з концентрацією 1,5×108КУО/мл при візуальному контролі відповідала стандарту каламутності 0,5 за Мак-Фарланду. Контроль оптичної щільності суспензії здійснювали денситометрически. В роботі використовували комерційний стандарт каламутності. Бактеріальну суспензію готували з агарових культур.

Для приготування инокулюма використовували чисту добову культуру мікроорганізмів, які виросли на щільних живильних середовищах. Відбирали декілька однотипних, чітко ізольованих колоній, що виросли на неселективних щільних поживних середовищах. Петлею переносили незначна кількість матеріалу з верхівок колоній в пробірку зі стерильним фізіологічним розчином, доводячи щільність инокулюма точно до 0,5 за стандартом Мак-Фарланда. Инокулюм використовували протягом 15 хв після приготування.

Метод серійних розведень в бульйоні - макрометод (пробірковий)

Тестування проводили в об'ємі 1 мл кожного розведення досліджуваного з'єднання з кінцевою концентрацією досліджуваного мікроорганізму приблизно 5×105КУО/мл

МХБ для визначення чутливості розливали по 0,5 мл в кожну пробірку. Кількість пробірок склад�мого з'єднання готували з основного розчину з використанням рідкого живильного середовища - МХБ. Потім робочий розчин в кількості 0,5 мл за допомогою мікропіпетки зі стерильним наконечником вносили в першу пробірку, що містить 0,5 мл бульйону. Ретельно перемішували і новим стерильним наконечником переносили 0,5 мл розчину досліджуваного з'єднання в бульйоні у другу пробірку, містила спочатку 0,5 мл бульйону. Цю процедуру повторювали, поки не був приготований весь необхідний ряд розведень. З останньої пробірки 0,5 мл бульйону видаляли.

Таким чином, отримували ряд пробірок з розчинами досліджуваного з'єднання, концентрації яких відрізнялися в сусідніх пробірках в 2 рази.

Для інокуляції використовували стандартну мікробну суспензію, еквівалентну 0,5 за стандартом Мак-Фарланда, розведену в 100 раз на МХБ, після чого концентрація мікроорганізму в ній становила приблизно 106КУО/мл По 0,5 мл инокулюма вносили в кожну пробірку, що містить по 0,5 мл відповідного розведення досліджуваного з'єднання, і в одну пробірку з 0,5 мл МХБ без антибіотика («негативний» контроль). Кінцева концентрація мікроорганізму в кожній пробірці склала приблизно 5×105КУО/мл Инокулюм вносили в пробірки з розведеннями досліджуваного з'єднання не пізніше 15-30 хв з моменту приготува�» контроль, інкубували у звичайній атмосфері при температурі 37°C протягом 16-20 або 20-24 год (в залежності від виду досліджуваного мікроорганізму). Пробірку «негативний» контроль поміщали в холодильник при 4°C, де зберігали до обліку результатів.

Для визначення наявності росту мікроорганізму пробірки з посівами переглядали в минаючому світлі. Зростання культури в присутності досліджуваного з'єднання порівнювали з референтною пробіркою («негативний» контроль), що містить вихідний инокулюм і зберігалася в холодильнику. Мінімальну пригнічуючу концентрацію (МПК) визначали за найменшої концентрації досліджуваного з'єднання, яка пригнічує видимий ріст мікроорганізму. Мінімальну бактерицидну концентрацію (МБК) визначали шляхом висіву з пробірок на щільні поживні середовища з подальшою інкубацією посівів у звичайній атмосфері при температурі 37°C протягом 16-20 або 20-24 год (в залежності від виду досліджуваного мікроорганізму).

Для зручності в аналізі отриманих даних оцінка активності досліджуваних сполук визначалася в хрестах за наступною схемою (Першин Р. Н. Методи експериментальної хіміотерапії / Р. Н. Першин // М: Медицина, 1971. - 541 с.): «+++» - рясний ріст; «++» - глибинний або поверхневий �а культури, відповідність «негативного контролю».

Диско-дифузійний метод (ДДМ)

Для визначення чутливості ДДМ використовували МОХУ (для стрептококів з додаванням баранячої крові), приготовлений згідно з інструкцією виробника. Товщина шару агару в чашці становила 4,0±0,5 мм, що досягалося при внесенні в чашку Петрі діаметром 90 мм суворо 20 мл агару, діаметром 100 мм - 25 мл агару. Перед заповненням розплавленої середовищем чашки Петрі встановлювали на строго горизонтальну поверхню (вивірену за рівнем, без западин і опуклостей). Після заповнення чашки залишали при кімнатній температурі для застигання. Використовували свіжоприготовані чашки, які перед інокуляцією підсушували інкубацією при 37°C з напіввідкритою кришкою протягом 10-20 хв. Перед інокуляцією контролювали відсутність конденсату рідини на внутрішній поверхні кришок.

Для визначення чутливості ДДМ використовували стандартизовані диски НД-ПМП-1 з технічного картону фільтрувального ГОСТ 6722-75 (ФГУН «Санкт-Петербурзький науково-дослідний інститут епідеміології і мікробіології ім. Л. Пастера» Федеральної служби з нагляду в сфері захисту прав споживачів і благополуччя погоди підприємства-виробника в сухому темному місці при температурі 2-8°C протягом усього терміну придатності набору. Невеликі партії дисків, використовувані при повсякденній роботі, зберігали при температурі до 25°C не більше 15 днів щільно укупоренними так, щоб гарантувати неможливість потрапляння у флакон вологи, крім того, для додаткового захисту від вологи у флаконах (картриджах) з дисками міститься спеціальний вологовбирач (силікагель).

Перед використанням флакони з дисками витримували при кімнатній температурі 18-25°с протягом 1 год для запобігання утворення конденсату на внутрішній стінці флакона. Розкритий флакон з дисками зберігали при температурі 2-8°C протягом усього терміну придатності набору, за умови збереження кольору індикаторного силікагелю від світло-блакитного до синього. Безпосередньо перед застосуванням диски просочували досліджуваним з'єднанням. В якості контролю використовували диски, просочені: 1) дистильованою водою; 2) діоксидином (виробництво «Біосинтез», розчин для місцевого застосування, ендотрахеальної і внутрішньовенного введення, 10 мг/мл), антибактеріальний препарат, похідне хиноксалина.

Для визначення чутливості ДДМ використовували стандартний инокулюм, відповідний по щільності 0,5 за стандартом Мак-Фарланда і містить приблизно 1,5×108До�м використовували стерильні ватні тампони промислового виробництва (паличка-тампон (пластик-бавовна) CITOSWAB стерильний в індивідуальній упаковці). Тампон занурювали в стандартну суспензію мікроорганізму, потім надлишок инокулюма видаляли, віджавши тампон об стінки пробірки. Проводили інокуляцію штриховими рухами в трьох напрямках, повертаючи чашку Петрі на 60°.

Не пізніше ніж через 15 хв після інокуляції на поверхню живильного середовища наносили диски, просочені досліджуваними сполуками і дистильованою водою. Аплікацію дисків проводили з допомогою стерильного пінцета. Відстань від диска до краю чашки і між дисками становила 15-20 мм. Для рівномірного контакту з поверхнею агару диски акуратно притискали пінцетом.

Безпосередньо після аплікації дисків на поверхню живильного середовища чашки Петрі поміщали в термостат догори дном і інкубували при температурі 37°с протягом 18-24 год (в залежності від виду досліджуваного мікроорганізму).

Після закінчення інкубації чашки поміщали догори дном на темну матову поверхню так, щоб світло падало на них під кутом в 45° (облік у відбитому світлі). Діаметр зон затримки росту вимірювали з точністю до 1 мм за допомогою лінійки лекало (Hi Antibiotic Zone Scale (PW 2097) (Hi Media Laboratories Pvt. Limited, India)).

Ступінь активності досліджуваних сполук визначалася в хрестах за наступною схемою (Вп-04) // Клінічна мікробіологія та антимікробна хіміотерапія. - 2004. - Том 6. - №4. - С. 306-359): «+++» висока активність - діаметр зони затримки росту більше 25 мм; « ++ » - активне-діаметр зони затримки росту 16-25 мм; «+» малоактивне - діаметр зони затримки росту 10-15 мм; «+/-, 0» - неактивне - діаметр зони затримки росту менше 10 мм і повна відсутність.

Статистичну обробку отриманих результатів проводили методами варіаційної статистики, достовірність результатів оцінювали за допомогою методу визначення t-критерію Стъюдента. Достовірними вважали результати при Р≤0,05 (Фісенко В. П. Керівництво по експериментального (доклиническому) вивчення нових фармакологічних речовин / Під ред. В. П. Фісенко, Б. В Арзамасцева, Е. А Бабаян і співавт. - Москва: «Ремедіум», 2000. - 398 с.; Ланг Т. А. Як описувати статистику в медицині / Т. А. Ланг, М. Сесік; пер. з англ. під ред. В. П. Леонова. - М.: Практична медицина, 2011. - 480 с.). В роботі використовували персональний комп'ютер і стандартний пакет прикладних програм Statistica 6.0.

Результати дослідження

Дослідження протимікробної активності досліджуваних сполук методом серійних розведень в бульйоні

Проведено дослідження протимікробної активності (+)-лімонену, (+)-1,2-оксиду лімонену, терпенсульфида 2-(1'-гідрокси-4'-изопропенил-1�s aeruginosa 27853, Streptococcus pyogenes 1238.

В якості препарату порівняння використовувався протимікробний препарат діоксидин (похідне ді-N-оксихиноксалина), широко застосовується в лікувальній практиці. Цей препарат володіє високою хіміотерапевтичне активністю in vitvo на модельних інфекціях, близьких по патогенезу до патологічних процесів у людини (гнійні менінгіти, пієлонефрити, септикопіємії) і викликаних штамами анаеробних бактерій, стійких (у тому числі полірезистентних) до препаратів інших класів, включаючи штами синьогнійної палички і метициллинустойчивих стафілококів. Діоксидин характеризується широким антибактеріальним спектром з бактерицидною дією, активний також відносно грампозитивних і грамнегативних аеробних умовно-патогенних бактерій. Показана активність діоксидину відносно мікобактерій туберкульозу (Падейская Е. Н. Антибактеріальний препарат діоксидин: особливості біологічної дії і значення в терапії різних форм гнійної інфекції / Е. Н. Падейская // Інфекції та антимікробна терапія. - 2011. - Т. 3 - №5. - С. 105-155).

Результати протимікробної активності досліджуваних речовин наведені в таблиці 2.

Тест-1 культураStaphylococcus aureus 29213Escherichia coli 25922Pseudomonas aeruginosa 27853Streptococcus pyogenes 1238
досліджувана речовиналімонен1,2-оксид лімоненутерпен-сульфідлімонен1,2-оксид лімоненутерпен-сульфідлімонен1,2-оксид лімоненутерпен-сульфідлімонен1,2-оксид лімоненутерпен-сульфід
Концентрація речовин у живильному середовищі, мг/мл32,0000000001">16,0000000+/-1+/-10000
8,00000+/-1+/-++++0+/-100
4,0000+++/-++++++0++00
2,0+/-1+/-1+++++++/-1++++/-1+/-1
1,0+++/-1+/-+++++++++++++++++++++++
0,5++++++/-1+++++++++++++++++++++++++++
0,25+++++++++++++++++++++++
0,125++++++++++++++++++++++++++++++++++++
«Негативний» контроль+/-+/-+/-+/-
Примітка: -1титр активності, «+++» - рясний ріст; «++» - глибинний або поверхневий ріст штамів менш багатий; зростання слабкий - неактивний менш 50-30% (+); понад 70% затримки чи відсутність росту культури порівняно з контролем(+/-, 0).

Для препарату порівняння діоксидину МПК щодо штамів Staphylococcus spp. становить 125,0-1000,0 мкг/мл, Escherichia coli 8,0-250,0 мкг/мл, Pseudomonas spp. 125,0-1000,0 мкг/мл, Streptococcus spp. 64,0-1000,0 мкг/мл (Падейская Е. Н. Антибактеріальний препарат діоксидин: особливості биологическЂерапия. - 2011. - Т. 3 - №5. - С. 105-155).

З даних таблиці 2 видно, що (+)-лімонен чинить бактеріостатичну дію на S. aureus 29213 при концентрації 2,0 мг/мл, а при концентрації 4,0 мг/мл повністю інгібує ріст культури. Бактеріостатичну дію на E. coli 25922 (+)-лімонену проявляється при концентрації 4,0 мг/мл, а при концентрації 8,0 мг/мл він повністю інгібує ріст культури. Бактеріостатичну дію на P. aeruginosa 27853 досліджуваний монотерпен надає в концентрації 16,0 мг/мл, а при концентрації 32,0 мг/мл повністю інгібує ріст культури. (+)-лімонен чинить бактеріостатичну дію на S. pyogenes 1238 в концентрації 8,0 мг/мл, а при концентрації 16,0 мг/мл повністю інгібує ріст культури.

(+)-1,2-оксид лімонену чинить бактеріостатичну дію на S. aureus 29213 при концентрації 1,0 мг/мл, а при концентрації 2,0 мг/мл повністю інгібує ріст культури. Бактеріостатичну дію на E. coli 25922 (+)-1,2 оксид лімонену проявляє при концентрації 8,0 мг/мл, а при концентрації 16,0 мг/мл повністю інгібує ріст культури.

Бактеріостатичну дію на P. aeruginosa 27853 досліджуване з'єднання надає в концентрації 16,0 мг/мл, а при концентрації 32,0 мг/мл повністю інгібує ріст культури. (+)-1,2 оксид лімонену оказингибирует зростання культури.

Терпенсульфид 2-(1'-гідрокси-4'-изопропенил-1'-метилциклогексил-2'-тіо)-метил-этаноат чинить бактеріостатичну дію на S. aureus 29213 при концентрації 1,0 мг/мл, а при концентрації 2,0 мг/мл повністю інгібує ріст культури. Бактеріостатичну дію на E. coli 25922 терпенсульфида (I) проявляється при концентрації 2,0 мг/мл, а при концентрації 16,0 мг/мл повністю інгібує ріст культури. Бактеріостатичну дію на P. aeruginosa 27853 досліджувана сполука чинить у концентрації 2,0 мг/мл, а при концентрації 4,0 мг/мл повністю інгібує ріст культури. 2-(1'-Гідрокси-4'-изопропенил-1'-метилциклогексил-2'-тіо)-метилэтаноат чинить бактеріостатичну дію на S. pyogenes 1238 у концентрації 2,0 мг/мл, а при концентрації 4,0 мг/мл повністю інгібує ріст культури.

У всіх пробірках з «негативним контролем» відзначалась затримка росту тест-культур. Проведено 5 послідовностей досвіду.

Таким чином, МПК (+)-лімонену склали відносно S. aureus 29213 - 2,0 мг/мл, E. coli 25922 - 4,0 мг/мл, P. aeruginosa 27853 - 16,0 мг/мл, S. pyogenes 1238 - 8,0 мг/мл

МПК (+)-1,2-оксиду лімонену - S. aureus 29213 - 1,0 мг/мл, E. coli 25922 - 8,0 мг/мл, P. aeruginosa 27853 - 16,0 мг/мл, S. pyogenes 1238 - 2,0 мг/мл

МПК для терпенсульфида - S. aureus 29213 - 0,5 мг/мл, E. coli 25922 - 2,0 мг/�nd="c4">Таблиця 3

Протимікробна активність препарату порівняння діоксидину та досліджуваних речовин
Досліджуваний тест-штам мікроорганізмудіоксидин (мг/мл)(+)-лімонен (мг/мл)(+)-1,2 оксид лімонену (мг/мл)терпенсульфид (I) (мг/мл)
Staphylococcus aureus 292130,125-1,02,01,00,5
Streptococcus pyogenes 12380,064-1,08,02,02,0
Escherichia coli 259220,008-0,2504,08,02,0
Pseudomonas aeruginosa 278530,125-1,016,016,02,0

Досліджувані сполуки володіють антимікробною активністю. Порівняльний аналіз результатів показав, що исследуемиеорганизмов проявив терпенсульфид 2-(1'-гідрокси-4'-изопропенил-1'-метилциклогексил-2'-тіо)-метилэтаноат. Його МПК в 4 рази нижче, ніж у (+)-лімонену, і в 2 рази нижче, ніж у (+)-1,2 оксиду лімонену, відносно золотистого стафілокока; в 2 рази нижче, ніж у (+)-лімонену, і в 4 рази нижче, ніж у (+)-1,2 оксиду лімонену, відносно кишкової палички; в 8 разів нижче, ніж у (+)-лімонену, (+)-1,2 оксиду лімонену, по відношенню до P. aeruginosa і в 4 рази нижче, ніж у (+)-лімонену, по відношенню до пиогенному стрептокока.

Дослідження протимікробної активності досліджуваних сполук диско-дифузійним методом

В ході дослідження музейних штамів мікроорганізмів отримані наступні результати (табл.4). У контрольному експерименті в 100% випадків спостерігався суцільний ріст досліджуваних мікроорганізмів.

Препарат порівняння діоксидин проявив високу активність щодо тест-штамів Citrobacter freundii 101/57, Klebsiella pneumoniae 9172, Proteus vulgaris 222 і Bacillus cereus 96 (P < 0,05). Також чутливі до препарату порівняння виявилися Staphylococcus aureus 906, Streptococcus pyogenes 1238, Salmonella enteritidis 5765 ATCC, Shigella sonnei S-форма 20, Pseudomonas aeruginosa 453 (P < 0,05). На тлі застосування діоксидину значущою затримки росту Escherichia coliM17, Enterococcus faecalis 2919 ATCC не спостерігалося.

(+)-Лімонен виявився активний відносно Streptococcus pyogenes 1238, Escherichia coli М17, Salmonella enteritidis 5765 ATCC, Citrobacter freundii 101/57, Proteus vulgaris 222 (P < 0,05). Високу чутливої шкіри�19 ATCC, Shigella sonnei S-форма 20 і Pseudomonas aeruginosa 453 (+)-лімонен виявився малоактивний.

(+)-1,2 Оксид лімонену проявив активність щодо тест-штамів Staphylococcus aureus 906, Enterococcus faecalis 2919 ATCC, Escherichia coli М17 штам, Salmonella enteritidis 5765 ATCC, Shigella sonnei S-форма 20, Citrobacter freundii 101/57, Pseudomonas aeruginosa 453 (P < 0,05). Висока активність (+)-1,2 оксиду лімонену спостерігалася відносно Klebsiella pneumoniae 9172, Proteus vulgaris 222, Bacillus cereus 96 (P < 0,05).

Чутливими до терпенсульфиду 2-(1'-гідрокси-4'-изопропенил-1'-метилциклогексил-2'-тіо)-метилэтаноату виявилися тест-штами Staphylococcus aureus 906, Streptococcus pyogenes 1238, Enterococcus faecalis 2919 ATCC, Salmonella enteritidis 5765 ATCC, Shigella sonnei S-форма 20, Citrobacter freundii 101/57, Klebsiella pneumoniae 9172, Proteus vulgaris 222, Pseudomonas aeruginosa 453 (P < 0,05). Висока чутливість до полусинтетическому похідним лімонену спостерігалася у Escherichia coli М17 штам і Bacillus cereus 96 (Р < 0,05).

Чутливість досвідчених штамів мікроорганізмів до досліджуваних сполук була наступною (табл.5). Клінічні штами S. aureus були статистично значимо чутливі до (+)-лимонену (Р < 0,05). Зони затримки росту у 43% штамів становила від 16 до 25 мм, у 27% - вище 25 мм.

(+)-1,2 Оксид лімонену показав низьку активність щодо досліджуваних штамів S. aureus, у 75% з них зони затримки росту не перевищували 15 мм.

Дослідження протимікробної активності досліджуваних сполук щодо тест-штамів мікроорганізмів диско-дифузійним методом
Тест-штам / Ступінь активностіконтроль(+)-лімонен(+)-1,2-оксид лімоненутерпенсульфиддіоксидин
Staphylococcus aureus 9060+++*++*++*
Streptococcus pyogenes 12380++*+++*++*
Enterococcus faecalis 2919 ATCC0+++*++*+
Escherichia coli М17 штам0++*++*+++*+
Salmonella entrowspan="1">++*++*
Shigella sonnei S-форма 200+++*++*++*
Citrobacter freundii 101/570++*++*++*+++*
Klebsiella pneumoniae 91720+++*+++*++*+++*
Proteus vulgaris 2220++*+++*++*+++*
Pseudomonas aeruginosa 4530+++*++*++*
Bacillus cereus 960+++*+++*+++*+++*

Терпенсульфид 2-(1'-гідрокси-4'-изопропенил-1'-метилциклогексил-2'-тіо)-метил-этаноат виявився активний відносно 57% клінічних штамів S. aureus (Р < 0,05). Але 43% досліджуваних штамів на тлі застосування терпенсульфида дали затримку росту, що не перевищує 15 мм.

Досліджувані штами S. epidermidis в 64% були чутливі до (+)-лимонену (Р < 0,05). У 55% зона затримки росту становила від 16 до 25 мм, у 9% - вище 25 мм. 23% досліджуваних штамів виявилися не чутливі до досліджуваного монотерпену.

(+)-1,2 Оксид лімонену надав статистично значущий протимікробний ефект щодо клінічних штамів S. epidermidis (Р < 0,05). Причому щодо 40% штамів спостерігалась висока активність, решта 60% дали зони затримки росту від 16 до 25 мм.

Статистично значимо чутливі до 2-(1'-гідрокси-4'-изопропенил-1'-метилциклогексил-2'-тіо)-метилэтаноату виявилися досліджувані клінічні штами S. epidermidis (P < 0,05). Щодо 37% мікроорганізмів даного виду терпенсульфид виявився малоактивний.

Представники сімейства Streptococcus і Enterococcus.

(+)-Лімонен не мав статистично значущого протимікробного ефекту щодо клінічних штамів S. pyogenes (70% - зони затримки росту не більше 15 мм); S. pneumoniae (70% - зони затримки росту не більше 15 мм, 30% - нечутливі); S. uberis (65% - зони затримки росту не більше 15 мм); S. salivarius (55% - зони затримки росту не більше 15 мм); S. mitis (75% - зони затримки росту не більше 15 мм); S. agalactia (64% - зони затримки росту не більше 15 мм); S. sanguinis (78% - зони затримки росту не більше 15 мм); S. mutans (73% - зони затримки росту не більше 15 мм); Е. faecalis (73% - зони затримки росту не більше 15 мм); E. faecium (64% - зони затримки росту не більше 15 мм).

(+)-1,2 Оксид лімонену не мав статистично значущого протимікробного ефекту щодо клінічних штамів S. pneumoniae (70% - зони затримки росту не більше 15 мм, 30% - нечутливі); S. uberis (75% - зони затримки росту не більше 15 мм); S. salivarius (75% - зони затримки росту не більше 15 мм); S. mitis (80% - зони затримки росту не більше 15 мм); S. sanguinis (60% - зони затримки росту не більше 15 мм); S. mutans (100% - зони затримки росту не більше 15 мм); E. faecalis (60% - зони затримки росту не більше 15 мм); E. faecium (96% - зони затримки росту не більше 15 мм). Але щодо S. pyogenes (+)-1,2 оксид лімонену виявив статистично значущий протимікробний ефект (Р < 0,05). 58% досліджуваних штна тлі застосування (+)-1,2 оксиду лімонену дали зони затримки росту від 16 до 25 мм.

Досліджувані штами S. epidermidis в 64% були чутливі до (+)-лимонену (Р < 0,05). У 55% зона затримки росту становила від 16 до 25 мм, у 9% - вище 25 мм. 23% досліджуваних штамів виявилися не чутливі до досліджуваного монотерпену.

(+)-1,2 Оксид лімонену надав статистично значущий протимікробний ефект щодо клінічних штамів S. epidermidis (Р < 0,05). Причому щодо 40% штамів спостерігалась висока активність, решта 60% дали зони затримки росту від 16 до 25 мм.

Статистично значимо чутливі до терпенсульфиду 2-(1'-гідрокси-4'-изопропенил-1'-метилциклогексил-2'-тіо)-метилэтаноату виявилися досліджувані клінічні штами S. epidermidis (Р < 0,05). Щодо 37% мікроорганізмів даного виду терпенсульфид виявився малоактивний.

Представники родини Streptococcaceae виявилися малочутливі до досліджуваних сполук. Були досліджені клінічні штами родів Streptococcus і Enterococcus.

(+)-Лімонен не мав статистично значущого протимікробного ефекту щодо клінічних штамів S. pyogenes (70% - зони затримки росту не більше 15 мм); S. pneumoniae (70% - зони затримки росту не понад 15 мм, 30% - нечутливі); S. uberis (65% - зони затримки росту не більше 15 мм); S. salivarius (55% - зоболее 15 мм); S. sanguinis (78% - зони затримки росту не більше 15 мм); S. mutans (73% - зони затримки росту не більше 15 мм); E. faecalis (73% - зони затримки росту не більше 15 мм); E. faecium (64% - зони затримки росту не більше 15 мм).

(+)-1,2 Оксид лімонену не мав статистично значущого протимікробного ефекту щодо клінічних штамів S. pneumoniae (70% - зони затримки росту не більше 15 мм, 30% - нечутливі); S. uberis (75% - зони затримки росту не більше 15 мм); S. salivarius (75% - зони затримки росту не більше 15 мм); S. mitis (80% - зони затримки росту не більше 15 мм); S. sanguinis (60% - зони затримки росту не більше 15 мм); S. mutans (100% - зони затримки росту не більше 15 мм); E. faecalis (60% - зони затримки росту не більше 15 мм); E. faecium (96%) - зони затримки росту не більше 15 мм). Але щодо S. pyogenes (+)-1,2 оксид лімонену виявив статистично значущий протимікробний ефект (Р < 0,05). 58% досліджуваних штамів виявилися чутливі до (+)-1,2 оксиду лімонену, 42% - високочутливі. 50% клінічних штамів S. agalactia на тлі застосування (+)-1,2 оксиду лімонену дали зони затримки росту від 16 до 25 мм.

Терпенсульфид 2-(1'-гідрокси-4'-изопропенил-1'-метилциклогексил-2'-тіо)-метилэтаноат виявив статистично достовірний протимікробний ефект щодо клінічних штамів S. pyogenes, S. pneumoniae, E. faecalis (Р < 0,05).именения терпенсульфида (I) досліджувані штами S. uberis у 63% дали зони затримки росту не більше 15 мм, S. salivarius - 75%, S. mitis - 71%, S. agalactia - 100%, S. sanguinis - 65%, S. mutans - 75%, E. faecium - 100%.

Найбільш виражену активність досліджувані сполуки проявили щодо представників сімейства Enterobacteriaceae.

(+)-Лімонен виявив статистично значущий протимікробний ефект щодо клінічних штамів E. coli, S. enteritidis, S. sonnei, E. aerogenes, K. pneumoniae, K. oxytoca (P < 0,05). Досліджувані штами E. coli в 49% виявилися чутливі до досліджуваного монотерпену, у 31% - високочутливі. 89% штамів S. enteritidis виявилися чутливі до досліджуваного (+)-лимонену. Щодо клінічних штамів S. sonnei (+)-лімонен в 30% виявився активним, у 70% - високоактивним. 100% досліджуваних штамів E. aerogenes на тлі застосування (+)-лімонен дали затримку росту від 16 до 25 мм. Досліджувані штами K. pneumoniae у 57% виявилися чутливі до досліджуваного монотерпену, у 29% - високочутливі. 33% досліджуваних штамів K. oxytoca на тлі застосування (+)-лімонену дали затримку росту від 16 до 25 мм, 17% - вище 25 мм. В 100% (+)-лімонен виявився неактивний або малоактивний відносно досліджуваних штамів P. vulgaris, P. mirabilis, E. cloaceae. Клінічні штами С. freundii у 74% на тлі застосування (+)-лімонену дали затримку росту не більше 15 мм.

(+)-1,2 Оксид лімонену проявив з�. erogenes, K. pneumoniae, K. oxytoca, P. vulgaris, P. mirabilis (P < 0,05). Досліджувані штами E. coli у 57% виявилися чутливі до досліджуваного з'єднанню, у 43% - високочутливі (Р < 0,05). 44% штамів S. enteritidis виявилися чутливі до досліджуваного (+)-1,2 оксиду лімонену, 56% - високочутливі. Щодо клінічних штамів S. sonnei (+)-1,2 оксид лімонену в 25% виявився активним, у 75% - високоактивним. Клінічні штами С. freundii у 85% на тлі застосування (+)-1,2 оксиду лімонену дали затримку росту від 16 до 25 мм, в 15% - понад 25 мм. 75% досліджуваних штамів E. aerogenes на тлі застосування (+)-1,2 оксиду лімонену дали затримку росту від 16 до 25 мм. Досліджувані штами K. pneumoniae у 34% виявилися чутливі до досліджуваного з'єднанню, у 55% - високочутливі. 26% досліджуваних штамів K. oxytoca на тлі застосування (+)-1,2 оксиду лімонену дали затримку росту від 16 до 25 мм, 74% - вище 25 мм. P. vulgaris та P. mirabilis виявилися чутливі до досліджуваного препарату, і на тлі його застосування зони затримки росту досліджуваних штамів склали 64 і 76% відповідно від 16 до 25 мм, 22 і 14% відповідно вище 25 мм. В 100% (+)-1,2 оксид лімонену виявився малоактивний відносно досліджуваних штамів E. cloaceae.

Терпенсульфид 2-(1'-гідрокси-4'-изопропенил-1'-метилциклогексил-2'-тіо)-метилэтаноат про�reundii, K. pneumoniae, K. oxytoca (P < 0,05). Досліджувані штами E. coli в 67% виявилися чутливі до досліджуваного 2-(1'-гідрокси-4'-изопропенил-1'-метилциклогексил-2'-тіо)-метилэтаноату. 90% штамів S. enteritidis виявилися чутливі до досліджуваного терпенсульфиду. Щодо клінічних штамів S. sonnei терпенсульфид 2-(1'-гідрокси-4'-изопропенил-1'-метилциклогексил-2'-тіо)-метилэтаноат у 87% виявився активним. 100% досліджуваних штамів C. freundii на тлі застосування терпенсульфида дали затримку росту від 16 до 25 мм. Досліджувані штами K. pneumoniae у 63% виявилися чутливі до досліджуваного з'єднанню. 53% досліджуваних штамів K. oxytoca на тлі застосування терпенсульфида дали затримку росту від 16 до 25 мм. В 100% терпенсульфид 2-(1'-гідрокси-4'-изопропенил-1'-метилциклогексил-2'-тіо)-метилэтаноат виявився малоактивний відносно досліджуваних штамів P. vulgaris, P. mirabilis, E. cloaceae, E. aerogenes.

Досліджувані сполуки виявилися малоактивні стосовно клінічних штамів P. aeruginosa.

Отримані дані свідчать про наявність протимікробної активності (+)-лімонену, (+)-1,2 оксиду лімонену і, в особливості, сульфіду лімонену щодо тест-штамів грамнегативних і грампозитивних мікроорганізмів.

Терпенсульфид 2-(1'-гідрокси-4'-изопро�енение 2-(1'-гідрокси-4'-изопропенил-1'-метилциклогексил-2'-тіо)-метилэтаноата
формули I:

у якості протимікробного засобу.



 

Схожі патенти:
Запропонована група винаходів відноситься до галузі ветеринарії. Запропоновані вакцина, спрямована проти актинобациллезной плевропневмонії, що включає ліпополісахарид в комплексі з одним або більше повторів токсинів ApxI, ApxII і ApxIII, виділений з бактеріальної культури, і поліміксин для зменшення симптомів эндотоксического шоку, спричиненого липополисахаридом, спосіб отримання такої вакцини, застосування поліміксину для зниження симптомів эндотоксического шоку і спосіб зниження симптомів эндотоксического шоку при введенні вакцини, в якому поліміксин додають у вакцину в дозі від 2,6 до 60 мкг/мл Запропонована група винаходів забезпечує ефективні засоби й методи для зменшення симптомів эндотоксического шоку, спричиненого липополисахаридом, при введенні вакцини проти актинобациллезной плевропневмонії тварині. 4 н. і 10 з.п. ф-ли, 4 табл., 4 пр.
(57) Винахід відноситься до галузі ветеринарії і призначене для лікування та профілактики респіраторних і шлунково-кишкових захворювань бактеріальної і мікоплазмової етіології тварин. Комплексний антибактеріальний препарат для тварин, що містить з'єднання з групи фторхінолонів та допоміжні речовини, що відрізняється тим, що додатково містить з'єднання з групи плевромутилинов в ефективному кількості. Заявлений винахід ефективно проти вегетативних і спорових форм бактерій нешкідливе, не володіє алергенними властивостями, надає стимулюючий вплив на показники гуморальної імунної відповіді і стабільно при зберіганні. 5 з.п. ф-ли, 9 пр.
(57) Винахід відноситься до галузі ветеринарії і призначене для лікування тварин з бактеріальними ентерити. Засіб містить енрофлоксацин та допоміжні речовини. Засіб додатково містить гумати торфу або сапропелю, при наступному співвідношенні компонентів, мас.%: енрофлоксацин субстанція - 0,5; лужний розчин гуматів (рН=12-13) - 80; бурштинова кислота - до рН 10-11; пропіленгліколь - інше. Засіб вводять з рідким кормом один раз на день протягом трьох-п'яти днів у дозі від 0,5 до 1,0 мл на 1 кг маси тіла. Використання заявленого кошти забезпечує прояв вираженого лікувального дії. 5 табл., 2 пр.

Спосіб отримання 7-гидроксиройлеанона, володіє антимікробною дією

Винахід відноситься до способу отримання 7-гидроксиройлеанона, володіє антимікробною дією. Зазначений спосіб включає екстракцію подрібнених коренів шавлії лікарської 96% етиловим спиртом з наступним упариванием екстракту, обробкою водою, відгоном спирту і обробкою гідрофобним розчинником або екстракцію зазначеного сировини хлороформом з наступною обробкою екстракту водою і упариванием; потім цільовий продукт витягують з органічної фази переведенням у розчинні у воді феноляти, обробляючи водним розчином гідроксиду натрію; промивають лужний розчин хлороформом; підкислюють соляною або сірчаною кислотою; отриманий осад відфільтровують; сушать і подрібнюють. Винахід характеризується покращеною технологічністю процесу і забезпечує отримання з коренів шавлії лікарської індивідуального речовини з більш високою антимікробною активністю, ніж раніше виділені похідні ройлеанона. 2 табл., 6 пр.
Винахід відноситься до біотехнології та ветеринарії і стосується штаму збудника псевдомонозу свиней, колекції ФГБУ ВГНКИ, депонованого під найменуванням «Pseudomonas aeruginosa №9» та реєстраційним номером№9-ДЕП», призначеного для виготовлення вакцини проти псевдомонозу свиней. Винахід забезпечує високу імуногенну активність і можливість виготовлення вакцини проти псевдомонозу свиней. 4 пр., 3 табл.

Спосіб подолання стійкості до гентаміцину у метициллинорезистентних штамів стафілокока

Винахід відноситься до галузі медицини, а саме до клінічної мікробіології та антимікробної хіміотерапії, і стосується розробки і створення нових комбінацій, які забезпечують потенціювання бактерицидної дії і ефективне придушення гнійної інфекції, спричиненої метициллинорезистентними стафілококами, на основі використання двох класів сполук, що володіють принципово різним механізмом антимікробної дії. 2 іл., 6 табл.

Краплі плетньова, які мають противірусну та імуномодулюючу ефектами

Винахід відноситься до фармацевтичної промисловості, а саме до краплях, що володіє противірусною та імуномодулюючою ефектами. Краплі, які мають противірусну та імуномодулюючу ефектами, що характеризуються тим, що вони являють собою настоянку на 95%-вому етиловому спирті листя суниці і плодів, вибраних з ряду: плоди малини звичайної, плоди горобини звичайної, плоди чорниці звичайної, плоди глоду криваво-червоного, плоди шипшини травневої, при вмісті 15-25 мг субстанції в 1 мл настойки. Вищеописані краплі мають виражену противірусну та імуномодулюючу ефектами. 15 табл., 5 пр.

Полімерні кетиминовие похідні антибіотика доксицикліну

Винахід відноситься до хімії біологічно активних полімерів, конкретно до полімерним кетиминовим похідним доксицикліну, які одержують шляхом конденсації доксицикліну гідрохлориду з катионними сополімерами акриламіду з 2-амимноэтилметакрилатом (ММ=16-20 кДа), при молярному співвідношенні сополімер/антибіотик, що дорівнює 1.1-2.0/1 у водному розчині з pH 8.0 при 23°C. Технічний результат - полімерні кетиминовие похідні доксицикліну, які нетоксичні і поєднують в собі антимікробні та иммуносупрессорние властивості. 1 з. п. ф-ли, 1 табл., 3 пр. де: m=(78.0-80.0) мол.%; n=(10.0-14.0) мол.%; k=(6.0-12.0) мол.%

Терапевтичні пептиди

Даний винахід відноситься до пептиду, пептидомиметику або похідним амінокислоти, які містять двузамещенную β-амінокислоту, в якій кожна з заміщають груп β-амінокислоти, які можуть бути однаковими або різними, включає щонайменше 7 неводневих атомів, є липофильной і включає щонайменше одну циклічну групу, причому одна або більше циклічних груп у замісної групі можуть бути пов'язані або конденсировани з одним або більшим числом циклічних груп в інший замісної групі, і коли циклічні групи злиті таким чином, сукупна загальна кількість неводневих атомів для таких двох заміщають груп становить щонайменше 12, де зазначений пептид, пептидомиметик або похідне амінокислоти складаються з 1-4 амінокислот або еквівалентних по довжині субодиниць. 3 н. і 14 з.п. ф-ли, 4 іл., 10 табл., 4 пр.

Інгібування організмів біоплівки

Група винаходів відноситься до галузі фармацевтики та медицини і стосується застосування цистеаміну в лікуванні мікробної інфекції, викликаної мікробної біоплівки, а також до продукту, що містить щонайменше два агента проти біоплівки, де щонайменше один агент проти біоплівки являє собою антимікробний пептид, а другий агент проти біоплівки являє собою цистеамін. Також запропоновано застосування цього продукту в лікуванні мікробної інфекції та спосіб запобігання утворення мікробної біоплівки в середовищі. Група винаходів забезпечує підвищену антибактеріальну активність у порівнянні з активністю будь-якого з'єднання окремо. 8 н. і 5 з.п. ф-ли, 33 іл., 2 табл.

Композиції для гігієни порожнини рота та способи

Група винаходів відноситься до медицини, а саме до стоматології, і може бути використана для лікування станів, пов'язаних з підвищеною експресією ММП-13, вибраних з групи, що складається з втрати фіксації одного або більше зубів, випадання зубів, рухливості зубів, освіти кишень, втрати кісткової тканини та комбінації двох і більше зазначених станів. Для цього запропоновано застосування 4-ацетамидофенил 2-ізопропіл-5-метилциклогексилкарбоната у виробництві лікарського засобу для лікування цих станів. Запропоновано також композиція для догляду за зубами, що містить орально прийнятний носій і терапевтично ефективна кількість інгібітора ММП-13 у вигляді 4-ацетамидофенил 2-ізопропіл-5-метилциклогексилкарбоната. Група винаходів забезпечує ефективне лікування зазначених станів за рахунок ефективного придушення ММП-13. 2 н. і 1 з.п. ф-ли, 5 табл., 5 пр.
Винахід відноситься до медицини, а саме до кардіології та хірургії, і стосується лікування хворих з критичною ішемією нижніх кінцівок і многососудістого ураженням коронарного русла. Для цього при виконанні термінового оперативного втручання на судинах нижніх кінцівок попередньо в стравохід встановлюють електрод для транспищеводной передсердної тимчасової електрокардіостимуляції (ТПВЭКС). Потім внутрішньовенно вводять бета-блокатор в навантажувальній дозі до досягнення брадикардії з ЧСС ≤ 60 уд/хв. Далі дозу бета-блокатора знижують до підтримуючої із збереженням синусової брадикардії з ЧСС від 72 до 74 ударів в хвилину і за допомогою електрода для ТПВЭКС утримують таку ЧСС на час оперативного втручання і при необхідності протягом 2-3 днів після нього. Операцію з реконструкції коронарних артерій виконують не раніше ніж через 3-4 тижні після оперативного втручання на судинах нижніх кінцівок. Така тактика лікування забезпечує профілактику синдрому малого серцевого викиду та інших побічних ефектів з боку серцево-судинної системи при реконструктивних втручаннях на артеріях нижніх кінцівок, що дозволяє потім в строк через 3-4 тижні викон

Фармацевтичні склади, що містять 9-цис-ретиниловие складні ефіри в ліпідному наповнювачі

Винахід відноситься до області фармацевтики, а саме являє собою фармацевтичні склади, що містять 9-цис-ретиниловие складні ефіри в ліпідному наповнювачі. Фармацевтичні склади, що містять 9-цис-ретиниловие складні ефіри описуються для застосування в ретиноидной замісної терапії для лікування дегенераций сітківки у людей. 6 н. і 67 з.п. ф-ли, 14 іл., 2 табл., 6 пр.

Потенціал калебина а як засіб проти ожиріння

Винахід відноситься до медицини і фармації і являє собою спосіб інгібування адипогенеза, який включає стадію, в ході якої адипоцити приводять у контакт з ефективним кількістю калебина A. Винахід забезпечує розширення арсеналу засобів проти ожиріння. 6 н. і 8 з.п. ф-ли, 3 ін., 3 табл., 7 іл.
Винахід відноситься до біотехнології і фармацевтичної промисловості і являє собою композицію, що володіє антибактеріальним, імуностимулюючу, протиалергічну і протизапальну дію, містить корисні для організму людини продукти життєдіяльності бактерій у вигляді экзометаболитов і продуктів ферментолиз, що відрізняється тим, що вона являє собою середовище культивування молочнокислих бактерій, що містить лаксаран в кількості 5-10 г/мл, казеицин, исрацидин або їх суміш і лектини в кількості 0,05-2,5 моль/л, гістамін в кількості 0,8-2,0 ммоль/л і монокарбонові жирні кислоти з нерозгалуженим ланцюгом, а саме: оцтову кислоту, пропіонова кислота, масляну кислоту та валеріанову кислоту - в кількості 10-20 мг/мл Винахід забезпечує розширення арсеналу засобів, що мають взаємодоповнюючим антибактеріальну, імуномодулюючу, протиалергічну і протизапальну дію. 3 з.п. ф-ли, 5 пр.
Винахід відноситься до галузі ветеринарії і призначене для лікування запалення вимені у корів. Засіб для лікування запалення вимені у корів включає йод кристалічний 10-12 г, полівінілпіролідон 100-102 р і додатково в г/1000 мл: Віск емульсійний 10-12 Моностеарат гліцерину 50-52 Віск бджолиний 10-12 Олія соняшникова рафінована 77-78 Масло вазелінове медичне 28-29 Гліцерин 35-37 Очищена вода Решта до 1000 мл Технічний результат полягає в тому, що пропонований засіб дозволяє проводити за короткий термін ефективне лікування фібринозного, серозного та гнійного маститу і при цьому не використовувати антибіотики та їх похідні, сульфаніламіди та нітрофурани і таким чином виключити побічну негативну дію кошти на організм тварин, а також скоротити економічні витрати більш ніж в 3 рази. 1 табл., 3 пр.
Винаходом надана композиція есмололу у формі концентрованого розчину, що включає: а) від 40 до 60 мг/мл есмололу гідрохлориду; b) від 0,01 до 2 м буферного агента; де значення рН розчину знаходиться в інтервалі від 4,0 до 6,0. Розчин вільний від агента, що регулює осмотичний тиск. Розчин є стерильним, готовим до застосування і упакованим в контейнер. Запропонована композиція есмололу є більш безпечною в порівнянні з використовуваними в даний час, дозволяючи лікаря більш гнучко вибирати обсяг ударної дози для прямої ін'єкції пацієнту. Застосування композиції есмололу щодо винаходу забезпечує зниження можливих несприятливих наслідків для здоров'я в результаті неправильного дозування композицій концентрату есмололу попереднього рівня. Запропоновано медичний продукт, який містить концентрований розчин есмололу, вміщений у контейнер, і упаковку, що містить контейнер і інструкції по застосуванню. 2 н. і 7 з.п. ф-ли, 3 табл., 1 пр.

Фармацевтична композиція, що містить похідне пиразина, і спосіб застосування похідного пиразина в комбінації

Винахід відноситься до фармацевтичної комбінації та її застосування для лікування інфекції, викликаної вірусом грипу

Бициклическое похідне гамма-амінокислоти

Винахід відноситься до з'єднання загальної формули (I), у формі оптичних ізомерів або їх сумішей, і його фармакологічно прийнятним солей, що володіють активністю в якості ліганда2і спорідненістю зв'язування з субодиницею2залежних від напруги кальцієвих каналів
Винахід відноситься до медицини, а саме до офтальмології, і може бути використано для поліпшення функціонально-естетичних результатів пластичної хірургії посттравматичних деформацій століття. Для цього починаючи з 7-8 дня від моменту виконання блефаропластики посттравматичної рубцевої деформації століття, відразу після зняття операційних швів, на оперовану зону століття проводять процедуру магніто-фотофореза лікарського розчину, виготовленого з 3000 ME лонгидази, 3 мл 25% розчину диметилсульфоксиду і 1 мл 0,25% розчину дерината, при цьому 2 мл приготовленого розчину наносять на аутодермальний трансплантат і на навколишнє його здорову шкіру, відступаючи від краю рани до 1 см, через 3-5 хвилин накладають на оброблену поверхню шкірного покриву марлеву прокладку, просочену 2 мл залишився виготовленого розчину, і контактним методом протягом 10 хвилин впливають біжучим імпульсним магнітним полем апарату «АМО-АТОС» з частотою проходження імпульсів 5-10 Гц. Потім, знявши прокладку, без тимчасового інтервалу, обробляють кордону змикання аутодермального трансплантата і здорової шкіри інфрачервоним лазерним випромінюванням діапазону 0,89 мкм апарату ВІЗЕРУНОК-2К з частотою проходження импульѵние 10 днів. Винахід забезпечує поліпшення якості приживлення шкірного трансплантата, відсутність вторинних деформацій століття, зниження тривалості післяопераційного лікування. 1 табл., 2 пр.
Up!